IL-18-PE38重组免疫毒素的原核表达及其鉴定 被引量：4

1

作者 李虹 李明远 +2 位作者 蒋忠华 吕梅励 张林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期753-756,共4页

目的　构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法　首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组... 目的　构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法　首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组载体经限制性内切酶、PCR及 DNA序列测定等证实连接片段的正确性后 ,再转染感受态大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导表达 ,表达产物用 SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果　酶切分析、PCR鉴定和 DNA测序等证实 ,IL - 18- PE38免疫毒素的原核表达载体被成功构建 ,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗 IL - 18的特异性抗体所识别。结论　 IL - 18- PE38融合基因原核表达载体的获得 ,为进一步研究其对 Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 IL-18 绿脓杆菌外毒素 重组免疫毒素 原核表达

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重组免疫毒素对同种小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用 被引量：3

2

作者 王儒鹏 何威 +3 位作者 贺伟峰 张小容 刘树雷 吴军 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期308-310,314,共4页

目的观察重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体小鼠皮肤移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响、移植后外周血T细胞亚群变化以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组... 目的观察重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体小鼠皮肤移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响、移植后外周血T细胞亚群变化以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组小鼠皮肤存活时间延长(13.86±2.11)d,与空白对照组比较相差显著(P<0.01),且与hIL-2-Luffin P1的剂量呈正相关;而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,移植后外周血T细胞亚群活化程度减轻,病理显示hIL-2-Luffin P1处理组移植皮肤淋巴细胞浸润较轻。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制T细胞的异常活化,从而抑制免疫排斥反应,达到延长移植物存活时间的目的。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 小鼠皮肤移植 hIL-2-Luffin P1

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抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的GST融合表达 被引量：4

3

作者 罗良生 王爱东 黄强 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期356-359,共4页

目的　以GST融合蛋白的形式表达SZ39(ScFv) PE40 ,为抗胶质瘤重组免疫毒素的下游研究与开发准备一条可供选择的途径。方法　将已构建的SZ39(ScFv) PE40基因克隆入大肠杆菌GST融合表达载体pGEX 5X 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中以IPT... 目的　以GST融合蛋白的形式表达SZ39(ScFv) PE40 ,为抗胶质瘤重组免疫毒素的下游研究与开发准备一条可供选择的途径。方法　将已构建的SZ39(ScFv) PE40基因克隆入大肠杆菌GST融合表达载体pGEX 5X 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中以IPTG诱导表达。结果　SDS PAGE分析显示表达产物以包涵体形式存在 ,分子质量为 95 0 0 0u左右 ,与融合蛋白GST SZ39(ScFv) PE40的分子质量理论推算值相符 ;Westernblot证实在相应的分子质量处出现特异性显色印迹 ;凝胶灰度扫描显示其表达量约占菌体总蛋白的 2 5 %。结论　重组免疫毒素SZ39(ScFv) PE40也可以与GST融合表达的形式在大肠杆菌中高效表达。 展开更多

关键词 抗胶质瘤 重组免疫毒素 SZ39(ScFv)-PE40 GST 融合表达 胶质瘤

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新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE的初步研究 被引量：2

4

作者 贾怡 李虹 +4 位作者 陈文捷 吕梅励 李明远 蒋忠华 张林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期236-239,共4页

目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390-mRantes(白喉杆菌外毒素390片段-活化T细胞表达与分泌调节因子)的真核表达质粒,并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE,将mRantes导入含有DT390... 目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390-mRantes(白喉杆菌外毒素390片段-活化T细胞表达与分泌调节因子)的真核表达质粒,并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE,将mRantes导入含有DT390的真核表达质粒SRα中,经阳离子纳米脂质体包被后,治疗小鼠EAE,同时对其临床症状、脑部病理改变、外周血相关细胞因子及T/B细胞比例进行检测,了解该重组免疫毒素的治疗效果。结果:成功构建真核表达质粒DT390-mRantes-SRα,治疗组小鼠临床症状减轻,脑部特异性淋巴细胞浸润减少,外周T细胞相关细胞因子表达降低,T/B细胞比例降低。结论:新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE有较为明显的效果,为治疗人的多发性硬化(MS)提供有益的借鉴。 展开更多

关键词 实验性变态性脑脊髓炎 DT390 mRantes 重组免疫毒素

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抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39-PE40的原核表达、纯化及复性研究 被引量：3

