植物胚胎发育晚期丰富蛋白的结构与功能 被引量：11

1

作者 周丽 姬向楠 +2 位作者 何非 潘秋红 段长青 《热带生物学报》 2012年第2期191-196,共6页

胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进... 胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 植物抗逆性 胚胎发育晚期丰富蛋白 结构 功能

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海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因SpLea5的克隆与表达分析 被引量：2

2

作者 付桂 范伟 +1 位作者 畅文军 张治礼 《热带作物学报》 CSCD 2011年第1期89-93,共5页

根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基... 根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基;推测编码的氨基酸序列与柽柳、杨木樨、烟草、甜橙、温州蜜柑、麻风树和陆地棉中相应基因的氨基酸序列一致性为54%、52%、48%、47%、47%、46%、44%、41%,在聚类分析时与高等植物聚为一类。SpLea5在海马齿植株中呈组成型表达,但根中表达最为丰富,茎和叶次之;海水、NaCl、PEG、ABA处理均能够诱导根部SpLea5基因的表达。这些结果表明,SpLea5基因可能参与了海马齿对盐和干旱胁迫的分子响应。 展开更多

关键词 海马齿 胚胎发育晚期丰富蛋白基因 表达分析

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花生胚胎发育晚期丰富蛋白基因AhLEAL的克隆及其在非生物胁迫下的表达分析 被引量：1

3

作者 陈娜 程果 +8 位作者 陈明娜 姜健美 潘丽娟 陈静 王通 王冕 杨珍 迟晓元 禹山林 《花生学报》 北大核心 2018年第2期6-12,共7页

低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生... 低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生物胁迫包括耐盐、抗旱和抗冻等。本研究以花生品种花育33号为试验材料,根据cDNA文库中已知的胚胎发育晚期丰富蛋白基因全长序列设计引物,通过RT-PCR克隆到该基因。该基因全长为555bp,开放阅读框为291bp,编码97个氨基酸。核苷酸序列比对表明,该基因与花生中已注册基因AhARG2(XM_016113504)同源性为100%,与AhLEA6-1(HM543588)同源性为99%。蛋白序列比对分析表明,该基因编码的蛋白与Genbank上已经注册的沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)、牧豆树(Prosopis juliflora)和柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)等植物中的胚胎发育晚期丰富蛋白同源性达到近65%。我们将该基因命名为AhLEAL(Arachis hypogaea Late Embryogenesis Abundant Like)。预测该基因编码的蛋白可能定位于细胞液、线粒体、内质网和叶绿体中。荧光定量PCR结果显示,AhLEAL在花生叶片和根中的表达受低温和高盐胁迫的强烈诱导,在根中受干旱胁迫的强烈诱导,说明该基因可能参与了花生对三种非生物胁迫的适应性调控;此外,AhLEAL在花生叶片和根中的表达也明显受ABA的诱导,说明该基因对花生逆境胁迫的调控可能是以依赖ABA的方式进行的。 展开更多

关键词 花生 胚胎发育晚期丰富蛋白 克隆 非生物胁迫 荧光定量PCR

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香蕉胚胎发育晚期丰富蛋白(MaLEA)家族生物信息学分析

4

作者 赵东方 苗红霞 +6 位作者 刘菊华 贾彩红 王静毅 张建斌 王卓 金志强 徐碧玉 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3893-3901,共9页

晚期胚胎发育丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)普遍存在于植物中,该家族蛋白在非生物胁迫下大量积累以保护植物正常生长发育。为了探索MaLEA家族蛋白在调控香蕉非生物胁迫中的功能,本研究利用生物信息学方法对23个香... 晚期胚胎发育丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)普遍存在于植物中,该家族蛋白在非生物胁迫下大量积累以保护植物正常生长发育。为了探索MaLEA家族蛋白在调控香蕉非生物胁迫中的功能,本研究利用生物信息学方法对23个香蕉LEA家族的基因结构、理化性质、亚细胞定位、系统进化、表达特性及启动子进行初步研究。结果显示:MaLEA家族属于高度亲水蛋白,等电点在4.6~9.96之间,大多数定位于细胞质,同时在细胞核、叶绿体和线粒体也有分布。聚类分析发现MaLEA家族共分为7组,不同组间Motif存在一定差异;在启动子序列中,内含子数目为0~3。转录组数据显示,大多数MaLEA家族成员在香蕉果实发育的前期表达量较高;同时,MaLEA3、MaLEA5、MaLEA14和MaLEA23响应了干旱、盐和冷胁迫。进一步分析MaLEA家族基因启动子区响应元件,发现大量响应盐、干旱、高温、低温胁迫、机械损伤和茉莉酸甲酯、脱落酸激素等的顺式作用元件,推测MaLEA家族在非生物胁迫中发挥着重要作用,为深入研究香蕉MaLEA家族基因的功能提供了基础数据。 展开更多

