组织工程化软骨细胞移植修复膝关节大面积全层软骨缺损 被引量：5

1

作者 冯文哲 陆伟 +7 位作者 许鉴 朱伟民 欧阳侃 彭亮权 柳海峰 李皓 陈康 李瑛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第14期2152-2156,共5页

背景:目前应用正常透明软骨来移植修复软骨大面积全层缺损已成为热点,但缺乏较大样本的组织工程化软骨移植的疗效随访研究。目的:观察组织工程化软骨细胞移植治疗膝关节大面积全层软骨缺损的方法及疗效。方法:纳入21例(23膝)OutbridgeⅢ... 背景:目前应用正常透明软骨来移植修复软骨大面积全层缺损已成为热点,但缺乏较大样本的组织工程化软骨移植的疗效随访研究。目的:观察组织工程化软骨细胞移植治疗膝关节大面积全层软骨缺损的方法及疗效。方法:纳入21例(23膝)OutbridgeⅢ-Ⅳ度的膝关节软骨缺损患者,其中缺损面积为3.5-11.2 cm2,对患者进行组织工程化软骨细胞移植治疗,术后按康复计划进行膝关节功能锻炼,并定期随访复查膝关节MRI及目测类比疼痛评分、国际膝关节文献委员会主观膝部、Lysholm评分等指标。结果与结论:(1)疼痛情况:患者随访时间为3-12个月,所有患者术后关节疼痛不适均有明显改善,目测类比疼痛评分较术前有明显下降(P<0.05),所有患者在术后1年基本表现为无痛;(2)影像学改变:所有患者术后1年复查MRI均显示软骨修复良好,受区软骨厚度及MRI信号与周围软骨一致,骨质与周边骨质完全愈合;(3)膝关节功能:术后3,6,12月国际膝关节文献委员会主观膝部评分及Lysholm评分均较术前有较明显提高(P<0.05);(4)结果证实,组织工程化软骨细胞移植作为一种改进的软骨细胞移植方法安全有效,是修复软骨缺损的一种可靠方式。 展开更多

关键词 组织工程 膝关节 软骨 软骨缺损 软骨移植 全层 自体 培养 组织工程化软骨移植术 软骨组织构建

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不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA 被引量：2

2

作者 孙志涛 牛维 +1 位作者 何升华 林定坤 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第51期8201-8205,共5页

背景:目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法,国内文献报道多为经典Trizol法,在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要。目的:探索不同方法提取SD大鼠软骨组织总RNA的区别。方法:选取3月龄SD大鼠9只,分别采用Rneasy Lipid T... 背景:目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法,国内文献报道多为经典Trizol法,在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要。目的:探索不同方法提取SD大鼠软骨组织总RNA的区别。方法:选取3月龄SD大鼠9只,分别采用Rneasy Lipid Tissue Kit、RNAout试剂盒和经典Trizol法对软骨组织进行总RNA提取,并通过RNA琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,以探寻软骨总RNA最佳提取方案。结果与结论:Trizol法提取的RNA A260/A280值为1.58,说明纯度不高;RNAout法提取的RNA,由于软骨含有大量的蛋白多糖和胶原,也不能满足后续实验的需要;RNeasyMini Kit法和肝(Trizol)法提取RNA的A260/A280值分别为2.00和1.98,说明提取的总RNA或核酸的纯度高。RNA的完整性电泳结果显示,RNeasyMini Kit法、RNAout法和肝(Trizol)法可见28 s、18 s及5 s条带,而Trizol法未见任何条带,RNAout法28 s和18 s条带不清楚。结果提示Rneasy Lipid Tissue Kit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好,并能成功反转录合成双链c DNA,而RNAout试剂盒和经典Trizol法获得的总RNA不能满足后续实验需要。 展开更多

关键词 软骨 RNA 大鼠 组织构建 软骨组织构建 RNA提取 国家自然科学基金

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膝关节腔内培养骨髓间充质干细胞复合脱钙骨的组织工程软骨 被引量：2