5

作者 罗良生 王爱东 黄强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期355-358,共4页

目的　构建抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39 PE4 0基因并在大肠杆菌中表达。对主要以包涵体形式表达的产物进行变性和复性研究。方法　从质粒pVC85中克隆PE4 0基因 ,与抗胶质瘤的单链抗体 (ScFv) SZ39基因进行拼接 ,构建重组免疫毒素SZ39 PE... 目的　构建抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39 PE4 0基因并在大肠杆菌中表达。对主要以包涵体形式表达的产物进行变性和复性研究。方法　从质粒pVC85中克隆PE4 0基因 ,与抗胶质瘤的单链抗体 (ScFv) SZ39基因进行拼接 ,构建重组免疫毒素SZ39 PE4 0基因 ,并在大肠杆菌中表达。对表达产物 (包涵体 )进行分离、纯化、变性及复性处理后 ,以ELISA及免疫荧光技术 ,检查其对胶质瘤细胞的结合活性。结果　SDS PAGE及Westernblot分析显示 ,表达产物的相对分子质量 (Mr)为 6 80 0 0左右 ,与SZ39 PE4 0融合蛋白的理论推算值相符。凝胶灰度扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 0 %。ELISA及免疫荧光技术均证实 ,经复性的SZ39 PE4 0融合蛋白具有结合胶质瘤细胞SHG 4的活性。结论成功地构建并在原核细胞中表达SZ39 PE4 0融合蛋白基因 ,复性的表达产物具有特异性识别胶质瘤细胞的活性 。 展开更多

关键词 胶质瘤 重组免疫毒素 变性 复性

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二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体与人嗜酸性细胞神经毒素重组免疫毒素融合基因的构建及表达 被引量：2

6

作者 付勇 刘彦仿 +3 位作者 赵君 杨守京 孙志伟 刘军 《西北国防医学杂志》 CAS 2004年第5期325-328,共4页

目的 :构建二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体 (hdsFv)与人嗜酸性细胞神经毒素 (hEDN)融合基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 :利用RCR的方法扩增hEDN基因 ,克隆入含抗肝癌hdsFv基因的TIH原核表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3... 目的 :构建二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体 (hdsFv)与人嗜酸性细胞神经毒素 (hEDN)融合基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 :利用RCR的方法扩增hEDN基因 ,克隆入含抗肝癌hdsFv基因的TIH原核表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plyS后 ,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS -PAGE及Westen -blot分析及鉴定。结果 :成功构建了抗肝癌hdsFv -hEDN融合基因原核表达载体 ;SDS -PAGE和Westen -blot分析显示 ,诱导表达产物出现一条Mr约为 4 5 .0KD的新生蛋白带 ,表达量占菌体总蛋白量的 2 2 % ,主要以包涵体形式存在。结论 :抗肝癌hdsFv -hEDN重组免疫毒素融合基因的成功构建及表达 。 展开更多

关键词 肝细胞肝癌 核糖核酸酶 重组免疫毒素 单链抗体: 表达

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抗肝癌hdsFv-hEDN重组免疫毒素的表达及生物学活性 被引量：1

7

作者 付勇 苏雪梅 +3 位作者 刘彦仿 杨守京 赵君 邹赛英 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期220-222,共3页

目的制备对人肝癌细胞具有特异性杀伤活性的抗肝癌重组免疫毒素。方法利用大肠杆菌系统表达抗肝癌hdsFvhEDN基因重组免疫毒素。表达产物经NiNTA亲和层析纯化后,进行特异性杀伤活性检测。结果抗肝癌hdsFvhEDN重组免疫毒素以可溶性形式表... 目的制备对人肝癌细胞具有特异性杀伤活性的抗肝癌重组免疫毒素。方法利用大肠杆菌系统表达抗肝癌hdsFvhEDN基因重组免疫毒素。表达产物经NiNTA亲和层析纯化后,进行特异性杀伤活性检测。结果抗肝癌hdsFvhEDN重组免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化。ELISA法检测证实其具有与相应抗原特异性结合的活性。细胞毒试验表明对肝癌细胞具有杀伤作用,而对正常肝细胞无损伤。结论已成功地制备了具有特异性结合和杀伤活性的抗肝癌hdsFvhEDN基因重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础。 展开更多

关键词 肝癌 免疫毒素 生物学活性 重组免疫毒素

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重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对大鼠肾移植存活时间的影响 被引量：1

8

作者 王儒鹏 何威 +3 位作者 刘树雷 贺伟峰 张小容 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1014-1017,共4页

