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题名CHO细胞高密度流加工艺参数优化
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作者
纪海姣
于妍
杨金龙
王鹏银
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机构
天士力生物医药股份有限公司上游技术研究室
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出处
《生物技术》
CAS
2023年第1期121-128,共8页
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文摘
[目的]优化细胞接种密度、培养基、细胞培养温度等参数,提高生产细胞株PCSK9蛋白表达滴度。[方法]试验分四步进行,(1)探讨几款市售培养基优化组合后对CHO细胞株蛋白表达滴度的影响;(2)探讨10.0×10^(6)、15.0×10^(6)、50.0×10^(6)cells/mL高密度接种流加过程培养基、降温时间等对CHO细胞蛋白滴度的影响;(3)在(2)实验数据基础上继续优化,通过更换培养基继续探讨高密度流加工艺的可行性;(4)在反应器对实验数据进行工艺验证。[结果](1)CHO细胞PCSK9蛋白滴度提升至2.6 g/L,蛋白滴度成倍增长;(2)15.0×10^(6)cells/mL接种,30.0×10^(6)cells/mL降温至34℃,继续优化培养基1^(#)、2^(#)配比,蛋白滴度提升至4.5 g/L,反应器工艺验证,细胞生长状态稳定,蛋白滴度突破3.8 g/L;(3)继续筛选市售培养基,成功实现80.0×10^(6)cells/mL高密度流加接种,蛋白滴度提升至7.5 g/L。[结论]以贝谙基Eden-B600、Eden-400S培养基能够实现CHO细胞80.0×10^(6)cells/mL的高密度接种,流加培养D15蛋白滴度突破7.5 g/L。在细胞流加培养过程可以通过培养基成分优化、提高接种细胞密度等改善高密度流加工艺细胞株生长状态,提高目标蛋白产量。以国产培养基替换进口Sigma EX-CELL Advanced CHO Fed-Batch Medium极大地降低了生产成本。
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关键词
重组全人源pcsk9
高密度流加
CHO细胞
培养基优化
蛋白滴度
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Keywords
recombinant human pcsk9
high density flow addition process
Chinese hamster ovary cells
medium optimization
protein titer
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分类号
Q784
[生物学—分子生物学]
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