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重组人CC16蛋白抑制香烟烟雾提取物诱导的人气道上皮细胞及COPD小鼠肺组织衰老相关分泌表型
1
作者 杜凯艳 李婷 +6 位作者 刘超锋 栗馨洋 张晶煜 郭民 陈朝阳 庞敏 王海龙 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第2期294-302,共9页
目的:评价重组人CC16蛋白(recombinant human CC16 protein,rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人气道上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)及慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary d... 目的:评价重组人CC16蛋白(recombinant human CC16 protein,rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人气道上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)及慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠肺组织衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)的影响,并探讨其机制。方法:5%CSE诱导HBECs衰老,250 ng/mL rhCC16干预衰老的HBECs,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)染色法分析HBECs内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot检测衰老相关异染色灶(senescence associated heterochromatic foci,SAHF)标志物第9位赖氨酸三甲基化的组蛋白H3(trimethylated histone H3 at lysine 9,H3K9me3)含量;RT-qPCR和ELISA分别检测HBECs中SASP指标[白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、趋化因子(C-X-C基序)配体1[chemokine(C-X-C motif)ligand 1,CXCL-1]、基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)和MMP3的mRNA和蛋白表达。被动吸烟法制备COPD小鼠,从熏烟16周开始,在熏烟前2 h用2.5μg/g体重rhCC16或等体积PBS对熏烟小鼠进行滴鼻干预制备COPD+rhCC16组或COPD+PBS组,造模及干预(24周)结束后DCFH-DA染色法检测小鼠肺组织细胞中ROS含量,Western blot检测各组小鼠肺组织SAHF标志物H3K9me3含量;RT-qPCR和ELISA分别检测小鼠肺组织及肺组织匀浆液中SASP相关指标(IL-1β、IL-6、IL-8、CXCL-1、MMP1和MMP3)的mRNA和蛋白表达。结果:DCFH-DA染色结果显示CSE刺激可以增加HBECs中ROS含量,rhCC16干预则减少HBECs中ROS含量(P<0.01);Western blot结果显示CSE刺激可以增加HBECs的SAHF,而rhCC16干预则减少SAHF(P<0.01);RT-qPCR和ELISA结果显示CSE刺激可以增加HBECs中IL-1β、IL-6、IL-8、CXCL-1、MMP1和MMP3 mRNA表达及其蛋白含量,rhCC16干预则减少HBECs中上述指标的表达(P<0.05);DCFH-DA染色结果显示COPD小鼠肺组织细胞中ROS含量增加,rhCC16干预则减少其含量(P<0.01);Western blot结果显示COPD小鼠肺组织中SAHF增加,而rhCC16干预则减少SAHF(P<0.01);RT-qPCR和ELISA结果显示COPD小鼠肺组织中IL-1β、IL-6、IL-8、CXCL-1、MMP1和MMP3 mRNA表达及其蛋白含量增加,rhCC16干预则减少上述指标的表达(P<0.05),PBS干预组与COPD组小鼠肺组织上述指标变化差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:rhCC16能有效抑制CSE诱导的HBECs及COPD小鼠肺组织中SASP的产生,其机制可能与ROS-H3K9me3信号通路的抑制有关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 重组人CC16蛋白 香烟烟雾提取物 活性氧 第9位赖氨酸三甲基化组蛋白H3 衰老相关分泌表型
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重组CC16蛋白质抑制香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞衰老的初步研究 被引量：1
2
作者 李婷 杨晓雪 +3 位作者 高睿 栗馨洋 王海龙 庞敏 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1410-1416,共7页
