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根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种 被引量：42
1
作者 师校欣 王斌 +2 位作者 杜国强 翁曼丽 高仪 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期282-284,共3页
研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证... 研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。 展开更多
关键词 苹果 抗中性 遗传转化 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转化桑树获得转基因植株的初报 被引量：12
2
作者 王洪利 楼程富 +2 位作者 张有做 谈建中 焦锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期291-294,共4页
利用基因枪法将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 (OC)导入桑树组织 ,经抗性筛选和组织培养获得再生植株 ,通过对转基因植株的PCR Southern杂交及RNA点杂交等检测 ,证实OC基因转化桑树成功 ,为选育抗虫性桑树品种奠定了基础。
关键词 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 桑树 遗传转化 基因枪 抗虫育种 转基因植株
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农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)在玉米中的遗传转化 被引量：8
3
作者 伍晓丽 朱祯 +3 位作者 李晚忱 潘光堂 曹墨菊 荣廷昭 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期297-298,共2页
关键词 农杆菌介导 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 玉米 遗传转化 抗虫性
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茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文) 被引量：12
4
作者 王朝霞 李叶云 +1 位作者 江昌俊 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期177-182,共6页
对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,... 对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,分别扩增出3'端和5'端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627 bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062 KDa.该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%～77%. 展开更多
关键词 茶树 巯基蛋白酶抑制剂基因 CDNA 克隆
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新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达 被引量：5
5
作者 梁文星 范在丰 +3 位作者 李永 宋丽敏 李怀方 田国忠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期446-451,共6页
杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘C... 杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。 展开更多
关键词 蛋白酶抑制剂基因 新疆杨 损伤诱导
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脊尾白虾丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆及表达分析 被引量：4
6
作者 李洋 刘萍 +3 位作者 李健 李吉涛 马朋 高保全 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1166-1174,共9页
采用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因的cDNA序列。该基因全长1 516 bp,开放阅读框1 245 bp,编码414个氨基酸,其预测分子量为45.06 kD,理论等电点为5.694,并含有两个糖基结合位点。同源性... 采用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因的cDNA序列。该基因全长1 516 bp,开放阅读框1 245 bp,编码414个氨基酸,其预测分子量为45.06 kD,理论等电点为5.694,并含有两个糖基结合位点。同源性分析发现其与斑节对虾(Penaeus monodon)同源性最高,达到49%。组织表达分析表明,serpin基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是肝胰腺和鳃组织,在肌肉中表达量最低。不同盐度胁迫后脊尾白虾的血细胞serpin基因表达量在盐度胁迫8 h时显著高于对照组(P<0.05),肝胰腺组织中serpin基因表达量在盐度胁迫后2 h和24 h出现明显峰值,且显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明,脊尾白虾serpin基因参与了急性盐度胁迫下机体的应激反应。本研究通过克隆脊尾白虾酚氧化酶原激活系统中的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因cDNA全长,分析盐度胁迫后其在血细胞和肝胰腺组织中的表达变化规律,以期为脊尾白虾的健康养殖提供理论基础和参考依据。 展开更多
关键词 脊尾白虾 丝氨酸蛋白酶抑制剂基因 组织表达 盐度胁迫 应激反应
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用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株 被引量：5
7
作者 王才林 朱镇 +8 位作者 赵凌 张亚东 林静 张所兵 陈涛 刘贤进 王冬兰 黄骏麒 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期245-248,共4页
采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已... 采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。 展开更多
关键词 水稻 抗虫 慈姑蛋白酶抑制剂基因 转基因植株 花粉管通道法
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转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)抗虫甜椒植株的获得 被引量：9
8
作者 杨广东 朱祯 +2 位作者 李燕娥 朱祝军 上官晓霞 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2002年第3期239-244,共6页
