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E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移 被引量：1
1
作者 闫承慧 栾波 +2 位作者 李杰 张效林 韩雅玲 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第37期6942-6946,共5页
背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制... 背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用。结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P<0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P<0.05)。刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑。相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P<0.05),同时JNK蛋白活化。进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制。结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移。 展开更多
关键词 阻遏蛋白 腺病毒E1A蛋白 E1A激活基因阻遏子 血管平滑肌细胞 迁移 组织构建
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结核分枝杆菌拟核结合蛋白Lsr2阻遏调控rv1057基因转录的研究 被引量：1
2
作者 付加芳 张佩佩 +3 位作者 宗工理 王新圆 刘萌 曹广祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期191-197,共7页
探讨结核分枝杆菌拟核结合蛋白Lsr2是否是rv1057基因转录的阻遏蛋白。利用凝胶阻滞迁移试验分析Lsr2在体外与rv1057启动子片段的特异性结合能力;通过lacZ报告基因和荧光定量PCR检测rv1057启动子区域的不同突变形式对转录的影响;启动转... 探讨结核分枝杆菌拟核结合蛋白Lsr2是否是rv1057基因转录的阻遏蛋白。利用凝胶阻滞迁移试验分析Lsr2在体外与rv1057启动子片段的特异性结合能力;通过lacZ报告基因和荧光定量PCR检测rv1057启动子区域的不同突变形式对转录的影响;启动转录的能力;通过蛋白质免疫印迹法检测目标基因rv1057的表达。统计学处理采用t检验。Lsr2结合rv1057启动子;Lsr2与已知的阻遏蛋白TrcR都能结合rv1057启动子;缺失Lsr2结合位点的rv1057启动子能够在结核分枝杆菌生长周期中持续启动rv1057基因的转录;野生型菌株H37Rv生长早期(24 h)lsr2基因转录水平较低,而在H37Rv生长中期(48 h)、后期(120 h)lsr2基因的相对表达量变化倍数显著提高,差异具有统计学意义(t值分别为24.44、16.86,P<0.05);H37Rv菌株和lsr2基因缺失菌株中trcR基因在生长早期(24 h)的相对表达量显著高于生长中期(48 h)、生长后期(120 h)的trcR表达量,差异具有统计学意义(t值分别为6.79、10.16,P<0.05)。Lsr2是rv1057基因转录的阻遏蛋白,Lsr2和TrcR均可调控rv1057基因的表达。Lsr2在结核分枝杆菌生长周期的中后期大量表达并阻遏rv1057的转录,TrcR则在结核分枝杆菌生长周期的早期阻遏rv1057的转录。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rv1057 Lsr2 阻遏蛋白 调控
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凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞菌LexA蛋白与其靶位点的特异性结合
3
作者 陈炫 汤绍辉 +2 位作者 唐晖 查庆兵 刘芳 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期381-384,395,共5页
目的:分析铜绿假单胞菌(pseudom onas aeruginosa,PA)的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-7... 目的:分析铜绿假单胞菌(pseudom onas aeruginosa,PA)的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性。结果:构建了pET22b-LexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合。结论:推定LexA结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 SOS反应 阻遏蛋白(lexa) 结合位点
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重组人E1A激活基因阻遏子/myc-His融合糖蛋白的纯化及功能鉴定
4
作者 孙鸣宇 韩雅玲 +2 位作者 郭鹏 康建 闫承慧 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期297-301,I0003,共6页
目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱... 目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱盐柱脱盐。用流式细胞周期分析研究添加0.5μg/ml、1μg/ml及2μg/ml重组hCREG/myc-His融合糖蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。用BrdU掺入方法研究重组蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。结果:根据6×His亲和层析原理用Ni-NTA纯化重组hCREG蛋白,浓缩并脱盐后的重组hCREG蛋白浓度为1.6mg/ml,纯度为92%,此蛋白仍保留了糖基化形式。流式细胞仪细胞周期分析结果提示重组hCREG蛋白可抑制体外培养的HITASY细胞增殖,且低浓度组的抑制效应要高于高浓度组。BrdU掺入实验结果提示,添加2μg/ml重组hCREG蛋白组与对照组相比可显著抑制体外培养的HITASY细胞增殖,组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:具有生物学功能的重组hCREG/myc-His糖蛋白的成功纯化,为hCREG蛋白的功能研究及生物工程制备提供了实验平台。 展开更多