目的探讨重组人CC16蛋白质(rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)衰老的抑制作用及机制。方法CCK-8法检测CSE(0%、1%、2.5%、5%、7.5%和10%)及rhCC16(... 目的探讨重组人CC16蛋白质(rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)衰老的抑制作用及机制。方法CCK-8法检测CSE(0%、1%、2.5%、5%、7.5%和10%)及rhCC16(0、10、100、250和500 ng/mL)对HBECs细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测对照组、CSE组以及CSE+rhCC16组细胞β-半乳糖苷酶活性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞P16、P21 mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞P16、P21、p-P53、P38、p-P38、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果与对照组相比,5%CSE刺激细胞72 h对HBECs细胞活力无显著影响;500 ng/mL及以下浓度rhCC16对HBECs细胞活力无显著影响;与对照组相比,5%CSE刺激HBECs细胞72 h致β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显升高(P<0.05),且P16和P21蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),p-P53、p-P38与p-ERK1/2蛋白表达量显著增加(P<0.05);与CSE组相比,250 ng/mL rhCC16干预下,HBECs细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率显著下降(P<0.05),P16和P21蛋白和mRNA表达水平显著下降(P<0.05),p-P53、p-p38和p-ERK1/2的表达量降低(P<0.05)。结论rhCC16蛋白质抑制香烟烟雾诱导的HBECs衰老,抑制P38 MAPK和ERK1/2信号通路可能是其作用机制。 展开更多
关键词 细胞衰老 香烟烟雾提取物 CC16蛋白质 P38 MAPK/ERK1/2
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基于PPARγ信号通路研究香烟烟雾提取物干预不同时间下对肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能影响的分子机制
3
作者 周哲旭 陈星 +3 位作者 王省 尚艺婉 刘洋 陈玉龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1364-1372,共9页
目的:观察香烟烟雾提取物(CSE)干预不同时间下肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能的变化,探讨其对肺部疾病炎症反应的影响及分子机制。方法:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383采用10%CSE分别干预6 h、12 h、24 h、48 h,分为6 h空白对照组、6 h-10%CSE组、... 目的:观察香烟烟雾提取物(CSE)干预不同时间下肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能的变化,探讨其对肺部疾病炎症反应的影响及分子机制。方法:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383采用10%CSE分别干预6 h、12 h、24 h、48 h,分为6 h空白对照组、6 h-10%CSE组、12 h空白对照组、12 h-10%CSE组、24 h空白对照组、24 h-10%CSE组、48 h空白对照组、48 h-10%CSE组。10%CSE干预12 h后联用PPAR抑制剂/激动剂,分为PPAR抑制剂组、PPAR激动剂组。Alamar Blue法检测PPAR激动剂对NR8383细胞增殖及毒性作用;流式细胞术检测NR8383细胞胞葬、吞噬功能及M1、M2极化分型;酶联免疫吸附实验检测TNF-α、TGF-β1、MFG-E8含量;免疫印迹法检测PPARγ信号通路及下游分子CD36蛋白表达;qPCR检测PPARγ、CD36 mRNA的表达。结果:10%CSE干预6 h后,NR8383细胞吞噬及胞葬功能均有所升高,PPARγ表达下调,CD36 mRNA表达增加,TNF-α、TGF-β1、MFG-E8表达均升高,但无明显极化方向;干预12 h,NR8383细胞吞噬功能及胞葬率显著降低,PPARγ、CD36表达显著下调,TNF-α表达增强,TGF-β1、MFG-E8表达降低,向M1型巨噬细胞极化;干预24 h后,NR8383细胞胞葬率降低,但吞噬大肠杆菌的功能增强,PPARγ表达下调,CD36蛋白表达降低,TNF-α表达降低但差异无统计学意义,TGF-β1、MFG-E8表达仍处于降低状态,有明显的M1型极化倾向;48 h后NR8383细胞胞葬率仍旧降低,但吞噬能力显著提升,PPARγ表达显著降低,CD36表达显著增加,TNF-α表达降低,TGF-β1、MFG-E8表达增加,巨噬细胞向M1、M2方向极化均增加。选择10%CSE干预12 h联合PPAR激动剂、抑制剂后发现,PPAR激动剂增强NR8383细胞胞葬及吞噬能力,上调PPARγ、CD36表达,抑制炎症因子TNF-α表达,促进抑炎因子TGF-β1、胞葬辅助因子MFG-E8表达。结论:随着CSE干预时间的变化,肺泡巨噬细胞从早期炎症反应的活化状态,逐渐进展为慢性炎症反应状态,进而导致肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能障碍,该机制与PPARγ通路被抑制有关。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 肺泡巨噬细胞 胞葬功能 吞噬功能 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ
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香烟烟雾提取物对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响
4
作者 秦颖 葛化冰 刘琪 《北京口腔医学》 CAS 2024年第3期184-189,共6页