3

作者 徐斌 王英明 +1 位作者 徐洪港 王瑞 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第24期4371-4379,共9页

背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DME... 背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DMEM/F12完全培养基培养,成软骨诱导条件培养基诱导分化。取同种异体兔的髂骨和椎体骨制作成脱钙骨支架,诱导后的骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨支架上,培养1d后将细胞-支架复合物用筋膜包裹置于兔左膝关节腔内培养,单纯脱钙骨支架筋膜包裹置入右膝关节腔。于培养第4,8,12周分别取材,行大体观察并制成石蜡切片,采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色方法进行组织学观察。结果与结论:培养4,8周,细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化的平均吸光度值(A)分别为0.263±0.031,0.340±0.052,单纯支架组标本分别为0.147±0.027,0.165±0.030,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);培养12周细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化A值平均为0.362±0.037,标本类似正常软骨外观,Ⅱ型胶原免疫组化反应呈阳性;而单纯支架组脱钙骨支架降解。培养12周细胞-支架组苏木精-伊红染色结果显示细胞数量多,脱钙骨支架基本被吸收;而甲苯胺蓝染色结果显示有被染成紫红色的异染性基质形成。结果提示兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨可在兔膝关节腔内培养出组织工程软骨。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 骨髓间充质干细胞 细胞支架蛋白质类 同种异体 脱钙骨 组织工程软 骨细胞 兔 省级基金

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软骨终板形态与椎间盘退变的相关性 被引量：23

4

作者 薄冉 杨庆国 +2 位作者 段文 刘金锐 张银顺 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第24期4413-4416,共4页

背景:以往研究证明多种内环境因素共同作用引发椎间盘退变,最重要的机制为椎间盘软骨终板的退变。目的:分析椎间盘退变与终板形态的关系。方法:回顾性分析62例因椎间盘源性慢性下腰痛和79例因髓核脱出致神经根性症状患者的腰椎MRI正中... 背景:以往研究证明多种内环境因素共同作用引发椎间盘退变,最重要的机制为椎间盘软骨终板的退变。目的:分析椎间盘退变与终板形态的关系。方法:回顾性分析62例因椎间盘源性慢性下腰痛和79例因髓核脱出致神经根性症状患者的腰椎MRI正中矢状位图像资料。根据腰椎MRI正中矢状位T1W1图像确定终板形态,T2W1图像确定椎间盘退变程度分级。结果与结论:平坦型和不规则型终板最常见于椎间盘退变人群下腰椎,L5/S1平坦型最多见。髓核脱出组与椎间盘源性慢性下腰痛组中凹陷型终板椎间盘退变程度均较平坦型、不规则型低,平坦型终板椎间盘退变程度较不规则型低(P<0.01)。两组间凹陷型与不规则型终板椎间盘退变程度差异无显著性意义,髓核脱出组平坦型椎间盘退变程度较椎间盘源性慢性下腰痛组高(P<0.05)。提示随着椎间盘退变程度的加重,软骨终板形态有由凹陷型向平坦型、不规则型依次转变的趋势。 展开更多

关键词 软骨终板 MRI 腰椎 退行性变 椎间盘 软骨组织构建

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Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞 被引量：25

5

作者 闫虎 苏友新 +3 位作者 林学义 陈宝军 周必洪 张庆 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第50期8647-8653,共7页