目的以人IL-2片段与植物毒素Luffin P1重组获得的免疫毒素hIL-2-Luffin P1,观察它对大鼠肾移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体大鼠肾移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响,以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luf... 目的以人IL-2片段与植物毒素Luffin P1重组获得的免疫毒素hIL-2-Luffin P1,观察它对大鼠肾移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体大鼠肾移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响,以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组大鼠存活时间延长(13.86±2.11)d,与对照组比较相差显著(P<0.01);而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,病理结果显示对照组移植肾单位结构破坏,淋巴细胞浸润明显,而在同一时间hIL-2-Luffin P1处理组大鼠的移植肾脏病理变化较轻;T淋巴细胞亚群检测显示经hIL-2-Luffin P1处理后,受体外周血T细胞的活化程度降低。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制免疫排斥反应,延长移植物存活时间。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 肾移植 hIL-2-Luffin P1

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堆型艾美耳球虫单链抗体-PE40重组免疫毒素的构建 被引量：1

9

作者 顾小龙 秦建华 +4 位作者 赵月兰 左玉柱 康桂英 包永占 刘红彬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期779-782,共4页

用HindⅢ对已构建的质粒pT-PE40和原核表达载体pET22-ScFv进行单酶切,回收纯化1 101 bp的PE40基因片段并将其亚克隆至pET22-ScFv载体中,构建重组免疫毒素表达质粒pET22-ScFv-PE40。将该质粒转化入感受态大肠杆菌J M109中增殖,提取质粒后... 用HindⅢ对已构建的质粒pT-PE40和原核表达载体pET22-ScFv进行单酶切,回收纯化1 101 bp的PE40基因片段并将其亚克隆至pET22-ScFv载体中,构建重组免疫毒素表达质粒pET22-ScFv-PE40。将该质粒转化入感受态大肠杆菌J M109中增殖,提取质粒后用SalⅠ和NotⅠ进行双酶切鉴定,得到了1 114 bp和6 181 bp目的基因片段。测序鉴定PE40的插入方向,选取以PE40基因5′端与ScFv基因3′端连接的重组质粒,构建了抗堆型艾美耳球虫重组免疫毒素质粒pET22-ScFv-PE40。抗堆型艾美耳球虫重组质粒pET22-ScFv-PE40经1 mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌中表达约68 000的目的蛋白。使用抗PE多克隆抗体对目的蛋白进行蛋白印迹分析,结果表达产物与抗PE多克隆抗体发生抗原抗体反应,证明融合基因得到表达。 展开更多

关键词 堆型艾美耳球虫 单链抗体 PE40 重组免疫毒素

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狂犬病病毒重组免疫毒素的表达及其生物活性鉴定 被引量：1

10

作者 王化磊 王承宇 +6 位作者 杨松涛 冯娜 郑学星 李群 苏建青 朱平 夏咸柱 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1-5,共5页

将狂犬病病毒中和性单链抗体基因克隆入原核表达载体pET-PE40,经酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组免疫毒素原核表达载体。IPTG诱导后目的蛋白获得高效表达,SDS-PAGE分析目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于菌体中,表达量占菌体总... 将狂犬病病毒中和性单链抗体基因克隆入原核表达载体pET-PE40,经酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组免疫毒素原核表达载体。IPTG诱导后目的蛋白获得高效表达,SDS-PAGE分析目的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于菌体中,表达量占菌体总蛋白的32.29%。包涵体蛋白经体外复性及离子交换色谱柱、疏水作用色谱柱、Sephadex G200凝胶过滤层析柱三步纯化后获得纯度大于96%的目的蛋白,间接免疫荧光染色检测表明重组免疫毒素与狂犬病病毒感染细胞具有抗原结合活性,MTT试验显示,重组免疫毒素对狂犬病病毒感染细胞具有明显的杀伤作用,而对正常细胞无杀伤作用。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 狂犬病病毒糖蛋白 表达 细胞毒作用

