目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫...目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。展开更多
目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链...目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription．polymerase chain reaction，RT—PCR）方法进行筛查，对EV—A71阳性标本进行病毒分离，对分离到的病毒提取核酸，用RT—PCR方法对VPl编码区进行扩增及核苷酸序列测定和分析，并与EV．A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果青海省2016-2017年共分离到114株EV-A71，均为C4基因亚型中的C4a进化分支。在亲缘性关系树中显示，又进一步分属2个不同的小分支。2016-2017年青海省流行的不同传播链上EV—A71与我国其他省流行的EV-A71基因亲缘关系较为接近。结论青海省2016-2017年流行的EV—A71以C4a为绝对优势基因亚型，未监测到其他基因型病毒。青海省EV—A71不是独立进化的，而是与我国其他地区流行的EV—A71共同进化。展开更多
目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离...目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离后利用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）对EV、EVA71和柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus Group A Type 16,CVA16）进行检测;2008年标本利用RT-PCR直接进行检测;2009~2010年标本利用实时荧光（Real-time）RT-PCR直接进行检测,选择32例EVA71阳性标本进行VP1编码区基因扩增,扩增产物经过测序后利用序列分析软件（Lasergene）进行分析。结果宁波市2003~2010年共检测HFMD标本1335份,其中EV阳性1159份,总检出率为86.82%;EVA71阳性645份,占确证病例数的55.65%;CVA16阳性205份,占确证病例数的17.69%;未分型标本309份,占确证病例数的26.66%;未发现EVA71和CVA16同时阳性标本。32株代表株VP1编码区核苷酸序列的长度均为891碱基对（base pair,bp）,编码297个氨基酸,核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.2%~100%和99.3%~100%,与C4a基因亚型代表株的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为95.4%~99.2%和98%~100%。氨基酸进化位点分析表明,来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。在基因进化树上,32株流行株全部处于C4a基因亚型分支上,但位于不同的进化簇中。结论 EVA71是引起宁波市2008~2010年HFMD的优势毒株,也是导致HFMD重症病例和死亡病例的主要病原。来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。32株代表株均属于C4a基因亚型,与同期我国其他地区流行株共同进化。展开更多
目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链...目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法进行筛查,对HEV_（A71）阳性标本进行病毒分离,对分离到的病毒提取核酸,用RT-PCR方法对VP1编码区进行扩增及核苷酸序列测定和整理分析,并与HEV_（A71）各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果对青海省2013年分离的62株HEV_（A71）进行VP1编码区核苷酸序列测定后,分析发现它们在VP1编码区核苷酸水平和氨基酸水平的同源性分别为95.5%-100.0%和99.0%-100.0%。与其他各基因型和基因亚型的HEV_（A71）代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV_（A71）分离株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型C_（4a）进化分支。与2008年、2012年在青海省分离的HEV_（A71）在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为95.8%-97.5%和99.0%-99.7%。结论2013年,C_（4a）亚型HEV_（A71）在青海省持续传播并占有绝对优势,且存在两条传播链的流行。展开更多
目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain ...目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,r RT-PCR）方法对北京市丰台区2013年3-9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果在81份咽拭子标本中,有26份经r RT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点（43、58、164、184、240、249）存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸（Alanine,Ala）-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸。核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3%-100.0%,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性最高（90.0%-97.6%）。进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支。展开更多