背景:目前关节软骨细胞的分离培养技术已经比较成熟,但是研究中发现通过目前技术培养的软骨细胞生长周期慢,容易出现退变现象,不利于后续试验的进行。目的:改进并探讨4周龄新西兰大白兔膝关节软骨细胞的分离与培养的方法。方法:无菌条... 背景:目前关节软骨细胞的分离培养技术已经比较成熟,但是研究中发现通过目前技术培养的软骨细胞生长周期慢,容易出现退变现象,不利于后续试验的进行。目的:改进并探讨4周龄新西兰大白兔膝关节软骨细胞的分离与培养的方法。方法:无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法,分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养;采用形态学观察,甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对关节软骨细胞进行鉴定;MTT法检测关节软骨细胞增殖情况。结果与结论:倒置显微镜下见膝关节软骨分离的原代软骨细胞6 h后开始贴壁,72 h可形成单层,96 h即可传代;前3代软骨细胞表型稳定,增殖力良好;第4,5代软骨细胞增殖能力减弱,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色,细胞核染成深蓝色;免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色阳性表达;MTT法检测表明前3代软骨细胞增殖差异无显著性意义(P>0.05),且第1-3代与4代软骨细胞在培养第4-7天时,吸光度值差异有显著性意义(P<0.05),与第5代软骨细胞在培养1-7天时,吸光度值差异有显著性意义(P<0.05)。提示采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法能够获得大量生长速度快且不宜退变的新西兰大白兔膝关节软骨细胞,且培养的前3代新西兰兔膝关节软骨细胞最为适宜。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨细胞 体外培养 II型胶原酶 骨关节炎 退变 表型 软骨 国家自然科学基金

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威灵仙提取物干预膝骨关节炎软骨细胞的生长活力 被引量：23

6

作者 徐扬 桂鉴超 +4 位作者 高峰 徐燕 王黎明 陆一鸣 尹昭伟 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期241-246,共6页

背景:近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过... 背景:近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过抑制软骨细胞凋亡来实现尚未见相关报道。目的:观察中药威灵仙提取物对膝骨关节炎软骨细胞生长活力的影响。方法:取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0g/L威灵仙提取物培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养。Live/Dead染色法测定人软骨细胞活力指数,TUNEL染色法测定人软骨细胞凋亡指数。结果与结论:0.05,0.1g/L威灵仙提取物能明显提高软骨细胞活力,而0.5,1.0g/L威灵仙提取物反而降低了软骨细胞活力,其活力指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05);0.01,0.05,0.1g/L威灵仙提取物能有效抑制软骨细胞凋亡,1.0g/L威灵仙提取物反而促进了软骨细胞凋亡,其凋亡指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结果可见威灵仙提取物在合适的质量浓度时能有效提高人软骨细胞活力,抑制人软骨细胞凋亡,尤以0.1g/L时效果最佳。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 威灵仙 软骨细胞 骨关节炎 凋亡 细胞活力 凋亡指数 活力指数 组织构建图片文章

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胰岛素样生长因子1促进创伤性关节炎软骨细胞的体外增殖 被引量：8

7

作者 赵广 荆吉峰 +2 位作者 张治宇 朱佳俊 崔岩 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第2期183-186,共4页

背景:早期受损的软骨细胞在体外培养时容易产生去分化,表型不稳,常需添加一定的生长因子。目的:观察胰岛素样生长因子1对成年兔创伤性关节炎早期关节软骨细胞体外增殖的促进作用。方法:采用改良Hulth法制备成兔创伤性关节炎模型,造模成... 背景:早期受损的软骨细胞在体外培养时容易产生去分化,表型不稳,常需添加一定的生长因子。目的:观察胰岛素样生长因子1对成年兔创伤性关节炎早期关节软骨细胞体外增殖的促进作用。方法:采用改良Hulth法制备成兔创伤性关节炎模型,造模成功后无菌条件下片状切取股骨远端及胫骨近端,用消化培养法培养软骨细胞。将软骨细胞随机分为2组,对照组加入含体积分数10%胎牛血清因子的DMEM培养液培养;实验组在对照组的基础上加入100μg/L的胰岛素样生长因子1。通过细胞形态学、细胞计数、细胞活性检测胰岛素样生长因子1对创伤性关节炎关节软骨细胞增殖的影响。结果与结论:成功培养出早期创伤性关节炎兔软骨细胞,细胞多数为小细胞,形态有小梭形、小圆形及小多边形。苏木精-伊红染色显示实验组细胞数量多于对照组,MTT实验证实实验组细胞的吸光度值大于对照组(P<0.01)。结果提示,胰岛素样生长因子1能促进早期创伤性关节炎模型兔软骨细胞的体外增殖。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 胰岛素样生长因子1 种子细胞 软骨细胞 创伤性关节炎 兔