关键词 腺病毒E1A蛋白(E1A) 阻遏子 糖蛋白 蛋白纯化
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E1A激活基因阻遏子蛋白与细胞膜受体IGF2R(11～13)结构域作用抑制人血管平滑肌细胞迁移
5
作者 闫承慧 孙鸣宇 +4 位作者 张效林 徐凯 李毅 王效增 韩雅玲 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期961-967,共7页
目的研究人E1A激活基因阻遏子基因(CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞迁移中的作用。方法构建含有myc和His标签的野生型CREG(wtCREG)和去糖基化突变型CREG(mCREG)真核表达载体pcDNA3.1myc-His/wt/mCREG。转染人293F细胞株,Ni-NTA亲合层析方... 目的研究人E1A激活基因阻遏子基因(CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞迁移中的作用。方法构建含有myc和His标签的野生型CREG(wtCREG)和去糖基化突变型CREG(mCREG)真核表达载体pcDNA3.1myc-His/wt/mCREG。转染人293F细胞株,Ni-NTA亲合层析方法纯化获得wtCREG和mCREG蛋白;将重组wt-CREG(400 nmol/L)及mCREG蛋白(400 nmol/L),分别加入体外培养的低表达CREG的人血管平滑肌细胞OB2中,应用Western blot、细胞刮伤实验、明胶酶电泳方法观察两种重组人CREG蛋白对人血管平滑肌细胞迁移和分化等生物学行为的影响;通过不同浓度(2、4、8 mg/L)的胰岛素生长因子2受体(M6P/IGF2R)中和抗体与人M6P/IGF2R细胞外结构域蛋白小肽分别进行阻断实验,分析M6P/IGF2R是否参与介导CREG蛋白对平滑肌细胞迁移的调控。结果刮伤实验发现,加入最佳效应浓度的wtCREG和mCREG蛋白24 h后,OB2组细胞的迁移能力均明显下降;明胶酶电泳和Western blot检测结果也证实,两种重组CREG蛋白均可以使细胞外基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9的合成及活性减少,而组织金属蛋白酶抑制物表达则明显增加;同时,Western blot分析也证实,平滑肌细胞分化标志蛋白myocardin、SMα-actin、肌球蛋白重链和caldesmin表达增加,LM-1和FN表达减少。提示两种重组CREG蛋白均能够抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移,促进其分化。IGF2R中和抗体和IGF2R小肽阻断实验证实:不同浓度的Anti-M6P/IGF2R能有效阻断两种CREG蛋白对人血管平滑肌细胞迁移和细胞外基质合成的调控作用。并且,M6P/IGF2R的第11～13结构域小肽片段对wt/mCREG蛋白的生物学效应也有明显的阻断作用。结论重组CREG蛋白可能通过细胞膜表面M6P/IGF2R的11～13结构域抑制人血管平滑肌细胞迁移和细胞外基质分泌,维持细胞分化。 展开更多
关键词 E1A蛋白 阻遏子 平滑肌细胞迁移
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用P11柱一步纯化色氨酸阻遏蛋白质
6
作者 崔涛 肖杰 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期487-491,共5页
利用携带有克隆色氨酸阻遏蛋白基因的pJPR2质粒的大肠杆菌菌株,经过细菌培养、扩增及一系列生化方法,得到色氨酸阻遏蛋白的粗品,然后利用磷酸纤维素P11柱分离纯化得到单一的色氨酸阻遏蛋白,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定和pRK9质粒中trp... 利用携带有克隆色氨酸阻遏蛋白基因的pJPR2质粒的大肠杆菌菌株,经过细菌培养、扩增及一系列生化方法,得到色氨酸阻遏蛋白的粗品,然后利用磷酸纤维素P11柱分离纯化得到单一的色氨酸阻遏蛋白,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定和pRK9质粒中trpP/O片段保护实验证明,分离到的色氨酸阻遏蛋白是纯的,并具有生物活性。该方法和思维的建立,为研究核酸结合蛋白质的结构与功能提供了基础。 展开更多
关键词 色氨酸 阻遏蛋白 磷酸纤维素 质粒
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λ噬菌体阻遏蛋白与操纵基因相互作用的动力学研究
7
作者 丁辉 李前忠 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期271-275,共5页
根据 λ噬菌体阻遏蛋白与操纵基因的相互作用特点 ,提出了他们相互作用的化学动力学模型 .用此模型计算各结合位点饱和分数与阻遏蛋白浓度的关系函数 ,并对λ噬菌体阻遏蛋白与操纵基因相互作用的本征自由能及各位点间的偶联自由能进行... 根据 λ噬菌体阻遏蛋白与操纵基因的相互作用特点 ,提出了他们相互作用的化学动力学模型 .用此模型计算各结合位点饱和分数与阻遏蛋白浓度的关系函数 ,并对λ噬菌体阻遏蛋白与操纵基因相互作用的本征自由能及各位点间的偶联自由能进行了估算 。 展开更多
关键词 Λ噬菌体 阻遏蛋白 操纵基因 结合位点 饱和分数 自由能 基因表达控制 相互作用运力学
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粘质沙雷氏菌合成碱性蛋白酶的阻遏作用 被引量：1
8