目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响。方法首先制作CSE溶液,实验采用7周龄C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导生成破骨细胞,将浓度为5%的CSE加入实验组破骨... 目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响。方法首先制作CSE溶液,实验采用7周龄C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导生成破骨细胞,将浓度为5%的CSE加入实验组破骨细胞作用3 d,对照组不加入CSE。通过Trap染色识别对照组和实验组破骨细胞并于光镜下采图;通过甲苯胺蓝染色识别两组破骨细胞在骨片上形成的骨陷窝并于光镜下采图,均用NIH imageJ计算数量及面积。用实时荧光定量聚合酶链反应,以GAPDH作为内参,最后通过2-ΔΔCT计算,以检测Trap、CTR以及整合素αvβ3 mRNA表达水平。通过Western blot检测整合素αvβ3蛋白表达。结果破骨细胞表面积及细胞核数量的计量表明,实验组诱导形成的破骨细胞显著大于对照组(P<0.01)。实验组骨片上吸收陷窝数量及面积明显多于对照组(P<0.05),CSE处理组的TRAP mRNA水平为1.16±0.13,明显高于对照组(P<0.05),CTRmRNA水平为0.38±0.04,明显低于对照组(P<0.01)。CSE处理组的整合素αvβ3mRNA水平为1.75±0.05,显著高于对照组(P<0.01),蛋白质印迹分析结果也明显高于对照组(P<0.05)。结论CSE能显著增加破骨细胞的体积并上调整合素αvβ3的基因表达,并可能对骨吸收有促进作用。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 破骨细胞 骨吸收陷窝 整合素ΑVΒ3 细胞迁移
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一氧化氮对香烟烟雾提取物诱导大鼠肺泡巨噬细胞核因子κB活化的影响 被引量：18
5
作者 杨丹蕾 徐永健 +1 位作者 张珍祥 李超乾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期7-9,共3页
目的:探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF—κB)活化的影响及机 制。方法:将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养,... 目的:探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF—κB)活化的影响及机 制。方法:将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养,用免疫细胞化学染色法检测NF-κB,用Western blot检测I-κB蛋白含量,用Griess法测定培养上清液中NO的水平。结果:CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加,I-κB的水平下降。加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM;而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM。加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM,而I-κB的水平无显著变化。加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM;而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM,并呈浓度依赖(P<0.01)。结论:内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 一氧化氮 香烟烟雾提取物 大鼠 肺泡巨噬细胞 核因子КB
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香烟烟雾提取物对人呼吸道上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响 被引量：8
6
作者 付强 成静 +7 位作者 韩中博 李小兰 陈小燕 张鹏 肖徽 陶德定 胡俊波 龚建平 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1191-1197,共7页
背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normalhumanbronchialepithelialcells,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起... 背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normalhumanbronchialepithelialcells,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况。方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测两种细胞活性。荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strandbreaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤。用免疫印迹检测γ-H2AX表达。同时,亚G1峰法(SubG1peak)和AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡。用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化。结果:MTT结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低。CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4h左右,然后逐渐降低。DNA损伤后平均12h可以出现凋亡。另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4h后方可出现。结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系。 展开更多
关键词 肺肿瘤/化学诱导 香烟烟雾提取物/毒性 Γ-H2AX DNA损伤 凋亡 流式细胞术
