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酶促重组酶扩增-侧流层析快速检测沙门菌的方法研究 被引量：1
1
作者 聂艳妮 闫梅英 宋衍燕 《预防医学》 2023年第12期1102-1104,共3页
目的建立一种酶促重组酶扩增(ERA)和侧流层析技术(LF)相结合的沙门菌快速检测方法,为沙门菌现场检测提供技术支持。方法根据沙门菌属高度保守的鞭毛基因fimY设计特异性ERA引物,采用毛细管电泳筛选合适的引物,再设计探针,对扩增温度和时... 目的建立一种酶促重组酶扩增(ERA)和侧流层析技术(LF)相结合的沙门菌快速检测方法,为沙门菌现场检测提供技术支持。方法根据沙门菌属高度保守的鞭毛基因fimY设计特异性ERA引物,采用毛细管电泳筛选合适的引物,再设计探针,对扩增温度和时间进行优化,建立ERA-LF检测体系对菌株DNA进行扩增,采用侧向流试纸条检测产物。采用鼠伤寒沙门菌标准菌株检验方法的灵敏度,采用10种其他肠道感染标准菌株检验特异度,采用实际分离到的沙门菌验证对实际样本检测能力。结果经过毛细管电泳筛选获得沙门菌特异性引物,在扩增温度为37℃、反应时间为20 min的条件下,最低检测浓度为5 copies/μL。本方法对沙门菌核酸扩增结果为阳性,10株其他肠道感染菌核酸扩增结果均为阴性,特异度较好。对100株(包含10种血清型)沙门菌进行检测,结果均显示阳性。结论本研究建立的ERA-LF方法可用于沙门菌的现场即时检测。 展开更多
关键词 酶促重组酶扩增 侧流层析 沙门菌 即时检测
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基于B646L、EP402R、MGF360/505基因的非洲猪瘟病毒ERA检测方法的建立 被引量：11
2
作者 曾宇晨 龚浪 +5 位作者 王京煜 潘昊鸣 梁杏玲 马俊 张桂红 王衡 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期33-40,共8页
【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序... 【目的】建立一种基于酶促重组酶扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)DNA快速检测方法。【方法】参考ASFV B646L基因、EP402R基因和多基因家族成员MGF360/505基因保守序列,设计特异性的ERA探针和引物,经过反应条件的优化,建立42℃等温条件下检测ASFV DNA的ERA方法。【结果】ERA-ASFV-B646L、ERA-ASFV-EP402R和ERA-ASFV-MGF3个检测方法分别在16、7和13 min内即可得出检测结果;特异性强,对阳性样品拷贝数的检测下限均为102μL-1;与我国非洲猪瘟诊断技术标准中的方法对比,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的ERA检测方法可以用于ASFV的快速检测,为流行病学调查和现场检测提供了一种快速有效的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 酶促重组酶扩增 等温扩增 快速检测
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