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PE类重组免疫毒素的研究进展 被引量：7

11

作者 祁志荣 李虹 《微生物学免疫学进展》 2006年第1期50-53,共4页

PE类重组免疫毒素是将经过修饰加工后失去与细胞结合能力的PE分子与导向分子(载体)通过DNA融合技术而成的新型导向药物。因其可特异性识别、结合和杀伤靶细胞,因而被用来治疗肿瘤、自身免疫性疾病以及AIDS等疾病。目前有许多种PE类免疫... PE类重组免疫毒素是将经过修饰加工后失去与细胞结合能力的PE分子与导向分子(载体)通过DNA融合技术而成的新型导向药物。因其可特异性识别、结合和杀伤靶细胞,因而被用来治疗肿瘤、自身免疫性疾病以及AIDS等疾病。目前有许多种PE类免疫毒素正在进行临床试验,尤其治疗恶性肿瘤方面已取得显著的疗效,预期这些药物在未来几年将取得更长足的发展。本文对目前PE重组免疫毒素的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 PE衍生物 导向治疗 基因治疗

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PE38与人源化抗肝癌单链抗体重组免疫毒素的构建及表达 被引量：1

12

作者 赵强子 窦科峰 刘彦仿 《西北国防医学杂志》 CAS 2002年第6期421-423,共3页

目的 :构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体 (hscFv)原核表达载体 ,对其产物作初步鉴定 ,为肝癌的导向治疗奠定基础。方法 :采用分子克隆技术 ,PCR法扩增PE38基因片段 ,克隆入GST -融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1-hscFv... 目的 :构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体 (hscFv)原核表达载体 ,对其产物作初步鉴定 ,为肝癌的导向治疗奠定基础。方法 :采用分子克隆技术 ,PCR法扩增PE38基因片段 ,克隆入GST -融合蛋白表达载体pGEX - 4T - 1-hscFv中 ,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确 ,受IPTG诱导表达后 ,SDS -PAGE及Westernblot分析GST融合蛋白结果。结果 :成功构建免疫毒素表达载体pGEX - 4T - 1-hscFv -PE38(以下简称pGEXh -PE38) ;SDS -PAGE清晰显示Mr为 90 0 0 0的目的蛋白条带 ,光密度薄层扫描提示表达量为 11% ,Westernblot在相同位置显示蛋白印迹 ,证实载体构建及表达均正确。结论 :利用基因重组技术 ,在原核细胞中表达重组免疫毒素hscFv -PE38。 展开更多

关键词 PE38 人源化抗肝癌单链抗体 重组免疫毒素 构建 肝细胞肝癌

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重组免疫毒素治疗实体瘤的研究进展 被引量：1

13

作者 胡昌辰 柯以铨 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期532-536,共5页

关键词 重组免疫毒素 实体瘤 治疗

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全人源抗肝癌重组免疫毒素的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用

14

作者 王子露 朱进 +4 位作者 丁贵鹏 孙景军 张建平 冯振卿 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期480-483,共4页

目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将... 目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE鄄A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin鄄A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用。方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ鄄Abrin鄄A相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A表达质粒转化E.coliTOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达。表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用。结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60kD;纯化的pBAD/gⅢ鄄A3/Abrin鄄A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml。结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin鄄A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 肝细胞癌 全人抗体 Abrin—A MAGE

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小鼠MIP-1α-DT390重组免疫毒素原核表达载体的构建及鉴定

15

作者 吕梅励 李虹 +5 位作者 梁伟波 李明远 蒋忠华 贾怡 陈文捷 张林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期362-365,共4页

目的构建小鼠MIP-1α基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的原核融合表达载体,诱导并鉴定该蛋白的表达。方法通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,通过PCR扩增质粒SRα-DT390获得DT390基因,酶切、连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重... 目的构建小鼠MIP-1α基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的原核融合表达载体,诱导并鉴定该蛋白的表达。方法通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,通过PCR扩增质粒SRα-DT390获得DT390基因,酶切、连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组质粒证实构建成功后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导融合蛋白表达,并用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法鉴定。结果成功构建了mMIP-1α与DT390基因的原核融合表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达蛋白的相对分子质量与预期值一致,并可被抗mMIP-1α和抗白喉毒素的特异性抗体所识别。结论获得了mMIP-1α与DT390融合基因在原核系统中的稳定表达,为研究其临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 MIP-1Α 白喉杆菌外毒素 重组免疫毒素 原核表达

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mM IP-1α-DT390重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达研究

16

作者 吕梅励 李虹 +5 位作者 梁伟波 陈文捷 贾怡 蒋忠华 张卫东 张林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-5,共5页