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不同剂量香烟烟雾提取物对阴茎海绵体NOS活性和Cx43蛋白的影响 被引量：5
7
作者 刘小兵 吴天鹏 +1 位作者 詹运运 王朝阳 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期351-355,共5页
目的:探讨不同剂量的香烟烟雾提取物对雄性大鼠勃起功能的影响,进一步研究吸烟导致ED的发病机制。方法:75只健康雄性SD大鼠(8周龄),随机分为5组(15只/组)。A组为对照组;B组为皮下注射二甲基亚砜(DMSO)组;C组为皮下注射香烟烟雾提取物(C... 目的:探讨不同剂量的香烟烟雾提取物对雄性大鼠勃起功能的影响,进一步研究吸烟导致ED的发病机制。方法:75只健康雄性SD大鼠(8周龄),随机分为5组(15只/组)。A组为对照组;B组为皮下注射二甲基亚砜(DMSO)组;C组为皮下注射香烟烟雾提取物(CSE)低剂量组;D组为皮下注射CSE中剂量组;E组为皮下注射CSE高剂量组。应用SD雄性大鼠建立皮下注射CSE模型60 d后,经皮下注射阿朴吗啡(APO)后观察大鼠阴茎勃起情况,处死大鼠取阴茎海绵体组织。一部分标本采用激光共聚焦扫描显微镜方法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达;另一部分标本采用比色法测定大鼠阴茎海绵体组织中NOS活性。结果:不同剂量CSE组阴茎勃起次数、阴茎海绵体组织NOS活性和海绵体平滑肌中Cx43表达与DMSO组和对照组比较均明显减少(P<0.05)。实验组中,阴茎勃起次数、阴茎海绵体组织NOS活性和Cx43表达均随着CSE剂量的增加而减少。DMSO组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CSE使阴茎海绵体组织NOS活性明显降低、海绵体平滑肌中Cx43蛋白表达明显减少并且严重影响阴茎勃起功能,并且CSE剂量越大,其影响越明显。提示,Cx43蛋白表达下调、NOS活性降低可能是CSE导致ED的发病机制之一。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 勃起功能障碍 一氧化氮合酶 缝隙连接蛋白43 大鼠
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香烟烟雾提取物致体外皮肤成纤维细胞损伤和对胶原合成的影响 被引量：4
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作者 钱革 蒋法兴 +4 位作者 周武庆 王千秋 李晓武 钟铭英 郑波 《中国康复理论与实践》 CSCD 2007年第5期440-443,F0003,共5页
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对体外培养的皮肤成纤维细胞的损伤作用,观察CSE对成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响作用。方法在光镜下观察染毒后细胞形态和结构的变化;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的CSE在不同的时间对体外皮... 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对体外培养的皮肤成纤维细胞的损伤作用,观察CSE对成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响作用。方法在光镜下观察染毒后细胞形态和结构的变化;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的CSE在不同的时间对体外皮肤成纤维细胞存活力的影响,并绘制不同浓度下细胞的生长曲线;β-半乳糖苷酶染色方法检测CSE连续作用5代后成纤维细胞β-半乳糖苷酶的变化情况;流式细胞仪检测不同浓度的CSE作用下和不同染毒时间的细胞周期变化情况;RT-PCR检测不同浓度的CSE对成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响。结果染毒后光镜下呈典型的损伤细胞形态;随着CSE染毒浓度的增大和时间的延长,细胞存活力明显下降;细胞生长曲线示各染毒组细胞生长速度较对照组明显减慢;染毒后细胞经5次传代后β-半乳糖苷酶染色呈明显的阳性,对照组染色为阴性;细胞周期动力学显示,随着作用浓度的增加和作用时间的延长,G1、G2期细胞数增加,S期细胞数减少;CSE作用后,成纤维细胞的Ⅰ型前胶原mRNA表达降低。结论CSE对体外成纤维细胞具有明显的损伤作用,对细胞的增殖和生长有一定的抑制作用;低浓度CSE长期作用的积累,使多次传代的成纤维细胞具有衰老细胞的特点;CSE能够抑制细胞活性,引起细胞DNA复制和有丝分裂障碍,对各期有不同程度的阻滞。CSE对成纤维细胞的胶原合成有一定抑制作用。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 成纤维细胞 胶原 皮肤
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番茄红素抑制香烟烟雾提取物刺激巨噬细胞所致的炎症反应 被引量：3
9
作者 邹军 刘俊强 +4 位作者 袁凤新 杨玲 黄景文 罗韶金 冯丹 《中山大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期687-692,共6页
【目的】探讨番茄红素对香烟烟雾提取物(CSE)所诱导的人单核细胞株(THP-1)巨噬细胞炎症因子生成的影响及其作用的分子机制。【方法】用100μg/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使其分化为巨噬细胞后,分为空白组、CSE组和CSE+不同浓度番... 【目的】探讨番茄红素对香烟烟雾提取物(CSE)所诱导的人单核细胞株(THP-1)巨噬细胞炎症因子生成的影响及其作用的分子机制。【方法】用100μg/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使其分化为巨噬细胞后,分为空白组、CSE组和CSE+不同浓度番茄红素组(0.5、1和2μmol/L)。采用ELISA法检测THP-1巨噬细胞培养基中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成水平,Western-blotting检测核p65的蛋白表达量。【结果】CSE诱导THP-1巨噬细胞后,IL-6和TNF-α合成释放水平升高,番茄红素可降低CSE诱导引起IL-6和TNF-α生成水平升高。CSE刺激后细胞内ROS生成及核p65蛋白表达增加,核因子-κB(NF-κB)活化,番茄红素可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。【结论】番茄红素能够有效抑制CSE诱导THP-1巨噬细胞炎症反应,该作用主要通过阻断CSE诱导细胞内ROS生成进而抑制NF-κB依赖的炎症因子IL-6和TNF-α分泌发挥的,这可能是番茄红素抑制吸烟导致的炎症反应的作用机制之一。 展开更多
