阿卡维基转移酶的异源表达及转糖基作用

1

作者 薛正莲 王雨晴 +3 位作者 李闯 李丹丹 朱司宝 李翔飞 《食品科学》 EI CAS 北大核心 2025年第2期81-88,共8页

为深入研究阿卡波糖合成途径中关键酶——阿卡维基转移酶(acarviosyltransferase,ATase)的结构性质和催化功能,从犹他游动放线菌Actinoplanes sp.SE50基因组中扩增其编码基因acbD,并实现在Escherichia coli中的异源表达。生物信息学分... 为深入研究阿卡波糖合成途径中关键酶——阿卡维基转移酶(acarviosyltransferase,ATase)的结构性质和催化功能,从犹他游动放线菌Actinoplanes sp.SE50基因组中扩增其编码基因acbD,并实现在Escherichia coli中的异源表达。生物信息学分析表明acbD表达产物ATase的保守结构域与糖苷水解酶家族13的环糊精糖基转移酶高度相似,且存在信号肽和跨膜区。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,在去除信号肽的编码序列后,acbD的可溶性表达水平提高了22.4倍。重组ATase的最适催化温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0。底物谱分析表明重组ATase催化D-水杨苷的活力最高,为82.85 U/mL,其次是L-山梨糖(63.75 U/mL),也是首次发现L-山梨糖可作为ATase的优良糖基供体。以上结果为进一步明确ATase的催化机制奠定了基础。 展开更多

关键词 阿卡维基转移酶 阿卡波糖 异源表达 转糖基作用 酶学性质

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β葡萄糖苷酶的转糖基作用主产物及其对纤维素酶合成的？… 被引量：3

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作者 艾云灿 高培基 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期70-74,共5页

以纤维二糖特异诱导培养里氏木霉和黑曲霉菌丝，制备含有细胞外，细胞内和细胞质膜结合态β－葡萄苷酶的无细胞抽提物，采用色谱持谱联用分析，比较研究他们对纤维二糖的转糖基作用，结果表明两菌株中都只有细菌质膜结合态β－葡萄糖苷... 以纤维二糖特异诱导培养里氏木霉和黑曲霉菌丝，制备含有细胞外，细胞内和细胞质膜结合态β－葡萄苷酶的无细胞抽提物，采用色谱持谱联用分析，比较研究他们对纤维二糖的转糖基作用，结果表明两菌株中都只有细菌质膜结合态β－葡萄糖苷酶表现出显著的转糖基活性， 展开更多

关键词 Β-葡萄糖苷酶 转糖基作用 纤维素酶 合成

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N(2)-乙酰基-7-[(2-乙酰氧乙氧基)甲基]鸟嘌呤的转糖基作用

3

作者 罗晓燕 《精细化工中间体》 CAS 2001年第4期13-14,共2页

研究了N(2 ) 乙酰基 7 [(2 乙酰氧乙氧基 )甲基 ]鸟嘌呤通过转糖基作用生成其9位异构体N(2 ) 乙酰基 9 [(2 乙酰氧乙氧基 )甲基 ]鸟嘌呤的条件 ,转化率为 5 5 %。

关键词 N(2)-乙酰基-7-[(2-乙酰氧乙氧基)甲基]鸟嘌呤 转糖基作用 药物 异物体 阿昔洛韦

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双歧杆菌和乳酸菌β-半乳糖苷酶转糖基作用的研究进展 被引量：5

4

作者 姜陈波 杭锋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期335-341,共7页

双歧杆菌和乳酸菌作为一般认为安全的微生物,是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)的较好来源。部分双歧杆菌和乳酸菌菌株能够产生具有转糖基活力的β-gal,以乳糖为底物可合成具有益生作用的低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GO... 双歧杆菌和乳酸菌作为一般认为安全的微生物,是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)的较好来源。部分双歧杆菌和乳酸菌菌株能够产生具有转糖基活力的β-gal,以乳糖为底物可合成具有益生作用的低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GOS),而GOS产物的产量和组成受到β-gal的来源以及反应条件的影响。因此,本文总结了能够产生具有转糖基活力的β-gal的双歧杆菌和乳酸菌菌株,比较了两类来源的β-gal的酶学性质,并重点阐述了这两类β-gal在GOS合成中的应用。 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶 乳酸菌 双歧杆菌 转糖基作用 低聚半乳糖

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转糖基β-半乳糖苷酶产生菌筛选和鉴定及酶催化生成低聚半乳糖 被引量：19

5

作者 王红妹 肖敏 +2 位作者 李正义 李玉梅 钱新民 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期133-139,共7页