以 12～ 14d苗龄的甜椒带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入甜椒杂交种“中椒 5号”和常规种“茄门”中 ,在对甜椒转化系统和芽丛诱导茎伸长的条件进行优化研究... 以 12～ 14d苗龄的甜椒带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入甜椒杂交种“中椒 5号”和常规种“茄门”中 ,在对甜椒转化系统和芽丛诱导茎伸长的条件进行优化研究后 ,获得了卡那霉素抗性植株 ,最高转化频率为 16 .7% .卡那霉素抗性筛选、PCR检测和Southernblot杂交均证实 ,nptII基因和sck基因已整合进甜椒基因组中 .室内离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明 ,转基因植株对棉铃虫 (HeliothisarmigeraHubner)具有一定抗性 .图 4表 2参 展开更多
关键词 转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 抗虫甜椒植株 根癌农杆菌 茎伸长 转基因
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定 被引量：6
9
作者 杨朝辉 宋洪元 何凤田 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期731-735,共5页
用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进... 用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 转化 芥菜 抗虫鉴定 农杆菌介导
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大白菜的马铃薯蛋白酶抑制剂基因转化及抗菜青虫性的鉴定 被引量：3
10
作者 张军杰 刘凡 +3 位作者 罗晨 姚磊 赵泓 黄玉碧 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期193-198,共6页
以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, ... 以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, 证实了嵌合体的存在,并通过此方法来消除嵌合体。获得的转基因植株经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实,目的基因已经整合入植物基因组中。对菜青虫(Pieris rapae L.) 进行了转基因大白菜叶片的连续离体饲喂,结果表明:受试的转基因大白菜对菜青虫的生长发育有较明显的抑制作用。 展开更多
关键词 大白菜 马铃薯蛋白酶抑制剂基因 基因转化 菜青虫 抗性鉴定
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植物蛋白酶抑制剂基因结构、调控及其控制害虫的策略 被引量：12
11
作者 程仲毅 薛庆中 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期790-796,共7页
各种不同类型的植物蛋白酶抑制剂基因已被分离 ,它们的特异产物 (单基因或多基因组合 ) ,对昆虫体内各种生化和生理过程会产生不同程度的影响 ,在对昆虫和病原体防御体系中起重要作用。多种蛋白酶抑制剂重组 ,协同保护植物的方法 ,已成... 各种不同类型的植物蛋白酶抑制剂基因已被分离 ,它们的特异产物 (单基因或多基因组合 ) ,对昆虫体内各种生化和生理过程会产生不同程度的影响 ,在对昆虫和病原体防御体系中起重要作用。多种蛋白酶抑制剂重组 ,协同保护植物的方法 ,已成为害虫综合防治计划的一部分。尽管它们近期内尚不能代替化学杀虫剂 ,但可作为有效的替补。目前 ,大多数抑制剂的作用和机理正在详尽地研究中 ,该文综述了植物蛋白酶抑制剂的基因结构、调控与表达并讨论了培育转基因作物控制害虫的策略。 展开更多
关键词 植物蛋白酶抑制剂基因 调控与表达 转基因 表达
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刺桐胰蛋白酶抑制剂基因的构建及表达研究 被引量：4
12
作者 任启生 陈黄实 +1 位作者 宋新荣 李伯松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第7期102-104,共3页
刺桐胰蛋白酶抑制剂是胰蛋白酶、组织型纤溶酶原激活剂及瑞替普酶特异性的抑制剂 ,可作为配基制成亲合填料用于纯化上述酶。通过化学合成和PCR结合法合成了ETI基因 ,经过序列分析后将其克隆到大肠杆菌表达载体质粒pET32a中 ,并在大肠杆... 刺桐胰蛋白酶抑制剂是胰蛋白酶、组织型纤溶酶原激活剂及瑞替普酶特异性的抑制剂 ,可作为配基制成亲合填料用于纯化上述酶。通过化学合成和PCR结合法合成了ETI基因 ,经过序列分析后将其克隆到大肠杆菌表达载体质粒pET32a中 ,并在大肠杆菌中进行诱导表达。表达蛋白分子量同理论值一致 ,生物活性检测表明复性后的ETI对胰蛋白酶及瑞替普酶具有特异抑制作用。 展开更多
关键词 刺桐胰蛋白酶抑制剂基因 构建 表达 组织型纤溶酶原激活剂
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表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的Hela细胞的无血清培养 被引量：1
13
作者 陆施娟 方政 +2 位作者 王慧 徐邦生 李群 《南通大学学报（医学版）》 2014年第4期258-260,共3页
目的:使用无血清培养基培养可稳定表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(Brugia malayi cystatin,Bm-CPI)的人宫颈癌细胞(Hela)。方法:将已获得的Bm-CPI稳定转染的Hela细胞株,进行无血清培养并观察Hela细胞的维持时间和培养过程中Hela... 目的:使用无血清培养基培养可稳定表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(Brugia malayi cystatin,Bm-CPI)的人宫颈癌细胞(Hela)。方法:将已获得的Bm-CPI稳定转染的Hela细胞株,进行无血清培养并观察Hela细胞的维持时间和培养过程中Hela细胞的形态变化。结果:无血清培养基培养Hela细胞可维持细胞的正常生长。结论:无血清培养基可以逐步代替含血清的培养基,为后续Hela细胞扩大培养和Bm-CPI基因重组蛋白纯化提供依据。 展开更多
关键词 周期型马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 无血清培养
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转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析
14
作者 李慧芬 李旭刚 +3 位作者 吴茜 陈蕾 徐鸿林 朱祯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第10期7-12,共6页
利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑... 利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示 :外源基因在植物已获表达 ,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。 展开更多
关键词 胰蛋白酶抑制剂基因 遗传转化 玉米自交系 抗虫性分析 基因枪 sck 转基因植株
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根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究
15