关键词 香蕉(Musa nana Lour.) 胚胎发育晚期丰富蛋白 生物信息学分析

原文传递

转晚期胚胎发生丰富蛋白(LEA)基因棉花及抗旱性分析 被引量：19

5

作者 裴金玲 杨红兰 +4 位作者 李春平 张大伟 李小双 蔡明 张道远 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期331-337,共7页

本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株... 本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株为阳性的转化株。在室内条件下,对转化株幼苗进行水培实验,并用12%(w/v)PEG-6000处理12h模拟干旱胁迫。结果显示,干旱胁迫之后,转LEA基因棉花基因表达量显著增加;丙二醛生成量显著降低;游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白的生成量显著增加;棉花表型分析也证明了转LEA基因棉花抗旱性有提高。培养45d后,转LEA基因棉花的生物量高于非转基因棉花。本研究结果表明,在干旱胁迫条件下,转LEA基因棉花表现出了优良的生长和生理优势,显示出转LEA基因棉花能提高棉花的抗旱能力。 展开更多

关键词 棉花(Gossypium hirsutum L.) 晚期胚胎发生丰富蛋白基因 转基因 抗旱性

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沙冬青胚胎晚期发生丰富蛋白基因序列及表达特性分析 被引量：10

6

作者 师静 刘美芹 +3 位作者 史军娜 赵晓鑫 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期114-119,共6页

从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于... 从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于第4类LEA蛋白。系统发生分析表明,此编码蛋白与大豆LEA14蛋白(P46519.1)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,AmLEA14的表达量在低温、干旱、盐胁迫条件下升高,但是主要在低温胁迫后期富集。推测AmLEA14基因可能在沙冬青抵御低温、干旱、盐胁迫中发挥作用,主要是参与沙冬青的低温防御机制。 展开更多

关键词 沙冬青 胚胎晚期发生丰富蛋白 序列分析 表达分析

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巴西橡胶树胚胎晚期丰富蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：4

7

作者 喻修道 王真辉 +1 位作者 袁坤 杨礼富 《热带作物学报》 CSCD 2011年第7期1304-1308,共5页

根据抑制性消减杂交文库分离的EST片段,采用3'-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得HbLEA14基因的全长cDNA序列,其ORF长456 bp,编码151个氨基酸,预测HbLEA14蛋白分子量为16.58 ku,等电点为5.10。同源性比对显示,HbLEA14与蓖麻RcLEA14、... 根据抑制性消减杂交文库分离的EST片段,采用3'-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得HbLEA14基因的全长cDNA序列,其ORF长456 bp,编码151个氨基酸,预测HbLEA14蛋白分子量为16.58 ku,等电点为5.10。同源性比对显示,HbLEA14与蓖麻RcLEA14、乳浆大戟EeLEA14、陆地棉GhLEA14、大豆GmLEA14、拟南芥AtLEA14、番茄SlER5的同源性分别为88%、80%、75%、73%、65%和61%,属于非典型第2组LEA蛋白。RT-PCR结果显示,死皮植株胶乳中HbLEA14的表达量明显高于健康树。 展开更多

关键词 巴西橡胶树:胚胎晚期丰富蛋白 基因克隆 序列分析 RT—PCR

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莲种胚发育过程中胚胎晚期丰度蛋白基因表达量与种子含水量相关性分析 被引量：2

