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重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达 被引量：1
1
作者 焦志勇 陈旻湖 +3 位作者 李国庆 朱森林 陈为 胡品津 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期34-36,67,共4页
目的　构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。 方法　用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,... 目的　构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。 方法　用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,与GenBank中的核酸和蛋白序列进行BLAST分析 ,重组的阳性克隆经IPTG诱导培养 ,SDS -PAGE电泳进行表达分析 ,薄层扫描分析融合蛋白的含量。结果　对重组质粒进行酶切和PCR检测 ,证明构建了携带hlyE及ureB基因的重组原核表达质粒 pTrc99A -ureB/hlyE ,核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pTrc99A -ureB/hlyE中所含的Hp -ureB及hlyE与GeneBank中的Hp -ureB和hlyE序列的同源性分别为 97 4 2 % (16 6 3/ 170 7)、99% (910 / 918)。重组细菌JM10 9可表达约 10 0kD的融合蛋白ureB/hlyE ,含量占全菌体蛋白含量的 15 5 %。 结论　构建并鉴定了原核表达质粒pTrc99A -hlyE并高效表达 。 展开更多
关键词 重组原核表达质粒 pTrc99A-ureB/hlyE 尿素酶B亚单位 幽门螺杆菌
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表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染 被引量：3
2
作者 焦志勇 陈旻湖 +2 位作者 朱森林 李国庆 胡品津 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期787-789,共3页
目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylori)尿素酶B亚单位(UreB) 与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用. 方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原... 目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylori)尿素酶B亚单位(UreB) 与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用. 方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A—ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A—ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261, 培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS—PAGE电泳和Western-blotting 进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组, 分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A—ureB的SL3261组、携带PTrc99A—ureB/hlyE 的SL3261组.免疫后4 wk,予H pylori 107 CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况. 结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A—ureB/hlyE中所含的H pylori—ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42% (1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100 ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P<0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果. 展开更多
关键词 融合蛋白 幽门螺旋杆菌感染 pTrc99A-ureB/hlyE Western-blotting HPYLORI SDS-PAGE电泳 改良Giemsa染色 HPYLORI 重组原核表达质粒 减毒鼠伤寒沙门菌 减毒沙门疫苗菌 尿素酶B亚单位 减毒伤寒沙门菌 核苷酸序列测定 生理盐水组
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新型呼肠病毒S1基因的表达鉴定
3
作者 白冰珂 胡燕 +6 位作者 侯俊 沈宏辉 陆日北 罗声栋 黄维芝 柴艳涛 貌盼勇 《实用预防医学》 CAS 2012年第11期1609-1611,1759,共4页
目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白的编码基因S1的重组原核表达质粒，对其在原核细胞内的表达进行研究。方法将S1基因克隆入原核表达载体pProEX HTa，构建重组原核表达载体pPLS，通过IPTG诱导，利用蛋白电泳和蛋白免疫印迹等方法对其在... 目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白的编码基因S1的重组原核表达质粒，对其在原核细胞内的表达进行研究。方法将S1基因克隆入原核表达载体pProEX HTa，构建重组原核表达载体pPLS，通过IPTG诱导，利用蛋白电泳和蛋白免疫印迹等方法对其在大肠杆菌中的表达进行研究。结果酶切分析表明重组质粒构建成功。SDS-PAGE和Western-blot的检测结果一致表明，诱导后1-5h均可检测到目的蛋白的表达，其中以5h的蛋白表达量最大，且表达的目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在。结论通过构建重组原核表达质粒，可使目的蛋白σ1得到诱导表达，为后续抗体制备及研究病毒一宿主相互作用提供实验基础。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 S1基因 σ1蛋白 重组原核表达质粒
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