目的构建小鼠M IP-1α(mM IP-1α)基因和白喉杆菌外毒素DT 390基因的真核融合表达载体,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR获得mM IP-1α基因,插入含DT 390基因的真核质粒SRα,获得真核表达载体SR-αmM IP-1-αDT 390。重组载体经... 目的构建小鼠M IP-1α(mM IP-1α)基因和白喉杆菌外毒素DT 390基因的真核融合表达载体,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR获得mM IP-1α基因,插入含DT 390基因的真核质粒SRα,获得真核表达载体SR-αmM IP-1-αDT 390。重组载体经PCR、限制性内切酶酶切及DNA序列测定鉴定,用Po lyF ect脂质体转染N IH 3T 3细胞,然后用免疫荧光技术检测目的蛋白的表达,并利用转染N IH 3T 3细胞后的培养上清体外测定mM IP-1-αDT 390融合蛋白的选择性细胞毒活性。结果成功构建真核表达质粒SR-αmM IP-1-αDT 390,mM IP-1-αDT 390融合蛋白可在N IH 3T 3细胞株中正确表达,细胞转染上清对小鼠活化T淋巴细胞具有较强的细胞抑制效应。结论mM IP-1-αDT 390融合基因真核表达载体的获得及功能的部分研究为进一步研究其抗炎效果和临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 巨噬细胞炎症蛋白-1Α 白喉杆菌外毒素 重组免疫毒素 真核表达

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相容性溶质支持下重组免疫毒素的周质腔可溶表达及葡萄糖对其表达的影响 被引量：3

17

作者 任永明 张明生 +3 位作者 何丹 晁开 罗耀武 黄华樑 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期40-44,共5页

在基因工程的实践中,包含体的形成是人们利用大肠杆菌表达外源蛋白的一大难题。本文报道了利用山梨醇、甜菜碱等相容性溶质,在高盐胁迫下,实现了重组免疫毒素在大肠杆菌周质腔中的可溶性表达。同时发现葡萄糖的加入时机对重组免疫毒素... 在基因工程的实践中,包含体的形成是人们利用大肠杆菌表达外源蛋白的一大难题。本文报道了利用山梨醇、甜菜碱等相容性溶质,在高盐胁迫下,实现了重组免疫毒素在大肠杆菌周质腔中的可溶性表达。同时发现葡萄糖的加入时机对重组免疫毒素的表达量有重要的影响。 展开更多

关键词 相容性溶质 重组免疫毒素 周质腔 可溶表达 葡萄糖

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PE重组免疫毒素在肿瘤导向治疗中的应用 被引量：3

18

作者 张小平 杜冰 钱旻 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期52-55,共4页

绿脓杆菌外毒素A(PE)经过修饰后失去了与细胞结合的能力,将单克隆抗体的Fv段或细胞因子作为导向分子与修饰后的PE通过DNA重组技术融合,获得重组的免疫毒素,这种免疫毒素通过导向分子将毒素带到靶细胞,并杀伤靶细胞,因而被广泛运用于肿... 绿脓杆菌外毒素A(PE)经过修饰后失去了与细胞结合的能力,将单克隆抗体的Fv段或细胞因子作为导向分子与修饰后的PE通过DNA重组技术融合,获得重组的免疫毒素,这种免疫毒素通过导向分子将毒素带到靶细胞,并杀伤靶细胞,因而被广泛运用于肿瘤的导向治疗。 展开更多

关键词 PE衍生物 导向分子 重组免疫毒素 导向治疗

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基因重组免疫毒素白细胞介素18-PE38融合基因治疗类风湿性关节炎的初步研究 被引量：2

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作者 吴瑕 杨春蕾 +3 位作者 张林 李虹 陶大昌 屈艺 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期306-309,共4页

目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18-... 目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18- PE38融合基因,将其与真核表达载体Psec Tag2 B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,Eco R 单酶切鉴定。脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况。　结果　Eco R 单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体Psec Tag2 B- IL- 18- PE38片段长度约为6 0 0 0 bp。荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。　结论　IL- 18- PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素 融合基因治疗 重组免疫毒素 免疫细胞化学法 步研究 PsecTag2B 真核表达载体构建 3T3细胞 EcoRⅠ 软骨细胞 基因治疗方法 限制性内切酶 脂质体转染法 荧光显微镜 克隆培养 酶切鉴定 表达情况

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大鼠IP-10-PE38 KDEL重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达 被引量：1

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作者 孙岚 祁志荣 +5 位作者 张琴 林媛 李明远 张林 蒋忠华 李虹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期482-485,共4页

目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDE... 目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL。重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH3T3细胞的表达。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH3T3细胞表达。结论rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 rIP-10 PE38KDEL 重组免疫毒素 NIH 313细胞 真核表达

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