8

作者 盛江源 张荻 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期75-81,120,共8页

通过莲胚形态观察、生理指标测定、蛋白质谱鉴定与基因表达量分析,筛选出莲胚脱水成熟过程中显著富集的LEA蛋白(late embriogenesis abundant protein),并分析其基因表达量与含水量的相关性。结果表明,莲胚发育成熟共需约30 d,形态发育1... 通过莲胚形态观察、生理指标测定、蛋白质谱鉴定与基因表达量分析,筛选出莲胚脱水成熟过程中显著富集的LEA蛋白(late embriogenesis abundant protein),并分析其基因表达量与含水量的相关性。结果表明,莲胚发育成熟共需约30 d,形态发育15~18 d,随后进入脱水成熟阶段。在种胚脱水阶段种胚含水量由80%下降到6.7%,细胞内蛋白含量上升2.75倍。对不同脱水阶段莲胚进行蛋白单向电泳,筛选出7条显著富集的蛋白条带,其中包含7种LEA家族蛋白:EMB564-like、Dehydrin Rab18、Lea14-A与4种D-34类蛋白。Dehydrin Rab18、D-34、D-34-like-1表达量随莲胚脱水而递增,与种子含水量呈负相关;EMB564-like、Lea14-A、D-34-like-2、D-34-like-3基因表达水平呈单峰曲线,在莲胚发育20 d时达到峰值。其中Dehydrin Rab18、EMB564-like与D-34-like-2在莲胚脱水阶段上调表达幅度最大,表达量分别是莲胚脱水前的38.7、11.5、19.0倍,可能与莲胚的逆境保护与耐储存机制相关。 展开更多

关键词 莲胚 脱水成熟 胚胎发育晚期丰度蛋白 质谱鉴定 基因定量

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丹参晚期胚胎蛋白基因SmLEA的克隆及表达分析 被引量：4

9

作者 刘丛玲 王喆之 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期80-84,共5页

对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp... 对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp,无内含子,包含1个长为495 bp的开放阅读框,编码164个氨基酸。序列比对结果显示,该序列与番茄的晚期胚胎丰富蛋白Lemmi9有较高的相似性(69%),推测该编码蛋白属于晚期胚胎蛋白LEA14家族成员。生物信息学显示,SmLEA所编码蛋白SmLEA的相对分子质量为17.34 kD,理论等电点为4.51,富含天冬氨酸及AS、IP、KV、VS、TIP肽段,定位于细胞质中,为稳定类蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在丹参的根、茎、叶中均有表达,为组成型表达基因。 展开更多

关键词 晚期胚胎丰富蛋白 生物信息学 组成型基因 丹参

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胎盘异铁蛋白对小鼠胚胎生长发育影响的研究

10

作者 朱颖 吴超英 孙永玉 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期262-264,278,共4页

目的:探讨胎盘异铁蛋白对小鼠胚胎生长发育的影响。方法:将人早孕蜕膜细胞和小鼠2-细胞期胚胎置于含不同浓度胎盘异铁蛋白的培养液中共培养,倒置显微镜下观察记录胚胎数目并分级。结果:①发育至4-细胞期、8-细胞期及桑葚胚阶段鼠胚数的... 目的:探讨胎盘异铁蛋白对小鼠胚胎生长发育的影响。方法:将人早孕蜕膜细胞和小鼠2-细胞期胚胎置于含不同浓度胎盘异铁蛋白的培养液中共培养,倒置显微镜下观察记录胚胎数目并分级。结果:①发育至4-细胞期、8-细胞期及桑葚胚阶段鼠胚数的百分率比较,差异无显著性(P>0.05)。②在10 U/mL和100 U/mL浓度的胎盘异铁蛋白作用下,发育至囊胚期和孵出期鼠胚数的百分率明显提高(P<0.05)。③在1 000 U/mL浓度的胎盘异铁蛋白作用下,从2-细胞期发育至孵出期鼠胚数的百分率有所下降,部分细胞发生变性、退化和不规则分裂等现象,但无统计学意义(P>0.05)。结论:10～100 U/mL浓度的的胎盘异铁蛋白对鼠胚的早期发育没有显著影响,但能促进晚期鼠胚的生长、分化和孵出。 展开更多

关键词 胎盘异铁蛋白 小鼠胚胎 影响 早期发育 蜕膜细胞 早孕 晚期 胎生 细胞期 变性

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胚胎培养液中蛋白氧化水平对早期胚胎发育的影响

11

作者 宋亚丽 邢福祺 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期332-334,共3页

目的研究体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)周期胚胎培养液中蛋白氧化水平及其对人早期胚胎发育的影响。方法测定30例接受常规IVF治疗及30例接受单精子卵细胞内注射(intracytoplasmic sperm inj... 目的研究体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)周期胚胎培养液中蛋白氧化水平及其对人早期胚胎发育的影响。方法测定30例接受常规IVF治疗及30例接受单精子卵细胞内注射(intracytoplasmic sperm injection-embryo transplantation,ICSI)的不孕症患者第1天胚胎培养液中晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)的水平,分析AOPP水平与早期胚胎发育的关系。结果在常规IVF周期中,第1天胚胎培养液中AOPP浓度在3.2μmol/L以下时,其变化与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局无相关性;在3.2μmol/L以上时,AOPP水平与IVF结局负相关。在ICSI周期中,第1天胚胎培养液中高水平的AOPP浓度在3.2μmol/L以下时,其变化与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局无相关性;在3.2μmol/L以上时,AOPP水平与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局负相关。结论IVF-ET周期中,第1天胚胎培养液中存在蛋白氧化应激现象,高水平的AOPP与胚胎质量,IVF结局负相关,在ICSI周期中,表现尤为明显。 展开更多