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碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡 被引量：8

8

作者 姜丽平 李龙婕 +3 位作者 宫德正 耿成燕 姜丽杰 仲来福 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期247-253,共7页

背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨... 背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨细胞培养体系;荧光显微镜和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡;激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计评估线粒体膜电位的改变;荧光分光光度法测定活性氧水平改变;免疫印迹法检测凋亡调控蛋白细胞色素C和caspase-3的表达。结果与结论:碘乙酸钠剂量依赖性地诱导软骨细胞凋亡,使活性氧水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05),凋亡调控蛋白的表达明显增加。提示碘乙酸钠诱导的原代大鼠软骨细胞凋亡主要与活性氧的产生及线粒体介导的caspase-3活化有关。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨细胞 碘乙酸钠 活性氧 线粒体膜电位 细胞色素C CASPASE-3 凋亡 组织构建图片文章

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体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象 被引量：14

9

作者 徐磊 叶朝阳 +1 位作者 周燕 谭文松 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第20期3626-3634,共9页

背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代... 背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较。结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化。细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红O染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低。半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化。结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 关节软骨损伤 软骨组织工程 兔 软骨细胞 传代培养 去分化 细胞形态 细胞生长 组织学染色 基因表达 部级基金

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早期骨关节炎软骨下骨趋化因子信号通路的表达 被引量：5

10

作者 张荣凯 叶志强 +5 位作者 陈琰 方航 张颂阳 吴兆亚 赵庆 蔡道章 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1925-1930,共6页

背景:趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。目的:分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在... 背景:趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。目的:分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在骨关节炎致病机制中的重要作用提供依据。方法:30只SD大鼠随机均分为实验组和对照组。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于造模后1,2,4周取右膝关节标本,采用全基因表达谱芯片技术研究软骨下骨全基因表达,利用差异基因分析、信号通路分析的方法分析趋化因子信号通路的表达改变情况。结果与结论:①发现一系列与趋化因子信号通路相关的差异表达基因。②实验组与对照组相比较,趋化因子信号通路在造模后1周差异有显著性意义(P<0.05),造模后2,4周差异无显著性意义(P>0.05)。说明趋化因子信号通路在极早期膝关节骨关节炎的软骨下骨改变中起重要作用。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 基因芯片 骨性关节炎 软骨下骨 趋化因子 信号通路 半月板 内侧副 韧带 炎症组织 免疫应答 成骨细胞 863项目

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大鼠髁突软骨细胞凋亡与胰岛素样生长因子1的影响 被引量：3

11

作者 魏立 江莉婷 +2 位作者 周琦 朱雅萍 高益鸣 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第33期5901-5908,共8页

背景:胰岛素样生长因子 1 参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。目的:探索胰岛素样生长因子 1 对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子 Bcl-2 和 BaxmRNA 及蛋白表达变化的影响。方法:体外培养并鉴定出生后... 背景:胰岛素样生长因子 1 参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。目的:探索胰岛素样生长因子 1 对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子 Bcl-2 和 BaxmRNA 及蛋白表达变化的影响。方法:体外培养并鉴定出生后 1,28 d 大鼠髁突软骨细胞后,将每个年龄组的髁突软骨细胞分别分为实验组和对照组。饥饿培养 24 h 后,实验组加入 100 μg/L 重组大鼠胰岛素样生长因子 1 细胞因子孵育 48 h,对照组正常培养。结果与结论:与对照组相比,实验组加入重组胰岛素样生长因子 1 后,髁突软骨细胞数量增多,增殖速度显著增加(P < 0.05)。实时 PCR 和 Western blot 检测显示,加入重组胰岛素样生长因子 1 培养 48 h 后,各组髁突软骨细胞中 bcl-2 mRNA 和蛋白表达增加,bax mRNA 和蛋白表达减少(P < 0.05)。提示胰岛素样生长因子 1 可以促进新出生及青春期大鼠髁突软骨细胞增殖,抑制其凋亡,并可能通过 Bcl-2 和 Bax 介导抑制凋亡。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 胰岛素样生长因子 1 下颌骨髁突 软骨细胞 细胞凋亡 细胞增殖 BAX Bcl-2 省级基金