通过水解活性和转糖基活性筛选,从实验室97株保存菌种中获得1株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,克隆并序列分析了该菌株16S rDNA基因片断,GenBank收录号为DQ267829.综合其形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析结果,... 通过水解活性和转糖基活性筛选,从实验室97株保存菌种中获得1株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,克隆并序列分析了该菌株16S rDNA基因片断,GenBank收录号为DQ267829.综合其形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析结果,将其鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)2-37-4-1.确定了该菌株β-半乳糖苷酶产酶培养基的碳源为乳糖1%,氮源为蛋白胨0.5%和酵母膏0.5%,培养条件为37℃摇床培养18 h;碳源实验证明,该菌株β-半乳糖苷酶产生为乳糖诱导型.利用薄层层析技术研究了pH值、乳糖底物浓度、反应温度和反应时间对该菌株β-半乳糖苷酶以乳糖为底物转糖基合成低聚半乳糖的影响,确定最适反应条件为pH7.5、50 mmol/L(磷酸缓冲液)配制的40%乳糖溶液,55℃反应24 h.转糖基反应产物高压液相色谱分析其组成为低聚半乳糖25.68%,双糖(包括乳糖和转移二糖)33.02%,葡萄糖26.37%和半乳糖14.92%. 展开更多

关键词 巨大芽孢杆菌 16S RDNA Β-半乳糖苷酶 转糖基作用 低聚半乳糖

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转糖基β-半乳糖苷酶生产含低聚半乳糖的低乳糖牛奶 被引量：7

6

作者 李正义 肖敏 +1 位作者 卢丽丽 李玉梅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期241-244,共4页

研究利用具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶生产含低聚半乳糖的低乳糖牛奶。含低聚半乳糖的低乳糖牛奶既能解决乳糖不耐症问题,同时还在牛奶中增添了低聚半乳糖双歧因子。从Enterobacter sp．B5的无细胞抽提液中,利用硫酸铵沉淀制备具有转... 研究利用具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶生产含低聚半乳糖的低乳糖牛奶。含低聚半乳糖的低乳糖牛奶既能解决乳糖不耐症问题,同时还在牛奶中增添了低聚半乳糖双歧因子。从Enterobacter sp．B5的无细胞抽提液中,利用硫酸铵沉淀制备具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶,作用鲜牛奶生成含低聚半乳糖的低乳糖牛奶。利用薄层层析、高压液相色谱技术和软件NIH ImageJ 1．36分析了反应产物中的糖组分(葡萄糖、半乳糖、乳糖和低聚糖(包括转移二糖和三糖))。结果显示酶作用后的鲜牛奶中大约70%的乳糖转化为葡萄糖和半乳糖,至少10%的乳糖通过转糖基反应生成低聚半乳糖。在酶浓度为3U/ml,50℃酶解4h的反应条件下,获得含低聚半乳糖的低乳糖牛奶的糖组成为0．59%低聚半乳糖(含0．37%转移二糖和0．22%三糖),1．33%乳糖,2．83%单糖。本研究利用软件NIH ImageJ 1．36定量分析样品糖组分的TLC结果,可以避免乳糖的同分异构体-转移二糖在高压液相色谱结果中因无法分离而造成的漏检。 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶 转糖基作用 低聚半乳糖 低乳糖牛奶

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唾液酸苷酶的催化机理及水解与合成寡糖进展 被引量：2

7

作者 郭龙成 马忠轩 +1 位作者 卢丽丽 肖敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第2期181-192,共12页

唾液酸苷酶(EC.3.2.1.18)是一类重要的糖苷水解酶,在动物和微生物中广泛存在.该类酶催化寡糖或糖缀合物上非还原末端唾液酸水解,具有重要的生物学功能,如参与溶酶体降解代谢物、癌症发生、微生物致病等多种生理和病理过程.除了水解活性... 唾液酸苷酶(EC.3.2.1.18)是一类重要的糖苷水解酶,在动物和微生物中广泛存在.该类酶催化寡糖或糖缀合物上非还原末端唾液酸水解,具有重要的生物学功能,如参与溶酶体降解代谢物、癌症发生、微生物致病等多种生理和病理过程.除了水解活性外,有的唾液酸苷酶还具有转糖基活性,能够以唾液酸单糖或糖苷为糖基供体,催化唾液酸转移到受体分子上,一步合成寡糖和糖苷化合物.这种合成活性对于唾液酸相关糖链的大量获得具有重要意义,有利于推动该类寡糖的基础研究及其在食品和医药中的应用.本文综述了唾液酸苷酶的结构和催化机理、生理功能、转糖基作用及其在寡糖合成中的应用. 展开更多