关键词 蛋白氧化 晚期氧化蛋白产物 胚胎培养液 早期胚胎发育

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花生AhLEA18蛋白基因的克隆与表达分析 被引量：3

12

作者 苏磊 姜娜娜 +2 位作者 王兴军 赵传志 毕玉平 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第17期47-50,共4页

LEA蛋白家族是一类在种子胚胎发育晚期丰富表达的蛋白,在种子的正常发育过程中大量积累,同时在植物处于干旱、寒冷、盐胁迫等逆境条件下高水平表达,推测该类蛋白在缺水条件下具有一定的生理保护功能。根据蛋白序列特点,该蛋白家族分为... LEA蛋白家族是一类在种子胚胎发育晚期丰富表达的蛋白,在种子的正常发育过程中大量积累,同时在植物处于干旱、寒冷、盐胁迫等逆境条件下高水平表达,推测该类蛋白在缺水条件下具有一定的生理保护功能。根据蛋白序列特点,该蛋白家族分为多个组,LEA18蛋白属于其中一组蛋白。PvLEA18蛋白在干燥种子、花粉粒中大量积累,也参与到对水分缺失、ABA处理的生理应答过程。该文从栽培种花生鲁花14中克隆得到一个LEA18基因,命名为AhLEA18。对其序列的生物信息学分析表明,AhLEA18具有典型LEA18蛋白序列特征。通过半定量RT-PCR的方法对该基因在花生植株不同组织及不同发育时期的种子中的表达情况进行了分析。 展开更多

关键词 花生 胚胎发育晚期丰富蛋白 花生LEA18 半定量RT-PCR

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野生茄托鲁巴姆LEA蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4

13

作者 叶雪凌 周宝利 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期30-34,共5页

野生茄托鲁巴姆高抗黄萎病,是研究茄子黄萎病抗性的理想试材。胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白。研究以1个受黄萎病菌诱导的托鲁巴姆EST为种子序列,结合电子克隆及RT-PCR验证的策略,获得了LEA蛋白... 野生茄托鲁巴姆高抗黄萎病,是研究茄子黄萎病抗性的理想试材。胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白。研究以1个受黄萎病菌诱导的托鲁巴姆EST为种子序列,结合电子克隆及RT-PCR验证的策略,获得了LEA蛋白基因的全长cDNA序列,命名为StLEA1。该基因的完整开放阅读框为291 bp,编码96个氨基酸,编码蛋白的分子量为10.748 kDa,等电点为9.913。经序列分析,StLEA1为水溶性蛋白,不存在信号肽,具有LEA5家族的典型结构域和保守序列,预测含有多个磷酸化位点。表达分析表明,托鲁巴姆受黄萎病菌侵染后,StLEA1在根系中上调表达。为探讨野生茄托鲁巴姆抗黄萎病分子机制提供了素材。 展开更多

关键词 野生茄托鲁巴姆 黄萎病 胚胎发育晚期丰富蛋白

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蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的克隆及表达分析 被引量：5

14

作者 马婧 孙文婷 +2 位作者 王晶 眭顺照 李名扬 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1663-1672,共10页