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周期性张应力与软骨细胞基质金属蛋白酶的表达 被引量：5

12

作者 刘兴漠 孙青 +3 位作者 项禹诚 梅新君 黄胜 潘滔 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5157-5163,共7页

背景:课题组前期研究证实,在关节软骨缺损及骨性关节炎的动物模型中,软骨细胞可过度表达基质金属蛋白酶,各种异常刺激均可能打破基质金属蛋白酶与金属蛋白酶组织抑制因子间平衡,从而导致关节软骨细胞外基质退变,软骨细胞功能下降和失调... 背景:课题组前期研究证实,在关节软骨缺损及骨性关节炎的动物模型中,软骨细胞可过度表达基质金属蛋白酶,各种异常刺激均可能打破基质金属蛋白酶与金属蛋白酶组织抑制因子间平衡,从而导致关节软骨细胞外基质退变,软骨细胞功能下降和失调。目的:观察兔关节软骨缺损修复过程中周期性张应力对软骨细胞基质金属蛋白酶表达的影响。方法:建立兔单侧膝关节软骨缺损模型,术后10周分离软骨细胞体外培养,非手术侧软骨细胞为正常组,术侧软骨细胞随机分为高应力组、低应力组及对照组,加载幅度为sin10%,0.1,1.0,0Hz的周期性张应力,于24h、48h、1周、2周和4周后RT-PCR测定各组基质金属蛋白酶2,3,9,13的表达。结果与结论:加载周期性张应力24h后,正常组及对照组间的基质金属蛋白酶2,3,9,13的表达差异有显著性意义(P<0.05);加载周期性张应力1周、2周及4周后高应力组和低压力组间差异有显著性意义(P<0.05);同时发现,低应力组中基质金属蛋白酶2,3,9,13的表达持续下降,加载周期性张应力24h与4周之间的差异有显著性意义(P<0.05)。可见力学载荷可影响兔关节软骨缺损修复过程中基质金属蛋白酶的表达,在细胞分子水平上,关节软骨缺损病理的发生发展与应力相互影响。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 周期性张应力 软骨细胞 基质金属蛋白酶 应力 关节软骨缺损 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶3 基质金属蛋白酶9 基质金属蛋白酶13 省级基金

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人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞的共培养 被引量：5

13

作者 张立智 蒋垚 +1 位作者 毛彦杰 黄成龙 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1909-1916,共8页

背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构... 背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构建两者共培养的细胞培养模型,探讨软骨下骨成骨细胞对软骨细胞的作用。方法:收集骨关节炎患者行全膝关节置换和严重创伤患者行截肢后遗弃的胫骨平台组织,采用Ⅰ型胶原酶连续消化后进行贴壁培养的方法,培养软骨下骨的成骨细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化方法,培养软骨细胞,然后应用多孔插入器细胞培养池构建成骨细胞和软骨细胞三维共培养模型。结果与结论:通过免疫组化,NBT/BCIP染色,茜素红染色等检查,证实成功培养出成骨细胞和软骨细胞。实时定量RT-PCR显示,在与骨关节炎的软骨下骨成骨细胞共培养的软骨细胞中,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达明显下降。可见骨关节炎患者的成骨细胞能促进软骨细胞的退变。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨下骨 成骨细胞 软骨细胞 骨关节炎 共培养 实时定量RT-PCR Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 Ⅰ型胶原 碱性磷酸酶 国家自然科学基金 组织构建图片文章

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聚羟基烷酸酯聚合物负载软骨细胞修复同种异体喉软骨缺损 被引量：2

