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脲和盐酸胍诱导溶菌酶去折叠的荧光相图法研究 被引量：23
1
作者 杨芳 梁毅 杨芳(小) 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期803-807,共5页
用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导卵清溶菌酶去折叠的过程 .当变性体系中无还原剂 2 巯基乙醇存在、脲浓度从 0变化至 4 0mol/L(或盐酸胍浓度从 0变化至 3 0mol/L)时 ,溶菌酶从天然态转变为部分折叠中间态 ,当脲浓度从 4 0mol/L... 用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导卵清溶菌酶去折叠的过程 .当变性体系中无还原剂 2 巯基乙醇存在、脲浓度从 0变化至 4 0mol/L(或盐酸胍浓度从 0变化至 3 0mol/L)时 ,溶菌酶从天然态转变为部分折叠中间态 ,当脲浓度从 4 0mol/L变化至 8 0mol/L(或盐酸胍浓度从 3 0mol/L变化至 6 0mol/L)时 ,溶菌酶从中间态转变为去折叠态 ,此时该蛋白的变性过程符合“三态模型” .而当变性体系中有该还原剂存在时 ,溶菌酶则由天然态直接转变为去折叠态 ,此时脲诱导该蛋白去折叠的过程符合典型的“二态模型” . 展开更多
关键词 脲 盐酸胍 溶菌酶 去折叠过程 荧光相图法 蛋白质 变性 结构
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荧光相图法研究脲诱导牛血清白蛋白的去折叠过程 被引量：5
2
作者 傅容湛 董发昕 边六交 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期19-22,共4页
用荧光相图法研究了脲诱导的牛血清白蛋白的去折叠过程。实验结果表明,当变性体系中存在还原剂2-巯基乙醇时,牛血清白蛋白在脲溶液中直接从天然态转变为去折叠态,没有中间态存在,此时该蛋白的去折叠过程符合典型的“二态模型”;当变性... 用荧光相图法研究了脲诱导的牛血清白蛋白的去折叠过程。实验结果表明,当变性体系中存在还原剂2-巯基乙醇时,牛血清白蛋白在脲溶液中直接从天然态转变为去折叠态,没有中间态存在,此时该蛋白的去折叠过程符合典型的“二态模型”;当变性体系中无还原剂存在时,脲浓度从0 mol/L变化至0.7 mol/L时,牛血清白蛋白从天然态转变为部分折叠中间态,当脲浓度从0.7 mol/L变化至8.0 mol/L时,牛血清白蛋白从中间态转变为完全去折叠态,此时该蛋白的变性过程符合“三态模型”。 展开更多
关键词 牛血清白蛋白 荧光相图法 蛋白质去折叠 脲 还原剂
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用荧光相图法研究胃蛋白酶的去折叠过程 被引量：3
3
作者 刘莉 董发昕 +1 位作者 胥耀平 边六交 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第11期187-190,共4页
蛋白质折叠机理的研究是基因重组蛋白质高效生产的前提条件,对于工业化生产重组蛋白以及治疗与蛋白集聚密切相关的疾病都有重要意义。为了探索一个统一的蛋白质折叠机理,用荧光相图法分别对脲和盐酸胍诱导的胃蛋白酶的去折叠过程进行了... 蛋白质折叠机理的研究是基因重组蛋白质高效生产的前提条件,对于工业化生产重组蛋白以及治疗与蛋白集聚密切相关的疾病都有重要意义。为了探索一个统一的蛋白质折叠机理,用荧光相图法分别对脲和盐酸胍诱导的胃蛋白酶的去折叠过程进行了研究。结果表明,无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,当脲浓度为0-8.0 mol/L时,脲诱导胃蛋白酶的变性过程都符合“二态模型”;而无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,当盐酸胍浓度为0-6.0 mol/L时,该蛋白的变性过程均符合“三态模型”。 展开更多
关键词 胃蛋白酶 去折叠 折叠中间态 荧光相图法
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荧光相图法研究变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程
4
作者 张潭 边六交 +1 位作者 王世祥 郑晓晖 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第19期9942-9943,9945,共3页
[目的]研究了变性体系无还原剂和有还原剂存在时,变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程。[方法]利用荧光相图法。[结果]当变性体系中无还原剂存在时,变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程均符合"四态模型";而... [目的]研究了变性体系无还原剂和有还原剂存在时,变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程。[方法]利用荧光相图法。[结果]当变性体系中无还原剂存在时,变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程均符合"四态模型";而当变性体系中有还原剂存在时,变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程均符合"二态模型"。当变性体系中无还原剂存在时,蛋白溶菌酶的复性过程较复杂;比较变性和复性过程推测,非还原脲和盐酸胍诱导的蛋白溶菌酶变性及复性过程并不是2个完全可逆的过程,而还原脲和盐酸胍诱导的蛋白溶菌酶变性及复性过程有可能是可逆的。[结论]该研究可为开发合成杀菌谱广、成本低和安全性高的溶菌酶提供帮助。 展开更多