从蜡梅(Chimonanthus praecox)花cDNA文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因的cDNA全长序列,命名为CpLEA(GenBank登录号:JF412788),该基因cDNA含有一个273 bp编码91个氨基酸的开放阅读框,从蜡梅基因组DNA中扩增该基因发现,该基因含... 从蜡梅(Chimonanthus praecox)花cDNA文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因的cDNA全长序列,命名为CpLEA(GenBank登录号:JF412788),该基因cDNA含有一个273 bp编码91个氨基酸的开放阅读框,从蜡梅基因组DNA中扩增该基因发现,该基因含有两个大小分别为35 bp和707 bp的内含子。生物信息学分析显示,CpLEA的编码蛋白含有4个胚胎晚期丰富蛋白第3族LEA蛋白特有的11个氨基酸的基元重复序列,进化树分析表明该编码蛋白与榛子的LEA蛋白亲缘关系最近。通过原核表达获得了与预期大小一致的融合蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在蜡梅成熟种子中表达量最高,在根中几乎不表达;在盛开期花的各个部位中又以雌蕊中的表达量最高;在花发育早期表达量较高,随后下降并保持相对稳定,在衰败期突增并达到最高;检测该基因在脱落酸(ABA 50μmol·L-1)、低温(4℃)、高温(42℃)、干旱(30%PEG6000)和高盐(NaCl 1 mol·L-1)5种外源非生物胁迫因子作用下的表达特性。结果表明,该基因能够被ABA、低温、高温、PEG和NaCl诱导表达,并在随后的时间内呈现出不同的表达模式。表明CpLEA可能在蜡梅花发育和多种非生物胁迫响应中发挥作用。 展开更多

关键词 蜡梅 胚胎晚期丰富蛋白 原核表达 基因表达分析

原文传递

OsLEA5c在大肠杆菌中的表达、纯化及对蛋白质的保护效应研究

15

作者 胡廷章 陈再刚 +1 位作者 秦娟 黄小云 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第12期11-14,共4页

为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲... 为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲体系中,50℃处理10、20、30 min后,乳酸脱氢酶的活性分别残留43.20%、24.53%、17.55%;而按1∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白后,乳酸脱氢酶活性分别保留85.77%、74.24%、65.27%。干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性仅保留2.55%~4.19%;按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留17.59%、24.73%、36.39%。反复冻融5次,乳酸脱氢酶活性残留9.41%~12.14%;而按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留28.09%、69.44%、95.16%。表明OsLEA5c蛋白对其他蛋白质具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融胁迫对蛋白质的损伤。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA5c蛋白 乳酸脱氢酶 蛋白质活性

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棉花种子特异表达的LEA启动子克隆及功能验证 被引量：9

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作者 刘峰 汪小东 +1 位作者 赵彦鹏 孙杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期310-317,共8页

以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,... 以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,如E-box、ABRE元件、A-box等。与已报道的棉花品种Coker 201的LEA基因D34的5'端上游调控序列1212bp相比,两者具有97%的一致性。拟南芥遗传转化的功能分析结果表明,所克隆的序列能驱动GUS基因在种子中特异表达,且GUS主要在转基因植物的种子发育后期表达;其表达强度要弱于组成型的CaMV35S启动子。研究结果不仅有助于进一步深入认识棉花LEA基因功能及其表达调控规律,也为植物遗传转化提供组织特异性的启动子。 展开更多

关键词 棉花 种子特异性启动子 胚胎发育晚期丰富蛋白

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番木瓜干旱胁迫相关CpDHN1基因的克隆与分析 被引量：3

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作者 郭静远 邹智 +2 位作者 孔华 贺萍萍 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第12期3492-3499,共8页

番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产... 番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产的病毒病,鲜见针对非生物胁迫的报道。脱水素又名第二类胚胎发育晚期丰富蛋白,属于亲水性高、富含甘氨酸、复杂度低的非结构蛋白,因其与生物的抗逆性密切相关而受到广泛关注。为解决番木瓜生产在地域上的局限性,并进一步提高其品质和产量,积极筛选和鉴定参与非生物胁迫响应的关键基因具有重要的理论意义和应用价值。本研究基于转录组获得的CpDHN1转录本序列,以‘台农二号’番木瓜组培苗叶片为材料,提取总RNA进行反转录,结合RT-PCR技术克隆了该基因636 bp的全长编码区序列,在此基础上对其进行序列、表达特性以及原核表达分析。结果显示,CpDHN1编码211个氨基酸,其理论分子量为24.09 kDa,等电点为5.05,总平均疏水指数为–1.584,不稳定系数为66.51,属于不稳定、高度亲水的细胞核定位蛋白。CpDHN1蛋白富含谷氨酸、赖氨酸和丝氨酸,含有3个保守区域,即2个K片段和1个S片段,符合脱水素蛋白的基本结构特征,属于SKn型脱水素。生物信息学分析表明CpDHN1无跨膜螺旋,其二级结构中以α-螺旋结构占主导。表达分析显示,该基因在根、叶片和韧皮部树液中均有表达,且其表达水平受干旱胁迫调控。同源分析表明,CpDHN1与拟南芥AtLEA4序列相似性最高,为46.8%,而与番木瓜中已报导的另一个脱水素CpDHN的相似性仅为19.4%。研究还构建了CpDHN1的原核表达载体,根据SDS-PAGE结果,CpDHN1在40 kDa处有条中强度的诱导条带,而在55 kDa处有条高亮的诱导条带,可能与其无规结构有关。这些结果为进一步的功能分析与应用奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 番木瓜 胚胎发育晚期丰富蛋白 脱水素 干旱胁迫 原核表达