作者 黄利群 彭珍荣 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1993年第1期88-92,共5页
用粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的菌悬液研究了该菌合成碱性蛋白酶的阻遏作用.八种碳源对产酶的影响各不相同,其中以琥珀酸及DL^(-1)苹果酸的阻遏作用最为显著.琥珀酸对产酶的调节随浓度增大,阻遏作用增强.且加入时间愈早,阻遏作... 用粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的菌悬液研究了该菌合成碱性蛋白酶的阻遏作用.八种碳源对产酶的影响各不相同,其中以琥珀酸及DL^(-1)苹果酸的阻遏作用最为显著.琥珀酸对产酶的调节随浓度增大,阻遏作用增强.且加入时间愈早,阻遏作用也愈强.其阻遏机制与利福平类似,与氯霉素则不同.cAMP能消除琥珀酸对产酶的阻遏作用,表明该阻遏作用属分解代谢物的阻遏. 展开更多
关键词 碱性蛋白酶 粘质沙雷氏菌 阻遏作用
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真核生物转录调控中阻遏蛋白的作用机制
9
作者 明亮 《生命的化学》 CAS CSCD 1996年第5期17-19,共3页
真核生物转录调控中阻遏蛋白的作用机制明亮（杭州大学生命科学学院，杭州３１００１２）关键词转录调控，阻遏蛋白，真核生物真核基因表达在转录水平的调控机制极为复杂。据估计，真核细胞的基因大约有十分之一是用以编码参与转录调控... 真核生物转录调控中阻遏蛋白的作用机制明亮（杭州大学生命科学学院，杭州３１００１２）关键词转录调控，阻遏蛋白，真核生物真核基因表达在转录水平的调控机制极为复杂。据估计，真核细胞的基因大约有十分之一是用以编码参与转录调控尤其是转录起始调控的蛋白质的。目前... 展开更多
关键词 转录调控 阻遏蛋白 真核生物
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RhoA和血清反应因子(SRF)介导E1A激活基因阻遏子诱导人血管平滑肌细胞分化 被引量：9
10
作者 韩雅玲 徐红梅 +3 位作者 闫承慧 胡叶 康建 刘海伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期438-445,共8页
为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.... 为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.结果显示:pLNCX2(+)/CREG稳定感染细胞呈分化表型,细胞细长变成组织样聚集生长趋势,细胞中CREG蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子——血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,以Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,CREG诱导的SMα-actin表达下调的同时SRF出核转位;pLXSN(-)/CREG稳定感染的细胞体积变大,细胞极性消失,呈无序生长,细胞中CREG和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.免疫共沉淀分析发现,CREG蛋白能被分泌到VSMCs培养基中表达,并可与细胞膜受体6-磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(M6P/IGF2R)发生直接相互作用.用蛋白磷酸酶PP2A特异性抑制剂okadaicacid减少M6P/IGF2R在细胞膜表面分布,可明显抑制CREG过表达引起的RhoA、SRF和SMα-actin表达.上述结果提示,在体外培养的人VSMCs中,CREG可能作为一种分泌型蛋白质通过与细胞膜受体M6P/IGF2R相互作用,依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMCs向分化表型转换. 展开更多
关键词 阻遏蛋白 E1A 表型 细胞 血管平滑肌 人
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E1A激活基因阻遏子过表达抑制体外人血管平滑肌细胞凋亡 被引量：11
11
作者 韩雅玲 徐红梅 +4 位作者 邓捷 胡叶 康建 刘海伟 闫承慧 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期324-330,共7页
为探讨EIA激活基因阻遏子(cellular repressor of EIA-stimulated genes,CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及调控机制,应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX_2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备... 为探讨EIA激活基因阻遏子(cellular repressor of EIA-stimulated genes,CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及调控机制,应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX_2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染人胸廓内动脉平滑肌细胞克隆株(human internal thoracic artery-Shenyang,HITASY)细胞模型．观察CREG蛋白过表达及表达抑制对平滑肌细胞凋亡的影响。荧光显微镜下观察DAPI染色后凋亡细胞核形态,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析凋亡相关基因caspase-9mRNA的表达,蛋白质印迹法分析p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)的表达变化。研究结果显示,CREG蛋白过表达明显抑制血清饥饿诱导的HITASY细胞凋亡的发生；同时细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达增加。相反,抑制CREG蛋白表达则引起正常血清培养状态下VSMCs的自发凋亡明显增加,同时细胞内p38 MAPK、p-p38 MAPK表达显著下降。进一步研究发现,预先应用特异性抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,CREG蛋白过表达引起的细胞凋亡抑制作用被明显减弱,血清饥饿后CREG蛋白过表达引起的HITASY细胞凋亡现象明显增加。上述结果提示,CREG蛋白过表达可以抑制体外培养的VSMCs凋亡．p38 MAPK信号转导通路可能介导CREG蛋白对VSMCs凋亡的抑制作用。 展开更多