关键词 荧光相图法 蛋白溶菌酶 盐酸胍 脲
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荧光相图法研究溶菌酶在盐酸胍溶液中的变性
5
作者 李向荣 晁淑军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第22期11679-11680,共2页
采用荧光相图法分析盐酸胍诱导溶菌酶变性的荧光数据,建立溶菌酶在盐酸胍溶液中失活的变性模型。结果表明,盐酸胍浓度从0.5mol/L变化至3.0mol/L时,溶菌酶从天然态转变为部分折叠中间态,盐酸胍浓度从3.0mol/L变化至6.0mol/L时,溶菌酶从... 采用荧光相图法分析盐酸胍诱导溶菌酶变性的荧光数据,建立溶菌酶在盐酸胍溶液中失活的变性模型。结果表明,盐酸胍浓度从0.5mol/L变化至3.0mol/L时,溶菌酶从天然态转变为部分折叠中间态,盐酸胍浓度从3.0mol/L变化至6.0mol/L时,溶菌酶从中间态转变为去折叠态。说明盐酸胍诱导溶菌酶变性的过程符合典型的"三态模型"。 展开更多
关键词 溶菌酶 荧光相图法 盐酸胍 变性
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荧光相图法研究猪胰腺α-淀粉酶在脲和盐酸胍溶液中的去折叠过程 被引量：9
6
作者 师江波 边六交 董发昕 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期707-710,共4页
用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导的猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程。实验结果表明,当脲作为变性剂时,无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程均只出现一个部分折叠中间体,符合“三态模型”;当盐酸胍... 用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导的猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程。实验结果表明,当脲作为变性剂时,无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程均只出现一个部分折叠中间体,符合“三态模型”;当盐酸胍作为变性剂时,若变性体系中存在还原剂2-巯基乙醇,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程符合“三态模型”,而若变性体系中不存在还原剂2-巯基乙醇,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程会出现两个部分折叠中间态,此过程符合“四态模型”。 展开更多
关键词 猪胰腺α-淀粉酶 荧光相图法 去折叠过程 脲 盐酸胍
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利用荧光光谱法研究脲和盐酸胍诱导谷氨酸脱羧酶的去折叠 被引量：1
7
作者 胡升 黄俊 +5 位作者 柯丕余 赵伟睿 吕常江 王进波 尚龙安 梅乐和 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第3期648-654,共7页
利用荧光光谱法研究了盐酸胍和脲诱导的谷氨酸脱羧酶野生酶和突变酶K413A的去折叠过程,以探索与酶稳定性相关的构效关系。以盐酸胍为变性剂时,野生型酶和突变酶K413A在激发波长为280 nm的荧光图谱中色氨酸的最大发射峰均发生红移,色氨... 利用荧光光谱法研究了盐酸胍和脲诱导的谷氨酸脱羧酶野生酶和突变酶K413A的去折叠过程,以探索与酶稳定性相关的构效关系。以盐酸胍为变性剂时,野生型酶和突变酶K413A在激发波长为280 nm的荧光图谱中色氨酸的最大发射峰均发生红移,色氨酸荧光强度呈现先上升再下降的趋势;以脲为变性剂时,两种酶荧光图谱中色氨酸的最大发射峰同样发生红移,但色氨酸荧光强度持续下降。无论是以盐酸胍还是以脲作为变性剂时,野生型酶和突变酶K413A的去折叠过程都符合"三态模型",说明随着变性剂浓度的增加,野生型酶和突变酶K413A先从天然态转变为部分折叠中间态,并最终转变为去折叠状态。此外,考察了变性剂对谷氨酸脱羧酶活力的影响,当以盐酸胍为变性剂时,野生型酶和突变酶K413A半失活的盐酸胍浓度分别为0.4 mol×L^(-1)和0.7 mol×L^(-1),而半失活的脲浓度分别为1 mol×L^(-1)和2 mol×L^(-1)。研究表明,突变酶K413A的热力学稳定性比野生型酶更强,K413位点与GAD的结构刚性有重要联系。 展开更多
关键词 谷氨酸脱羧酶 脲 盐酸胍 荧光相图法 蛋白质去折叠