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作者 孙安科 李万同 +5 位作者 刘松波 张贺 孙伟 陈伟 史春海 唐维维 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第41期7181-7187,共7页

背景:软骨组织工程基础研究相当深入,但在耳鼻咽喉科实际应用研究颇少,探索组织工程技术简便实用的喉软骨修复方法是值得研究的课题。目的:比较多孔海绵状聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料负载软骨细胞体外培养形成的初期组织... 背景:软骨组织工程基础研究相当深入,但在耳鼻咽喉科实际应用研究颇少,探索组织工程技术简便实用的喉软骨修复方法是值得研究的课题。目的:比较多孔海绵状聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料负载软骨细胞体外培养形成的初期组织工程软骨组织与体内植入一定时期形成的较成熟组织工程软骨组织修复同种异体甲状软骨缺损的效果。方法:收集体外培养第3代乳兔(3 d龄)软骨细胞,以多孔海绵状聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物生物材料为细胞外基质,采用组织工程技术制备细胞-材料复合物,共同体外培养形成初级组织工程软骨组织后直接应用于成兔甲状软骨缺损的修复(实验组A,n=5)或将初级组织工程软骨组织体内植入一定时期形成较成熟组织工程软骨再应用于甲状软骨缺损的修复(实验组B,n=5)。设单纯聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物材料修复组(对照A组,n=4)和单纯软骨细胞修复组(对照B组,n=4)作为对照。分别于术后4周(实验B组)和8周(实验A组、对照A组、对照B组)取材,对甲状软骨缺损修复效果进行大体和组织学评价。结果与结论:两者大体支架形态基本一致,修复区与原有软骨均相续平坦,无凹陷及缺损。但实验A组存在界面无细胞区,修复区基质分泌不丰富;实验B组界面区有细胞生长,基质分泌良好。两者炎细胞浸润均不明显。对照组修复区凹陷,呈暗红色软组织充填,组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。结果表明在有免疫力的动物体内,初级组织工程软骨组织直接应用与体内植入后再应用均能有效修复同种异体甲状软骨缺损,无明显免疫反应;相同时期内,应用较成熟组织工程软骨组织修复效果优于应用初级组织工程软骨组织。然而,直接应用初级组织工程软骨组织可节省时间、成本、工作量及操作环节,避免二次皮下手术的痛苦,是比较实用的方法之一。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 同种异体 组织工程 软骨 软骨细胞 甲状软骨 聚羟基丁酸酯与聚羟基己酸酯共聚物材料 其他基金

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成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用 被引量：2

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作者 苏晓川 王义生 +1 位作者 郭艳幸 曹向阳 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第33期6116-6120,共5页

背景:人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。目的:体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞... 背景:人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。目的:体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用。方法:实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数。同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。结果与结论:对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强(P<0.05),到第7天细胞数约为接种时的18倍(P<0.05)。免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义(P>0.05)。说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖。 展开更多

关键词 软骨细胞 增殖 成人 细胞培养 人参皂甙RG1 中医药 软骨组织构建

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高脂饮食兔膝关节软骨的变化 被引量：4

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作者 吴松 王鑫 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第42期6775-6778,共4页

