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三芪口服液影响单侧肾切除糖尿病大鼠足细胞及裂孔膜相关分子表达研究
1
作者 潘伟钰 路艳蒙 +2 位作者 梁康礼 聂钊源 范萍 《广州中医药大学学报》 CAS 2015年第5期880-883,973,共5页
【目的】观察三芪口服液对单侧肾切除糖尿病(DM)大鼠足细胞及裂孔隔膜蛋白分子(Nephrin、Podocin、CD2AP)表达的影响,探讨其肾脏保护的作用机制。【方法】选用雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、中药组,采用以单侧肾切除,配合小剂... 【目的】观察三芪口服液对单侧肾切除糖尿病(DM)大鼠足细胞及裂孔隔膜蛋白分子(Nephrin、Podocin、CD2AP)表达的影响,探讨其肾脏保护的作用机制。【方法】选用雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、中药组,采用以单侧肾切除,配合小剂量链脲佐菌素(STZ,剂量35 mg/kg)腹腔注射方法复制单侧肾切除DM大鼠模型;各组分别给予三芪口服液(剂量为2.5 g·kg-1·d-1)及等容积蒸馏水灌胃,干预8周;测量足细胞密度及足突宽度等变化,应用免疫组织化学技术观察各组大鼠肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达改变。【结果】中药组大鼠足细胞密度增加,足突病变较轻;肾组织Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达较模型组显著增加(P<0.05或P<0.01)。【结论】三芪口服液对单侧肾切除DM大鼠的肾脏保护作用可能与减轻足细胞损伤,调节足细胞Nephrin、Podocin、CD2AP的蛋白表达有关。 展开更多
关键词 三芪口服液/药理学 糖尿病/中药疗法 足细胞/超微结构 裂孔膜相关分子 疾病模型 动物 大鼠
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雷公藤甲素干预足细胞病变的体外观察 被引量：45
2
作者 陈朝红 刘志红 +3 位作者 孙骅 姚根宏 秦卫松 黎磊石 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2007年第2期119-126,200,共9页
目的:雷公藤甲素对Heymann肾炎和嘌呤霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响提示,雷公藤甲素有可能直接作用于足细胞,从而改善其病变状况。本研究借助小鼠足细胞系,体外观察了雷公藤甲素对足细胞损伤的保护和修复作用,并对其作用机... 目的:雷公藤甲素对Heymann肾炎和嘌呤霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响提示,雷公藤甲素有可能直接作用于足细胞,从而改善其病变状况。本研究借助小鼠足细胞系,体外观察了雷公藤甲素对足细胞损伤的保护和修复作用,并对其作用机制进行了研究。方法:体外采用氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleo-side,PAN)致足细胞损伤模型。观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用研究中,雷公藤甲素与足细胞预孵育30min后,再加入含PAN的培养基,继续作用24h;观察雷公藤甲素对足细胞损伤的修复作用研究中,PAN作用足细胞24h,造成足细胞明显损伤后,再加入含或不含雷公藤甲素的培养基,继续培养3天。免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和Synaptopodin的变化,并进一步观察了细胞内调节骨架装配的Rho/ROCK信号通路的活性,即采用Western Blot检测ROCK-I底物——肌球蛋白磷酸酶结合亚单位(MBS)磷酸化水平,以及Rho/ROCK信号通路选择性阻断剂Y-27632对雷公藤甲素作用的影响。同时采用免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞裂孔膜相关分子Nephrin和Podocin在足细胞的分布及表达量的变化。结果:正常分化足细胞F-actin呈丝状结构,密度大,丝强劲有力,沿细胞极性分布;Synaptopodin呈颗粒状沿细胞骨架分布。裂孔膜蛋白Nephrin沿足细胞膜和细胞骨架分布,Podocin呈线状均匀分布于胞浆内,PAN作用24h后,细胞足突回缩,F-actin几乎完全解聚,Synaptopodin表达消失。Nephrin和Podocin表达减弱,正常丝状结构消失。而经过雷公藤甲素的预处理,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,足细胞未表现出上述骨架结构的改变,Synaptopodin表达没有明显减弱。同时我们的结果显示,在PAN造成足细胞明显损伤后再加入雷公藤甲素,足细胞损伤能够得到一定修复,细胞内重新出现极性分布的微丝,同时,Synaptopod-in的表达也得以修复。Rho/ROCK信号通路研究显示,100μg/mlPAN明显降低Rho/ROCK通路活性。雷公藤甲素能有效遏制MBS磷酸化水平的降低,维持足细胞Rho/ROCK通路的活性状态。Rho/ROCK信号通路选择性抑制剂Y-27632可阻断雷公藤对足细胞骨架结构的保护作用。此外,对裂孔膜蛋白Nephrin,Podocin的研究表明,不论是在预防组和治疗组,PAN对Nephrin和Podocin的损伤可在一定程度上被雷公藤甲素预防和修复。结论:雷公藤甲素可稳定足细胞的细胞骨架,拮抗PAN对足细胞的损伤。在足细胞损伤已经发生后,雷公藤甲素可逆转足细胞的损伤,修复足细胞骨架结构和相关分子的表达。雷公藤甲素的上述作用与细胞内Rho/ROCK信号通路密切相关。雷公藤甲素对足细胞的影响可能是其降低肾小球肾炎患者尿蛋白的重要机制之一。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 足细胞 嘌呤霉素氨基核苷 细胞骨架 裂孔膜分子
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