关键词 阻遏蛋白 腺病毒E1A蛋白 凋亡 细胞 血管平滑肌 人
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E1A激活基因阻遏子促进人血管平滑肌细胞分化和迁移 被引量：11
12
作者 韩雅玲 胡叶 +3 位作者 刘海伟 康建 闫承慧 李少华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期517-522,共6页
为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,G... 为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)的空载体pLNCX(+)/GFP和正常HITASY为对照,用磷酸钙共沉淀法将重组逆转录病毒载体转染293细胞,包装出完整的逆转录病毒后,感染HITASY.经G418筛选,获得稳定感染的细胞克隆.应用免疫荧光染色、蛋白质印迹等方法检测CREG和平滑肌分化标志蛋白α-肌动蛋白(SMα-actin)表达,同时通过刮伤实验、慢速显微摄像技术检测细胞迁移能力以及用明胶酶谱方法分析细胞基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)的活性.结果表明:pLNCX2(+)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9活性升高,细胞迁移速度加快;pLXSN(-)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达下调,MMP-2和MMP-9活性降低,细胞迁移速度减慢.上述研究提示CREG在诱导血管平滑肌细胞分化的同时促进细胞迁移. 展开更多
关键词 阻遏子 腺病毒蛋白E1A 分化 迁移 逆转录病毒载体 平滑肌
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逆转录病毒介导的E1A激活基因阻遏子抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成 被引量：6
13
作者 韩雅玲 邓捷 +4 位作者 梁明 康建 刘海伟 徐红梅 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1873-1877,共5页
目的:探讨逆转录病毒介导的E1A激活基因阻遇子(CREG)过表达对球囊损伤后大鼠颈动脉新生内膜形成的影响。方法:以球囊拉伤法制备大鼠颈动脉损伤模型,应用Pluronic F127胶分别包裹含有pLNCX/CREG、pLNCX/GFP载体的逆转录病毒,并于损伤即... 目的:探讨逆转录病毒介导的E1A激活基因阻遇子(CREG)过表达对球囊损伤后大鼠颈动脉新生内膜形成的影响。方法:以球囊拉伤法制备大鼠颈动脉损伤模型,应用Pluronic F127胶分别包裹含有pLNCX/CREG、pLNCX/GFP载体的逆转录病毒,并于损伤即刻涂抹于血管外壁。随后在损伤不同时点取出损伤动脉,测量内膜面积及内膜/中膜面积比。用免疫组织化学法观察CREG、SMα-actin及Ki-67变化,Western blotting检测CREG蛋白表达。结果:血管损伤后2 d pLNCX/GFP组血管中膜平滑肌层GFP表达。pLNCX/CREG组大鼠血管CREG表达明显多于单纯损伤组。感染CREG组大鼠球囊损伤后血管新生内膜的形成明显受抑,Ki-67蛋白表达明显少于、而SMα-actin表达则明显多于单纯损伤组。结论:CREG过表达能抑制血管损伤后平滑肌细胞的增殖并促进其分化,提示调控CREG基因的表达可能为预防PCI术后再狭窄提供有效手段。 展开更多
关键词 阻遏蛋白质类 血管 大鼠
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人E1A激活基因阻遏子的表达、抗体制备及生物学活性分析 被引量：5
14
作者 韩雅玲 刘海伟 +3 位作者 闫承慧 康建 王效增 胡叶 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期570-574,共5页
目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术... 目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体。诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白。以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化。用ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响。结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确。诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%。Westernblot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合。ELISA测得该抗体的效价>1∶105。免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITA-SY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围。BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖。结论:成功地获得兔抗hCREG抗体。证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调。表达的hCREG蛋白可抑制HI-TASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化。 展开更多