关键词 唾液酸 唾液酸苷酶 结构及催化机理 转糖基作用 分子改造

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乳果糖生产方法及其在肉鸡生产中的应用 被引量：1

8

作者 吕路芳 谢文惠 +1 位作者 姜宁 张爱忠 《中国饲料》 北大核心 2018年第19期15-19,共5页

乳果糖的工业生产主要是乳糖在碱性溶液中通过化学法获得,由于考虑到环境污染和繁琐的分离过程,所以酶法催化合成乳果糖一直被视为更好的选择。本文介绍了化学异构法和酶法催化合成乳果糖的方式,并对乳果糖在肉鸡生产中的应用进行了总结... 乳果糖的工业生产主要是乳糖在碱性溶液中通过化学法获得,由于考虑到环境污染和繁琐的分离过程,所以酶法催化合成乳果糖一直被视为更好的选择。本文介绍了化学异构法和酶法催化合成乳果糖的方式,并对乳果糖在肉鸡生产中的应用进行了总结,同时对乳果糖生产技术未来的发展进行了展望,以期为乳果糖的后续开发与利用提供一定的参考。 展开更多

关键词 乳果糖 转糖基作用 化学异构法 Β-半乳糖苷酶 纤维二糖差向异构酶 肉鸡

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布氏锥虫来源内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶的异源表达和活性鉴定

9

作者 崔娟 喜多岛敏彦 +2 位作者 王宁 中西秀树 高晓冬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期8-13,共6页

内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(Endo-β-N-acetylglucosaminidase,ENGase)是一类可以水解N-糖链中核心壳二糖之间β-1,4-糖苷键的糖苷内切酶,其中糖苷水解酶85家族(glycoside hydrolasefamilies 85,GH85)的ENGase除了水解活性之外... 内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(Endo-β-N-acetylglucosaminidase,ENGase)是一类可以水解N-糖链中核心壳二糖之间β-1,4-糖苷键的糖苷内切酶,其中糖苷水解酶85家族(glycoside hydrolasefamilies 85,GH85)的ENGase除了水解活性之外还具有转糖基活性,能够以切除后再将均一的寡糖链转移到N-糖蛋白的β-N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,GlcNAc)上的方式,改造医药糖蛋白的N-糖基化修饰。通过数据库检索,在布氏锥虫(Trypanosoma brucei)的基因组中找到了GH85家族ENGase的同源序列,并命名为Endo-Tb基因,对其克隆后在带有Nus融合蛋白的原核(E.coli)表达载体上成功表达并纯化。检测到融合蛋白Nus-Endo Tb能够水解高甘露糖型和双天线的复合型糖链,但不能作用于三天线的复合型糖链。同时Nus-Endo Tb可以水解核糖核酸酶B和人类转铁蛋白上的N糖链。当用唾液酸糖肽(SGP)作为糖基供体,MU-GlcNAc作为糖基受体时,通过荧光基质底物四甲基伞形酮(MU)检测到Nus-Endo Tb具有转糖基活性。 展开更多

关键词 内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶 转糖基作用 布氏锥虫 Nus-Endo Tb

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葡聚糖蔗糖酶的研究进展 被引量：1

10

作者 黄华波 谭周进 《湖南农业科学》 2013年第4期12-15,共4页

葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase)是一类α-转糖苷酶,是生物催化合成中一种重要的工具酶。对葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase)类型与转糖基反应机制,及其在生物催化合成中的应用、蛋白质工程改造等方面的作用进行了综述。

关键词 葡聚糖蔗糖酶 转糖基作用 外源受体 低聚糖 酶工程 综述

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β-N-乙酰氨基己糖苷酶及其合成寡糖的研究进展 被引量：3

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作者 陈晓迪 王凤山 肖敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1189-1205,共17页

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)是一类重要的糖苷水解酶,在自然界中催化简单的β-N-乙酰氨基己糖苷或复杂的寡糖链、多糖链中末端N-乙酰己糖苷键的水解,在微生物、植物和动物中广泛分布,具有重要的生物学功能。某些种类的β-N-乙... β-N-乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)是一类重要的糖苷水解酶,在自然界中催化简单的β-N-乙酰氨基己糖苷或复杂的寡糖链、多糖链中末端N-乙酰己糖苷键的水解,在微生物、植物和动物中广泛分布,具有重要的生物学功能。某些种类的β-N-乙酰氨基己糖苷酶在一定的人为条件下水解β-N-乙酰氨基己糖苷键的同时还具有转糖基作用,能将β-N-乙酰氨基己糖基转移到不同的羟基化合物上,合成β-N-乙酰氨基己糖苷化合物,在糖链合成上具有应用的潜力。本文综述了β-N-乙酰氨基己糖苷酶的结构和催化机制、酶的生物学功能以及酶在β-N-乙酰氨基己糖苷化合物合成中的应用,以促进β-N-乙酰氨基己糖苷酶的进一步研究和开发应用。 展开更多

关键词 β-N-乙酰氨基己糖苷酶 催化机制 生物学功能 转糖基作用 寡糖合成

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