关键词 番茄红素 香烟烟雾提取物 炎症 核因子-ΚB 活性氧
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辛伐他汀对香烟烟雾提取物诱导的人脐静脉内皮细胞表达sEPCR和mEPCR的影响 被引量：4
10
作者 樊芳芳 胡晓芸 +2 位作者 扈丽娟 韩葆芬 赵瑛娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期727-729,共3页
目的:研究辛伐他汀对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)和膜联内皮细胞蛋白C受体(mEPCR)的干预作用。方法:体外培养的4～6代HU-VECs随机分为对照组、5%CSE组、不同浓度辛伐他汀组... 目的:研究辛伐他汀对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)和膜联内皮细胞蛋白C受体(mEPCR)的干预作用。方法:体外培养的4～6代HU-VECs随机分为对照组、5%CSE组、不同浓度辛伐他汀组及辛伐他汀干预组,辛伐他汀组分别加入50、100、200μmol/L辛伐他汀液孵育24 h,辛伐他汀干预组先以50、100、200μmol/L辛伐他汀预处理细胞2 h,再与5%CSE孵育24 h。收集各组细胞及上清液,ELISA法检测上清液中sEPCR蛋白含量,实时定量PCR法检测各组细胞中mEPCR mRNA的表达。结果:(1)5%CSE组sEPCR蛋白含量高于对照组,mEPCR mRNA表达低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);(2)100μmol/L与200μmol/L辛伐他汀组sEPCR蛋白含量均高于对照组,低于5%CSE组,其mEPCR mRNA表达均低于对照组,高于5%CSE组,差异均有统计学意义(均P<0.05);(3)各辛伐他汀干预组sEPCR蛋白含量均低于5%CSE组,但高于对照组及相应浓度的辛伐他汀组;相反,各辛伐他汀干预组mEPCR mRNA表达均高于5%CSE组,低于对照组及相应浓度的辛伐他汀组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:在体外,辛伐他汀通过上调HUVECs mEPCR mRNA的表达,降低sEPCR的分泌,对CSE介导的内皮细胞凝血功能障碍可能具有一定的改善作用。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 内皮细胞蛋白C受体 人脐静脉内皮细胞
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香烟烟雾提取物对大鼠肺组织的损伤作用及对一氧化氮生成的影响 被引量：7
11
作者 赵鸣武 方秋红 +3 位作者 任光明 姚兴海 王培勇 唐朝枢 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第2期44-47,共4页
将大鼠肺组织切片与香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）共同孵育，测定其乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性、亚硝酸盐（ＮＯ_２） 含量、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）转运，以探讨吸烟对肺组织的氧化损伤作用及对一氧化氮 生... 将大鼠肺组织切片与香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）共同孵育，测定其乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性、亚硝酸盐（ＮＯ_２） 含量、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）转运，以探讨吸烟对肺组织的氧化损伤作用及对一氧化氮 生成的影响。结果显示： １０％ ＣＳＥ时间依赖地增加大鼠肺组织 ＬＤＨ漏出及 ＮＯ_２释放，二者高度正相关（ｒ=０．６５， Ｐ＜０．０１），刺激诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）活性增加，并通过增加最大转运速度（Ｖｍａｘ）使Ｌ－Ａｒｇ转运增加。提示：吸烟可 能通过增加 Ｌ－Ａｒｇ的跨膜转运使细胞内 Ｌ－Ａｒｇ浓度增高，并增加 ｉＮＯＳ活性使 ＮＯ过量产生。 ＮＯ可能参与了吸烟对肺 组织的损伤过程。 展开更多
关键词 吸烟 NO 肺组织 香烟烟雾提取物 氧化性损伤
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自噬参与香烟烟雾提取物诱导的肺动脉内皮细胞凋亡 被引量：3
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作者 薛鸿 王虹 +3 位作者 许能銮 陈愉生 苏建 解卫平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期603-607,共5页