关键词 腺病毒E1A蛋白(E1A) 阻遏子 纯化 抗体 增殖 血管平滑肌细胞
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E1A激活基因阻遏子过表达诱导体外培养大鼠平滑肌细胞分化 被引量：13
15
作者 韩雅玲 闫承慧 +4 位作者 刘海伟 胡叶 康建 王效增 李少华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1099-1105,共7页
为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌... 为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞分化标志蛋白SMα actin表达显著增加 .免疫共沉淀分析发现 ,CREG与血清反应因子 (SRF)发生相互作用形成复合体 ,在CREG基因过表达时 ,与CREG结合的SRF蛋白增加 .凝胶迁移阻滞分析 (GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析 (supershift)显示 ,过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到SMα actin基因启动子区CArG位点上 ,可能参与SMα actin表达的调控 .构建SMα actinpromoter pCAT 3报告基因载体并与pRC/CMV hCREG质粒共转染VSMCs也证实 ,CREG蛋白过表达可增强SMα actin基因表达 .上述研究提示 。 展开更多
关键词 CArG 阻遏蛋白 E1A 表型 细胞 血管平滑肌 大鼠
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E1A激活基因阻遏子表达与小鼠胚胎血管发生的关系 被引量：1
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作者 韩雅玲 杨桂棠 +1 位作者 闫承慧 康建 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期595-601,共7页
目的探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)蛋白表达与小鼠动脉形态学发生的关系,了解CREG蛋白在血管发育中的生物学作用。方法制备E9.5d-E18.5d胎鼠、新生1d、28d和2月成鼠不同脏器功能血管的石蜡组织切片,观察主动脉发生过程中的形态学变化;采... 目的探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)蛋白表达与小鼠动脉形态学发生的关系,了解CREG蛋白在血管发育中的生物学作用。方法制备E9.5d-E18.5d胎鼠、新生1d、28d和2月成鼠不同脏器功能血管的石蜡组织切片,观察主动脉发生过程中的形态学变化;采用免疫组化染色法观察不同发育时相的血管细胞中CREG蛋白和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)标记物肌动蛋白(SMα-actin)的表达变化。结果HE染色显示E9.5d的胚胎血管由单层血管内皮细胞构成,免疫组化显示CREG表达阳性,主要定位于血管壁的单层内皮细胞中,SMα-actin表达为阴性;E10.5d的胚胎血管内皮细胞周围开始出现少量SMα-actin表达阳性的原始VSMCs,同时CREG蛋白表达,定位与SMα-ac-tin蛋白一致。自E12.5d开始SMα-actin蛋白在血管中膜VSMCs中表达增强并持续至成年。CREG蛋白在三层结构的血管细胞中均为阳性表达,其表达强度在E15.5d达到最高,E18.5d表达下降并维持至成年。进一步分析CREG蛋白在成年鼠心、肺、脾和肾等多个脏器血管中的分布,发现所有脏器血管细胞均表达CREG,但表达丰度明显不同,在储存血管和分配血管中CREG蛋白呈高表达,在调节血管中低表达。结论CREG蛋白在小鼠胚胎血管发育早期、持续表达的特点及其在不同脏器功能血管中表达的差异,提示CREG蛋白可能通过调控并维持血管细胞,特别是VSMCs的分化,参与了胚胎血管发生的调控。 展开更多
关键词 阻遏蛋白 E1A 血管发育 小鼠
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加味二陈汤联合阿托伐他汀对痰湿阻遏型高脂血症患者炎症因子、尿酸、颈动脉斑块的影响 被引量：4
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作者 殷霁虹 符德玉 《中国中医药科技》 CAS 2022年第4期528-532,共5页
目的:观察加味二陈汤联合阿托伐他汀治疗痰浊阻遏型高脂血症患者炎症因子、尿酸、颈动脉斑块的影响。方法:将60例痰浊阻遏型高脂血症患者随机分为对照组和观察组,每组30例,对照组口服阿托伐他汀片,观察组在对照组的基础上服用加味二陈汤... 目的:观察加味二陈汤联合阿托伐他汀治疗痰浊阻遏型高脂血症患者炎症因子、尿酸、颈动脉斑块的影响。方法:将60例痰浊阻遏型高脂血症患者随机分为对照组和观察组,每组30例,对照组口服阿托伐他汀片,观察组在对照组的基础上服用加味二陈汤,治疗12周后,观察治疗前后两组患者炎症因子、尿酸、颈动脉最大斑块面积、颈动脉内中膜层厚度(intima media thickness,IMT)以及不良反应发生情况。结果:两组患者治疗后白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor–α,TNF-α)和C反应蛋白(c-reactive protein,CRP)均较治疗前明显下降(P<0.05),观察组炎症因子改善明显于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者尿酸均有下降,观察组尿酸下降更明显,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组颈动脉最大斑块面积均有缩小,观察组缩小明显,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组颈动脉IMT较治疗前降低但差异无统计学意义(P>0.05)。两组均未发生与药物相关的严重不良反应。结论:加味二陈汤联合阿托伐他汀能有效地降低痰浊阻遏型高脂血症患者炎症因子和尿酸水平,缩小斑块面积,且无明显不良反应。 展开更多