背景:血清胆固醇水平增高与人群中骨关节病发病率增高呈正相关,而对于高脂饮食是否参与关节软骨退变过程从而诱发骨关节炎,目前尚不清楚。目的:观察经高脂喂养后新西兰兔膝关节软骨形态学改变,探索饮食在关节软骨退变过程中的作用。方法... 背景:血清胆固醇水平增高与人群中骨关节病发病率增高呈正相关,而对于高脂饮食是否参与关节软骨退变过程从而诱发骨关节炎,目前尚不清楚。目的:观察经高脂喂养后新西兰兔膝关节软骨形态学改变,探索饮食在关节软骨退变过程中的作用。方法:将新西兰兔40只随机分为2组:对照组饲以基础饲料,高脂组饲以高脂饲料(20%猪油混合80%的基础饲料)。每4周末抽取空腹血样,测三酰甘油、总胆固醇水平。饲养28周后,取兔膝关节行大体观察后,取股骨髁部软骨行扫描电镜观察。结果与结论:与对照组相比,高脂组血清三酰甘油、总胆固醇水平均显著升高(P<0.05)。扫描电镜观察发现,高脂组髁软骨表面粗糙,陷凹变浅,排列杂乱,形态不规则,大小不均,软骨表面呈局灶性剥脱改变,排列变得不规整,孔隙不均匀,软骨表面出现断裂空洞。进一步放大倍数观察可见软骨表面小山峰样结构变浅、变平,孔隙基本消失。结果证实,长期高脂饮食可诱发和加重软骨损伤,提示其可能参与了骨关节炎的发生发展。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 高脂 饮食 膝关节 软骨 形态 组织工程 湖南省自然科学基金

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缺血再灌流股骨头骺影响关节软骨细胞的凋亡 被引量：1

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作者 张敬东 易先宏 李玉安 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5133-5138,共6页

背景:缺血再灌注后可以引起关节软骨的退行性变化,但其中具体机制尚无公识。目的:观察发育期髋关节股骨头骺关节软骨及缺血再灌注后关节软骨的退行性变化及其细胞凋亡现象。方法:80只SD大鼠随机分为2组,缺血再灌注组建立髋关节缺血再灌... 背景:缺血再灌注后可以引起关节软骨的退行性变化,但其中具体机制尚无公识。目的:观察发育期髋关节股骨头骺关节软骨及缺血再灌注后关节软骨的退行性变化及其细胞凋亡现象。方法:80只SD大鼠随机分为2组,缺血再灌注组建立髋关节缺血再灌注实验动物模型,假手术组开腹暴露腹主动脉5min常规关腹。于模型建立后6h,12h,24h,48h,5d,2周,4周不同时点对股骨头骺关节软骨进行光镜病理形态学观察,同时对标本进行TUNEL法检测股骨头骺关节软骨细胞凋亡现象。结果与结论:缺血再灌注组术后光镜观察到软骨细胞变性、减少、基质可见局限性纤维化等关节软骨退行变化,两组TUNEL法检测均观察到关节软骨细胞的凋亡现象,假手术组偶见有散在分布5个以下的软骨细胞凋亡,缺血再灌注组观察到48h可见10-30个软骨细胞发生凋亡。结果提示,缺血再灌注对髋关节股骨头骺关节软骨可引起退行性改变,发育期髋关节缺血再灌注后关节软骨的细胞凋亡可能参与关节软骨的损害,抑制关节软骨的细胞凋亡可能有助于防治早发的骨关节炎。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 缺血再灌注 股骨头骺 髋关节 关节软骨 细胞凋亡 软骨细胞 动物模型

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RhoA/ROCK信号通路在异常应力下关节软骨中的表达

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作者 张海翔 王宸 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期235-240,共6页

背景:RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的:探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法:采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右... 背景:RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的:探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法:采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右膝关节胫骨平台负重面全层软骨进行苏木精-伊红染色、番红O染色及RhoA、ROCK免疫组织化学染色,比较制动前后软骨组织学、病理积分及RhoA、ROCK表达变化情况。结果与结论:随着制动时间的延长,关节软骨退变程度逐渐加重,Mankin评分逐渐增加,且各组评分之间差异有显著性意义(P<0.05)。免疫组织化学提示RhoA、ROCK表达变化主要集中在切线层及中间层软骨,且二者在关节软骨退变过程中表达变化趋势一致,均为先增多后减少。结果表明,在关节软骨退变过程中,RhoA/ROCK信号通路表达先递增后逐渐降低,RhoA/ROCK信号通路在异常应力所致的关节软骨退变过程中发挥了效应。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 异常应力 关节软骨 RHOA ROCK 免疫组织化学 制动 组织构建图片文章

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人参皂苷Rg1对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响 被引量：6