目的:探讨自噬在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)凋亡中的作用。方法:常规培养HPAECs,分为对照组、CSE组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组... 目的:探讨自噬在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)凋亡中的作用。方法:常规培养HPAECs,分为对照组、CSE组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组和3-MA+CSE组,应用Hoechst 33342染色和Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察细胞自噬泡形成,Western bolt测定自噬相关蛋白beclin-1、LC3与cleaved caspase-3的水平。结果:MDC染色示CSE处理可以诱导细胞产生自噬泡,Western blot结果示自噬相关蛋白LC3及beclin-1表达升高,3-MA预处理后抑制上述蛋白的表达。Hoechst 33342染色和Annexin V/PI流式结果显示CSE组细胞凋亡率较对照组明显增加,在3-MA+CSE组,细胞凋亡率较CSE组进一步升高;同时,CSE组细胞cleaved caspase-3蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05),3-MA+CSE组的caspase-3表达较CSE组进一步升高。结论:CSE能诱导HPAECs发生自噬和凋亡,抑制自噬能够进一步促进CSE对HPAECs的凋亡作用,这种作用可通过激活caspase-3实现。 展开更多
关键词 自噬 人肺动脉内皮细胞 香烟烟雾提取物 细胞凋亡
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香烟烟雾提取物致人气道平滑肌细胞损伤及对白介素-8表达的影响 被引量：3
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作者 肖卫 刘辉国 +6 位作者 蕾茹 胡伟华 竺红宇 陈振平 许菊秀 马家兰 黄晓霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第16期2620-2622,共3页
目的:观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)的损伤及对白介素-8(interleukin-8,IL-8)表达水平的影响。方法:原代培养HASMCs,分为空白对照组、CSE组,在干预24h... 目的:观察香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)的损伤及对白介素-8(interleukin-8,IL-8)表达水平的影响。方法:原代培养HASMCs,分为空白对照组、CSE组,在干预24h后使用倒置显微镜、MTT法观察HASMCs的活性,用ELISA法和RT-PCR法测定IL-8表达水平的变化。结果:CSE可导致HASMCs形态和结构的改变,同时使HASMCs分泌释放IL-8增加。结论:在香烟烟雾提取物刺激下,HASMCs分泌IL-8增加。 展开更多
关键词 肌细胞 平滑肌 白细胞介素8 香烟烟雾提取物
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香烟烟雾提取物对肺泡Ⅱ型上皮细胞核因子-κB及肿瘤坏死因子的影响 被引量：3
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作者 徐佩茹 张晓荣 +3 位作者 多力坤 张亚楼 卢晓梅 刘辉 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期810-812,共3页
目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)的损伤、对核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子(TNFα)的影响。方法体外培养A549,加入不同浓度的CSE,应用倒置显微镜、MTT法、免疫组化染色和ELISA法观察A549细胞形态、活性、NF-κ... 目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)的损伤、对核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子(TNFα)的影响。方法体外培养A549,加入不同浓度的CSE,应用倒置显微镜、MTT法、免疫组化染色和ELISA法观察A549细胞形态、活性、NF-κB活化和TNFα水平的变化。结果与对照组相比,A549细胞的镜下形态和结构随CSE浓度和时间发生改变;MTT示各组间差异有显著性(P<0.01);不同浓度CSE刺激后均可诱导NF-κB的活化,且在8h达高峰;各组TNFα水平具时间依赖性,其中5%和10%CSE组上升,20%CSE组下降(P均<0.01)。结论CSE可导致A549形态结构改变和活性下降,其损伤可能与NF-κB活化和TNFα水平变化有关。 展开更多
关键词 肺泡Ⅱ型细胞 香烟烟雾提取物 核因子-ΚB 肺瘤坏死因子α
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香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞 被引量：2
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作者 梁毅 周广 +2 位作者 张龙举 刘积锋 钟小宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期15-19,共5页
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L... 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4^+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4^+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4^+T淋巴细胞共培养可以促进CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4^+T细胞共培养后分化的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 树突状细胞 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞 CD40-CD40L通路