关键词 加味二陈汤 阿托伐他汀 痰浊阻遏 高脂血症 白介素6 肿瘤坏死因子α C反应蛋白 尿酸 颈动脉斑块
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E1A激活基因阻遏子在不同表型血管平滑肌细胞中的表达 被引量：1
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作者 刘海伟 韩雅玲 +2 位作者 康建 阎承慧 王效增 《沈阳部队医药》 2005年第3期147-151,共5页
为探讨血管平滑肌细胞表型转换、分化过程中E1A激活基因阻遏子(CREG)的表达变化及其相关机制,采用PCR扩增的CREG片段插入pGEX-4T-1原核表达载体,纯化的CREG融合蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体;以人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)为模型,[... 为探讨血管平滑肌细胞表型转换、分化过程中E1A激活基因阻遏子(CREG)的表达变化及其相关机制,采用PCR扩增的CREG片段插入pGEX-4T-1原核表达载体,纯化的CREG融合蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体;以人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)为模型,[3H]标记脱氧胸苷掺入法测定去血清培养HITASY 细胞DNA合成变化;Western blot观察HITASY细胞在去血清培养过程中SM α-actin、calponin的表达,RT—PCR 和Western blot分析去血清培养诱导CREG mRNA和蛋白表达变化;免疫组化观察CREG在细胞内的表达及定位。结果成功地构建了载体并得到抗CREG多克隆抗体。去血清培养可使HITASY细胞DNA合成明显降低。随去血清培养时间延长,除SM α-actin和calponin表达逐渐上调之外,CREC mRNA转录活性和蛋白翻译合成亦上调。免疫组化显示去血清培养后,CREG蛋白在细胞内表达并主要位于细胞核周。结论:去血清能促使 HITASY细胞由合成表型向收缩表型转换,同时伴CREG mRNA和蛋白表达上调。 展开更多
关键词 阻遏子 血管平滑肌细胞 表达 腺病毒E1A蛋白 多克隆抗体
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强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立
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作者 韩雅玲 崔继福 +2 位作者 康建 张效林 闫承慧 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第42期8281-8285,共5页
背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因... 背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料:强力霉素调控基因表达系统,3T3细胞系。方法:通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子(mCREG)cDNA序列;将mCREGcDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中,构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体;分别经G418(新霉素)及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆;反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。主要观察指标:Westernblotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞克隆;反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0,0.01,0.1,1mg/L),NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。结论:成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。 展开更多
关键词 阻遏蛋白 腺病毒EIA蛋白 小鼠
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JAKsSTATs信号转导途径的阻遏方法及其应用前景
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作者 郭玉 唐圣松 廖端芳 《南华大学学报（医学版）》 2002年第1期69-72,共4页
JAKs蛋白酪氨酸激酶和“信号转导子和转录激活子”(SignalTransducerandActivatorofTran scription ,STATs)广泛参与各种细胞因子的信号转导过程 ,JAKs、STATs异常活化与肿瘤、白血病和心血管系统疾病等许多病理生理过程有着密切的关系... JAKs蛋白酪氨酸激酶和“信号转导子和转录激活子”(SignalTransducerandActivatorofTran scription ,STATs)广泛参与各种细胞因子的信号转导过程 ,JAKs、STATs异常活化与肿瘤、白血病和心血管系统疾病等许多病理生理过程有着密切的关系。本文就阻遏异常活化的JAKs 展开更多
关键词 JAKS STATS 信号转导 异常活化 阻遏方法 蛋白酪氨酸激酶
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