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脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的研究 被引量：15
8
作者 焦铭 梁毅 +1 位作者 李洪涛 王曦 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1362-1368,共7页
用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导牛肝过氧化氢酶去折叠的过程 .当脲浓度从 0依次增大至 0 5 0 ,4 5和8 0mol/L时 ,过氧化氢酶从天然四聚体依次转变为蓬松的四聚体、部分折叠的无活性二聚体和去折叠态 ,而当盐酸胍浓度从 0依次变... 用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导牛肝过氧化氢酶去折叠的过程 .当脲浓度从 0依次增大至 0 5 0 ,4 5和8 0mol/L时 ,过氧化氢酶从天然四聚体依次转变为蓬松的四聚体、部分折叠的无活性二聚体和去折叠态 ,而当盐酸胍浓度从 0依次变化至 0 65 ,2 5和 6 0mol/L时 ,过氧化氢酶则从天然四聚体依次转变为部分折叠的激活二聚体、部分折叠的单体和去折叠态 ,这表明无论是用脲还是用盐酸胍作为变性剂 ,该蛋白的变性过程都符合“四态模型” ,但这两种变性剂诱导该蛋白去折叠的途径和机制有较大差异 .实验结果表明荧光相图法可以检测蛋白质去折叠的中间态 .用等温滴定量热法研究了盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠过程的热力学 ,2 5 0℃时低浓度盐酸胍诱导该蛋白从天然四聚体转变为部分折叠的激活二聚体的本征摩尔构象变化焓、Gibbs自由能和熵分别为 -69 2kJ·mol-1,6 43kJ·mol-1和 -2 5 4J·K-1·mol-1,据此推断盐酸胍通过熵效应和静电效应来稳定和激活该二聚体 . 展开更多
关键词 脲 盐酸胍 诱导 过氧化氢酶 去折叠 蛋白质 热力学 等温滴定量热法 荧光相图法
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大分子拥挤环境中溶菌酶的去折叠过程 被引量：2
9
作者 王莉衡 钦传光 +1 位作者 尚晓娅 牛卫宁 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第9期187-192,共6页
【目的】研究不同大分子拥挤体系对盐酸胍诱导的溶菌酶去折叠过程的影响。【方法】以葡聚糖70（Dextran70）、菲可70（Ficoll70）、聚乙二醇2000（PEG2000）作为大分子拥挤试剂，模拟体内高度拥挤的环境，用荧光相图法研究不同大分子拥... 【目的】研究不同大分子拥挤体系对盐酸胍诱导的溶菌酶去折叠过程的影响。【方法】以葡聚糖70（Dextran70）、菲可70（Ficoll70）、聚乙二醇2000（PEG2000）作为大分子拥挤试剂，模拟体内高度拥挤的环境，用荧光相图法研究不同大分子拥挤试剂中，有无还原剂2－巯基乙醇存征时，盐酸胍诱导溶菌酶去折叠过程的变化及其特点，探讨大分子拥挤环境对蛋白质去折叠的影响。【结果】Dextran’70、Ficoll70和PEG20003种大分子拥挤试剂对溶菌酶活性几乎没有影响。无大分子拥挤试剂条件下，溶菌酶从天然态转变为去折叠态的过程中（盐酸胍浓度为0～6．0mol／L），当无还原剂2－巯基乙醇时，溶菌酶的去折叠过程符合“三态模型”，有1个中间态；当存在还原剂2-巯基乙醇时，该变性过程则符合“二态模型”，不存在任何中间态，溶菌酶可直接从天然态转变为去折叠态。溶菌酶在大分子拥挤体系中变性时，当不存在还原剂2巯基乙醇，变性过程符合“四态模型”，存在2个中间态；而当存在还原剂2-巯基乙醇时，变性过程则符合“三态模型”，有1个中间态。【结论】：通过添加大分子拥挤试剂，增加了溶菌酶变性过程的中间态，改变了蛋白由天然态到完全去折叠态的变性过程。 展开更多
关键词 大分子拥挤 溶菌酶 去折叠 荧光相图法 盐酸胍
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盐酸胍诱导辣根过氧化物酶变性过程中酶构象-活力研究 被引量：1
10
作者 张家兴 李小丝 尹宗宁 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期273-277,共5页
目的研究辣根过氧化物酶(HRP)在盐酸胍中的变性过程,并建立荧光参数与酶活力的函数模型。方法采用可见光谱法,荧光光谱法及荧光相图法对盐酸胍诱导的HRP变性过程进行研究,并采用SPSS和Origin软件对变性过程中的构象参数与酶活力参数进... 目的研究辣根过氧化物酶(HRP)在盐酸胍中的变性过程,并建立荧光参数与酶活力的函数模型。方法采用可见光谱法,荧光光谱法及荧光相图法对盐酸胍诱导的HRP变性过程进行研究,并采用SPSS和Origin软件对变性过程中的构象参数与酶活力参数进行函数模型拟合。结果盐酸胍诱导的HRP去折叠经历了一个三态过程,其中,引起酶分子从部分折叠中间态向去折叠态转变,导致其疏水内核构象剧烈变化,酶活性中心结构及酶活力开始变化的临界盐酸胍浓度为1.5 mol·L-1;同时建立了构象参数与酶活力的函数模型。结论所建模型可以表征HRP的变性过程并用于酶活力的预测。 展开更多
关键词 辣根过氧化物酶 盐酸胍 酶变性 模型 可见光光谱法 荧光光谱法 荧光相图法 构象-活力关系
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