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姜黄素抑制香烟烟雾提取物刺激巨噬细胞RAW264.7所致炎症反应 被引量：3
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作者 和平 赵玉杰 +5 位作者 刘原 柯蕊 杨芬 杨妮 冯雁京 张立然 《山西医科大学学报》 CAS 2014年第5期343-346,共4页
目的研究姜黄素对香烟烟雾提取物刺激巨噬细胞株RAW264.7所致炎症反应的抑制作用。方法将RAW264.7巨噬细胞株培养于含不同浓度香烟烟雾提取物或姜黄素的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度;组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A或香烟烟雾提... 目的研究姜黄素对香烟烟雾提取物刺激巨噬细胞株RAW264.7所致炎症反应的抑制作用。方法将RAW264.7巨噬细胞株培养于含不同浓度香烟烟雾提取物或姜黄素的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度;组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A或香烟烟雾提取物分别刺激RAW264.7细胞株,体外模拟COPD发病的炎症反应过程;应用姜黄素和/或地塞米松处理被曲古抑菌素A或香烟烟雾提取物活化的RAW264.7细胞株;ELISA法测定细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平。结果与空白对照组比较,曲古抑菌素A或香烟烟雾提取物均可显著上调巨噬细胞株RAW264.7的TNF-α、IL-6表达;应用姜黄素或地塞米松干预,可抑制炎症因子TNF-α和IL-6的表达上调;联合应用姜黄素与地塞米松具有更强的抗炎作用。结论姜黄素可抑制香烟烟雾提取物导致的巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6分泌增加,可增强地塞米松的抗炎作用,其作用机制可能与姜黄素活化组蛋白去乙酰化酶有关。 展开更多
关键词 姜黄素 香烟烟雾提取物 巨噬细胞 炎症反应
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TGF-β在香烟烟雾提取物诱导的中性粒细胞内质网应激中的作用 被引量：2
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作者 黄宏 王如娟 +1 位作者 朱慧芬 杨道锋 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期629-632,共4页
目的探讨TGF-β在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的正常人外周血中性粒细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)中的作用。方法实验分3组:正常对照组、CSE刺激组、CSE刺激+内质网应激抑制剂4-苯基丁... 目的探讨TGF-β在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的正常人外周血中性粒细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)中的作用。方法实验分3组:正常对照组、CSE刺激组、CSE刺激+内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)组。培养正常人外周血中性粒细胞,给予不同浓度的CSE刺激16h,流式细胞术检测中性粒细胞GRP78、TGF-β、NF-κB、ERK、p38-MAPK的表达,ELISA法检测CXCL-8蛋白表达水平。结果 CSE增强中性粒细胞GRP78及TGF-β的表达,并在一定范围内呈浓度依赖性;内质网应激抑制剂4-PBA减少CXCL-8的分泌(P<0.05)和TGF-β的表达(P<0.05)。CSE对中性粒细胞表面NF-κB、ERK、p38-MAPK的表达无明显作用。结论 CSE诱导中性粒细胞内质网应激,并上调CXCL-8和TGF-β水平;4-PBA减少中性粒细胞分泌CXCL-8,可能与下调TGF-β表达有关。 展开更多
关键词 内质网应激 香烟烟雾提取物 中性粒细胞 转化生长因子-Β
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COPD患者外周血中性粒细胞表面PSGL-1、CD44的表达以及香烟烟雾提取物对其表达的影响 被引量：3
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作者 黄宏 王如娟 +1 位作者 朱慧芬 杨道锋 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期575-578,共4页
目的探讨P-选择素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)和CD44在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血中性粒细胞中的表达,以及香烟烟雾提取物对健康志愿者外周血中性粒细胞PSGL-1... 目的探讨P-选择素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)和CD44在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血中性粒细胞中的表达,以及香烟烟雾提取物对健康志愿者外周血中性粒细胞PSGL-1和CD44表达的影响。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院2015年9月至2015年12月呼吸与危重症医学科收治的26例COPD患者(COPD组),以及24例无吸烟史的健康志愿者作为正常对照组(NC组),流式细胞术检测COPD患者和健康志愿者外周血中性粒细胞表面PSGL-1和CD44的表达。