作者 杨朝辉 何凤田 +4 位作者 宋明 江渝 彭家和 李蓉芬 黄刚 《西南农业学报》 CSCD 2004年第1期74-77,共4页
为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI... 为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源,用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜,获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR Southernblot和Northernblot分析,转化再生植株大部分呈阳性,而非转化的再生植株均为阴性,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中。在室内进行了喂虫试验,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照,转基因植株之间存在抗虫性差异。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 芥菜 转化 抗虫
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：3
16
作者 罗娟 王秀敏 +3 位作者 韩烈保 刘君 曾会明 吴云锋 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期16-19,共4页
用CTAB法提取豇豆叶片总DNA后,根据基因两端的保守序列设计引物,经PCR方法扩增得到CpTI基因,将其克隆到pMD-18T载体上,酶切并测序鉴定,将该基因登陆到GeneBank(NO.EU088405)并进行同源性鉴定,证明该基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中... 用CTAB法提取豇豆叶片总DNA后,根据基因两端的保守序列设计引物,经PCR方法扩增得到CpTI基因,将其克隆到pMD-18T载体上,酶切并测序鉴定,将该基因登陆到GeneBank(NO.EU088405)并进行同源性鉴定,证明该基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族中的一员。在此基础上,将CpTI基因用限制性内切酶BamHⅠ/SacⅠ切下后,克隆到pCUbi1303的UBI启动子和NOS终止子之间。经PCR和酶切鉴定,得到了该基因的真核表达载体pCUbiCpTI1303,为下一步的转基因做好了准备。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI) 克隆 植物表达载体
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将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin I)基因导入甘薯品种 被引量：16
17
作者 阎文昭 吴洁 +1 位作者 王大一 谭文芳 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第2期203-207,共5页
本研究采用根癌农杆菌介导法以 12个甘薯品种作为受体材料 ,将OCI (OryzacystatinI)基因导入甘薯品种中 ,获取 7个品种的抗Kan再生植株 ,对获得的具有Kan抗性的再生植株进行PCR分子检测 ,初步结果证明已将外源OCI基因导入到 4个甘薯品种... 本研究采用根癌农杆菌介导法以 12个甘薯品种作为受体材料 ,将OCI (OryzacystatinI)基因导入甘薯品种中 ,获取 7个品种的抗Kan再生植株 ,对获得的具有Kan抗性的再生植株进行PCR分子检测 ,初步结果证明已将外源OCI基因导入到 4个甘薯品种 (6个株系 )的基因组中。 展开更多
关键词 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 甘薯 转基因 根癌农杆菌介导 OCI基因 抗病育种 马铃薯Y病毒 甘薯羽状花叶病毒
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蛋白酶抑制剂基因真空渗入法转化不结球白菜获得抗虫性材料 被引量：4
18
作者 张军杰 刘凡 +1 位作者 赵泓 罗晨 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期17-21,共5页
菜青虫及小菜蛾是危害白菜生产的主要害虫,为了获得新的抗虫白菜种质,以生长45天、花苔抽出时的“49菜心”Brassicarapassp.chinensisvar.utilisTsenetLee为材料,通过根癌农杆菌介导的真空渗入法,将马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pinII)导入... 菜青虫及小菜蛾是危害白菜生产的主要害虫,为了获得新的抗虫白菜种质,以生长45天、花苔抽出时的“49菜心”Brassicarapassp.chinensisvar.utilisTsenetLee为材料,通过根癌农杆菌介导的真空渗入法,将马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pinII)导入该植物基因组中。在142株处理株的后代种子中,采用除草剂Basta筛选,获得41株生长良好的抗性植株。经氯酚红试验、PCR以及植物基因组Southern杂交鉴定,证实目的基因已经整合入植物基因组中。对小菜蛾PlutellaxylostellaL.进行了转基因材料离体叶片的连续饲喂,调查了自1龄幼虫至化蛹、羽化的动态变化。结果表明,受试的转基因植株对小菜蛾的生长发育有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 不结球白菜 真空渗入转化 蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ) 害虫抗性
原文传递
决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建 被引量：1
19
作者 李洋洋 阿尔古丽 +8 位作者 俞继华 吴鹏飞 许维嘉 李娟娟 刘祖碧 王万军 周嘉裕 谭睿 廖海 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期409-413,共5页
[目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序... [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 决明 胰蛋白酶抑制剂基因 克隆 原核表达载体
原文传递
胰蛋白酶抑制剂SKTI3基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：1
20
作者 柴晓杰 吕品 +1 位作者 张宇 王丕武 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期384-386,共3页
以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因SKTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654 bp,与已发表的SKTI3基因序列同源性达99%。将目的基因... 以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因SKTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654 bp,与已发表的SKTI3基因序列同源性达99%。将目的基因片段插入到pB I121 35S启动子下,构建重组质粒pB ISKTI3,采用冻融法将该重组质粒转入农杆菌EHA105中,获得了植物表达载体。 展开更多
关键词 胰蛋白酶抑制剂基因 克隆 植物表达载体
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