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作者 张业勇 程文丹 +2 位作者 陈哲峰 范卫民 刘锋 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1917-1924,共8页

背景:人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。目的:探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2mRNA表达的影响... 背景:人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。目的:探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2mRNA表达的影响。方法:取因骨关节炎接受全膝关节置换患者的膝关节软骨进行体外培养,取第2代体外培养的软骨细胞,CCK-8检测0.001,0.01,0.1,1,10,100mg/L人参皂苷Rg1对软骨细胞增殖率的影响。再将第2代体外培养的关节软骨细胞,随机分为空白组、对照组和实验组,分别加入DMEM培养液、10μg/L白细胞介素1β,10μg/L白细胞介素1β+0.1,1,10,100mg/L人参皂苷Rg1,培养24h后反转录PCR检测各组细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA的表达。结果与结论:与对照组相比,人参皂苷Rg1质量浓度为0.001,0.01,0.1,1mg/L时促进软骨细胞的增殖作用不明显,差异无显著性意义(P>0.05);当人参皂苷Rg1质量浓度为10,100mg/L时,促进软骨细胞的增殖作用明显(P<0.05)。与空白组相比,对照组的软骨细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达明显下降,而环氧合酶2mRNA表达明显升高(P<0.05);与对照组相比,联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为0.1和1mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA表达没有明显变化(P>0.05);而联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为10和100mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达增加,而环氧合酶2mRNA表达降低(P<0.05)。说明一定浓度的人参皂苷Rg1可以拮抗白细胞介素1β引起的人软骨细胞中Ⅱ型胶原的mRNA表达的降低和环氧合酶2mRNA表达的升高。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 人参皂苷RG1 Ⅱ型胶原 环氧合酶2 软骨细胞 白细胞介素1β 反转录聚合酶链反应 骨关节炎 CCK-8 组织构建图片文章

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黄芪甲苷通过炎症小体活化影响软骨细胞炎性因子的表达 被引量：20

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作者 余素姣 谭慧 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第11期1652-1656,共5页

背景:有研究表明黄芪甲苷对关节炎具有保护作用,但其对软骨细胞炎症反应及其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对脂多糖促使软骨细胞NLRP3炎症小体活化及炎性因子表达的影响。方法:体外原代培养武汉巴菲尔生物有限公司提供的SD大鼠... 背景:有研究表明黄芪甲苷对关节炎具有保护作用,但其对软骨细胞炎症反应及其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对脂多糖促使软骨细胞NLRP3炎症小体活化及炎性因子表达的影响。方法:体外原代培养武汉巴菲尔生物有限公司提供的SD大鼠软骨细胞,根据不同干预方法分为对照组、脂多糖(1 mg/L)诱导组、脂多糖+低剂量(25 mmol/L)黄芪甲苷组、脂多糖+中剂量(50 mmol/L)黄芪甲苷组、脂多糖+高剂量(100 mmol/L)黄芪甲苷组,脂多糖与不同浓度黄芪甲苷共同处理细胞24 h,采用细胞计数法分析细胞相对存活率,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α水平,蛋白免疫印迹法检测NLRP3炎症小体、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1、白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α蛋白表达水平。结果与结论:(1)软骨细胞形态:细胞核呈蓝色、胞质呈红色。与脂多糖诱导组比较,不同浓度黄芪甲苷组中软骨细胞相对存活率显著升高(P <0.05);(2)炎性因子变化:黄芪甲苷各剂量组细胞上清中炎性因子白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α水平显著降低(P <0.05),软骨细胞中NLRP3炎症小体、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1、白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α蛋白表达水平显著降低(P <0.05),呈浓度依赖性;(3)结果证实,黄芪甲苷能够抑制NLRP3炎症小体活化影响软骨细胞白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α蛋白的产生,进而抑制关节软骨细胞炎症损伤。 展开更多

关键词 黄芪 黄芪甲苷 软骨 软骨细胞 炎症小体 炎症因子 软骨组织构建 组织工程 脂多糖类

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