同时分离6例健康无吸烟史的志愿者外周血标本中的中性粒细胞,用不同浓度(0%、5%、10%、20%)香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)刺激,流式细胞术检测中性粒细胞表面PSGL-1和CD44的表达。结果 COPD组患者外周血中性粒细胞表面PSGL-1、CD44的表达较NC组明显增强(均P<0.05),CSE刺激的正常人外周血中性粒细胞表面PSGL-1、CD44表达明显增强(均P<0.05),且呈浓度依赖性。结论 COPD患者外周血中性粒细胞表面PSGL-1和CD44的表达较正常对照组增强。香烟烟雾提取物可能通过促进外周血中性粒细胞表面PSGL-1和CD44的表达,从而启动中性粒细胞的粘附级联反应,促进气道中性粒细胞炎症反应。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 香烟烟雾提取物 P-选择素糖蛋白配体1 CD44
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香烟烟雾提取物对人内皮细胞细胞间黏附分子-1和白介素-8表达以及与多形核中性粒细胞黏附的影响 被引量：3
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作者 陈芳 陈平 +3 位作者 谢丽华 周锐 向旭东 吴尚洁 《实用心脑肺血管病杂志》 2006年第12期942-946,共5页
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)诱导作用对人内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-I)和白介素-8(IL-8)表达以及与多形核中性粒细胞(PMN)黏附的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304);制备香烟烟雾提取物(CSE);用不同浓度(0、2.5%、5.0%、1... 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)诱导作用对人内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-I)和白介素-8(IL-8)表达以及与多形核中性粒细胞(PMN)黏附的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304);制备香烟烟雾提取物(CSE);用不同浓度(0、2.5%、5.0%、10.0%)CSE刺激内皮细胞,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同时间点(1h、3h、6h、9h、12h、24h、48h)收集的细胞培养上清液IL-8的浓度,细胞免疫化学染色(SABC)检测ICAM-1在不同时间点(3h、6h、9h、12h)内皮细胞上的表达,细胞记数法测定(1h、3h、6h、9h、12h)后PMN与内皮细胞的黏附率(PMN-EC)。结果(1)各CSE浓度组干预12h后,ICAM-1在EC上的表达量随着干预浓度的增加而增高,除了2.5%CSE干预组和5.0%CSE干预组之间无差异外,各组间差异均有非常显著性意义(P<0.01);10.0%CSE干预不同时间点后,随着干预时间的延长,ICAM-1在内皮细胞上的表达量增加,各时间组之间差异均有非常显著性意义(P<0.01)。(2)随着CSE干预浓度的增加和干预时间的延长,内皮细胞表达IL-8的浓度增高,各组间差异均有非常显著性意义(P<0.01)。(3)各CSE浓度组干预12h后,PMN-EC黏附率随着干预浓度的增加而增加,各组间差异均有非常显著性意义(P<0.01)。10.0%CSE干预不同时间点后,随着干预时间的延长,PMN-EC黏附率增加,各时间组差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论香烟烟雾提取物可以刺激激活血管内皮细胞ICAM-1和IL-8表达,增强PMN与内皮细胞的黏附。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 内皮细胞 胞间黏附分子-1 白介素-8 细胞黏附
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香烟烟雾提取物对小鼠精子活力的影响 被引量：2
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作者 余波澜 蒋露 +2 位作者 郑婷 周华 孙筱放 《生殖医学杂志》 CAS 2014年第9期754-759,共6页
目的探讨香烟烟雾中所含外源活性氧物质(ROS)对小鼠精子活力的影响。方法香烟燃点后烟雾溶于二甲亚砜,配制成高ROS含量的香烟烟雾浓缩物(CSC)。釆用4周龄C57BL/6J小鼠45只,实验设置对照组(0mg/ml CSC)、低剂量组(0.2mg/ml CSC)和高剂量... 目的探讨香烟烟雾中所含外源活性氧物质(ROS)对小鼠精子活力的影响。方法香烟燃点后烟雾溶于二甲亚砜,配制成高ROS含量的香烟烟雾浓缩物(CSC)。釆用4周龄C57BL/6J小鼠45只,实验设置对照组(0mg/ml CSC)、低剂量组(0.2mg/ml CSC)和高剂量组(2.0mg/ml CSC)。连续饲喂含有CSC的饮用水4周,观察小鼠的生殖系统发育情况和可能的全身毒性反应,并检测肝功能指标。处死小鼠后即刻检测精子浓度和活力,检测睾丸内抗氧化酶类的表达水平,并制片观察睾丸组织病理变化。结果与对照组相比,低剂量和高剂量组小鼠精子浓度无显著变化,但高剂量组精子活力呈现显著下降。CSC低剂量组和高剂量组小鼠连续饲喂4周后精子总活动力分别为32%和19%,A级活动精子分别为13%和12%,均显著低于对照组(61%和24%)(P<0.05)。但在本实验剂量范围内,CSC对小鼠发育和生殖系统无明显毒性损伤,对睾丸抗氧化基因表达无显著影响。结论 CSC对小鼠精子活力有显著影响,但是对小鼠全身和生殖系统无明显毒性作用。CSC饲喂法可推荐用于诱导小鼠弱精子症模型。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 精子活力 活性氧物质 弱精子症 小鼠模型
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