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水稻干尖线虫Ab-lea基因在高渗透压下的表达 被引量：2

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作者 陈俏丽 王峰 +2 位作者 李丹蕾 零雅茗 张瑞芝 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期652-657,共6页

【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA... 【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)的基因表达量会显著上调。作为逆境表达蛋白,LEA能在逆境下保护生物。为探究水稻干尖线虫LEA编码基因(Ab-lea)在高渗透压胁迫下的表达模式及功能,【方法】根据转录组数据克隆到Ab-lea。以无机溶剂饱和Mg SO4·7H2O溶液为高渗透压胁迫剂,对水稻干尖线虫进行高渗透压胁迫,240 min后该线虫进入变渗隐生。通过RT-PCR验证Ab-lea在线虫进入变渗隐生及维持变渗隐生过程中的表达特性。使用RNAi技术,探究该线虫Ab-lea沉默后,高渗透压胁迫下存活率变化。【结果】RT-PCR结果表明,Ab-lea在进入变渗隐生前期及维持变渗隐生过程中表达量上调。Ab-lea沉默后,水稻干尖线虫在进入变渗隐生后存活率显著下降。【结论】表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫变渗隐生。本研究为进一步探究该线虫抗高渗透压胁迫的生理机制奠定基础,为防治该线虫提供新思路。 展开更多

关键词 胚胎发育晚期丰富蛋白 水稻干尖线虫 高渗透压胁迫 变渗隐生 基因干涉

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植物非生物胁迫应答的分子机制 被引量：22

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作者 杨献光 梁卫红 +2 位作者 齐志广 马闻师 沈银柱 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期158-161,共4页

非生物胁迫因子是制约植物生长发育、影响作物产量和质量的关键因子。这些非生物胁迫的共同点是它们都会导致植物细胞缺水,使细胞的水分平衡紊乱,还可以引起蛋白质等大分子变性,破坏植物细胞内的膜结构等。为了生存,植物在遇到非生物胁... 非生物胁迫因子是制约植物生长发育、影响作物产量和质量的关键因子。这些非生物胁迫的共同点是它们都会导致植物细胞缺水,使细胞的水分平衡紊乱,还可以引起蛋白质等大分子变性,破坏植物细胞内的膜结构等。为了生存,植物在遇到非生物胁迫时不得不在形态和生理生化代谢上进行一些调整,以适应或忍耐环境胁迫。揭示植物胁迫应答分子机理是人们长期以来探索的重大课题。非生物胁迫引起的应答非常复杂并且常常相互关联,干旱、高盐、低温等胁迫可以引起相似的应答反映,如积累大量的渗透调节剂、重建细胞内离子动态平衡、修复被破坏的膜系统、清除活性氧自由基等等。近年来,胁迫应答的分子机理研究成果颇丰,结合笔者等的研究,本文简要进行了综述。 展开更多

关键词 植物 非生物胁迫 信号转导 蛋白激酶 胚胎晚期丰富蛋白 转录因子

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荧光定量PCR检测干旱胁迫下长春花Crlea基因的相对表达(英文) 被引量：5

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作者 祖元刚 聂明珠 +2 位作者 房思良 于景华 郭晓瑞 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期405-410,共6页

首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8h的胁迫时间中,叶片和根部的Cr... 首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8h的胁迫时间中,叶片和根部的Crlea基因表现出相似的积累模式.长春花Crlea基因的表达随着胁迫时间的延长而表达增强.在叶片中,在6 h和8 h的干旱处理后,Crlea基因表达显著提高,分别是未处理材料的9.984和20.431倍.在根部, 在8 h的处理后,Crlea基因的表达量显著提高（2.831倍于对照）.初步结果表明Crlea基因的表达没有组织特异性,并且为干旱胁迫正调控. 展开更多

关键词 长春花 干旱胁迫 晚期胚胎丰富蛋白 荧光定量 相对表达

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