目的 对西宁市2017年手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)中肠道病毒A组71型(Enterovirus A group 71 type,EV-A71)的基因特征进行分析。方法 采用实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法对西宁市2017年HFMD病例的临床标本进...目的 对西宁市2017年手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)中肠道病毒A组71型(Enterovirus A group 71 type,EV-A71)的基因特征进行分析。方法 采用实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法对西宁市2017年HFMD病例的临床标本进行EV-A71筛查,阳性标本进行病毒分离。利用EV-A71特异性引物对病毒分离到的阳性毒株的VP1编码区进行扩增,并进行核苷酸序列测定和分析,同时将本研究序列与EV-A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果 西宁市2017年共分离到57株EV-A71,均为C4a基因亚型,亲缘性分析显示,分属2个不同的小分支。2017年西宁市流行的EV-A71序列与我国其他省流行株的基因亲缘关系较为接近。结论 西宁市2017年流行的EV-A71以C4a为绝对优势基因亚型并与我国其他地区流行的EV-A71共同进化。展开更多
手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒A组71型(Enterovirus group A 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CV-A16)。EV-A71感染易引发重症病例及死亡病例,而CV-A16感...手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒A组71型(Enterovirus group A 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CV-A16)。EV-A71感染易引发重症病例及死亡病例,而CV-A16感染所致的症状普遍较轻,且CV-A16容易引发重复感染,但目前其中的机理仍不清楚。本研究比较了EV-A71与CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞16HBE后I型干扰素(Type I interferon,IFN-Ι)产生相关基因的改变。结果发现EV-A71感染后TLR3、TLR7、RIG-I、MDA5、MAVS、MyD88、IRF3、IRF7、IFNα和IFNβ的基因表达量均发生了显著性地上调,而在CV-A16感染后仅MDA5显著性上调;TLR3和IRF3的基因表达水平显著性地下降,而其它基因表达水平均无显著性地变化。此外,病毒滴度和病毒拷贝数的检测结果显示,CV-A16在16HBE上的复制效率明显高于EV-A71。上述结果提示我们EV-A71和CV-A16感染16HBE对其IFN-I产生相关基因表达的影响完全不一样,且CV-A16更容易感染人呼吸道上皮细胞。本研究为EV-A71和CV-A16引起的临床症状差异的机理研究以及CV-A16重复感染的机理研究提供了线索。展开更多
文摘目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。
文摘目的建立肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)灭活疫苗病毒参考品,用于病毒滴度内部质控品及灭活效果验证实验室评价。方法建立1批病毒参考品,按照《中华人民共和国药典》对其进行检定,包括无菌、支原体及分子生物学鉴定检查等。对其滴度进行标定和储存稳定性研究,并进行病毒滴定和灭活效果验证方面的应用研究。结果建立的EV-A71病毒参考品无菌检查及支原体检查结果均符合规定。分子生物学鉴定结果显示参考品只含有单一的EV-A71 VP1特异性条带。EV-A71病毒参考品标定后的滴度平均值为7.000 lgCCID_(50)/ml(95%CI为6.917~7.083 lgCCID_(50)/ml),可接受范围为6.566~7.434 lgCCID_(50)/ml,变异系数(coefficient of variation,CV)为3.01%,于-60℃及以下存放12个月的CV为2.08%,稳定性良好。将参考品作为病毒滴定测定的内部质控品应用于日常监测50次试验,滴度趋势分析结果显示未出现超趋势现象(out of trend,OOT)且均在警戒限内;将参考品作为阳性对照应用于灭活效果验证,结果显示细胞感染法及免疫荧光法的检测结果较为一致。结论建立了EV-A71病毒感染性滴度检测用参考品(EV-A71病毒参考品),12个月内储存稳定性良好,可用于EV-A71灭活疫苗生产工艺中病毒滴度评价和控制,以及作为灭活效果验证中的阳性对照,从而为单价或多价肠道病毒灭活疫苗的研究提供理论依据。
文摘目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription．polymerase chain reaction，RT—PCR）方法进行筛查，对EV—A71阳性标本进行病毒分离，对分离到的病毒提取核酸，用RT—PCR方法对VPl编码区进行扩增及核苷酸序列测定和分析，并与EV．A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果青海省2016-2017年共分离到114株EV-A71，均为C4基因亚型中的C4a进化分支。在亲缘性关系树中显示，又进一步分属2个不同的小分支。2016-2017年青海省流行的不同传播链上EV—A71与我国其他省流行的EV-A71基因亲缘关系较为接近。结论青海省2016-2017年流行的EV—A71以C4a为绝对优势基因亚型，未监测到其他基因型病毒。青海省EV—A71不是独立进化的，而是与我国其他地区流行的EV—A71共同进化。
文摘目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离后利用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）对EV、EVA71和柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus Group A Type 16,CVA16）进行检测;2008年标本利用RT-PCR直接进行检测;2009~2010年标本利用实时荧光（Real-time）RT-PCR直接进行检测,选择32例EVA71阳性标本进行VP1编码区基因扩增,扩增产物经过测序后利用序列分析软件（Lasergene）进行分析。结果宁波市2003~2010年共检测HFMD标本1335份,其中EV阳性1159份,总检出率为86.82%;EVA71阳性645份,占确证病例数的55.65%;CVA16阳性205份,占确证病例数的17.69%;未分型标本309份,占确证病例数的26.66%;未发现EVA71和CVA16同时阳性标本。32株代表株VP1编码区核苷酸序列的长度均为891碱基对（base pair,bp）,编码297个氨基酸,核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.2%~100%和99.3%~100%,与C4a基因亚型代表株的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为95.4%~99.2%和98%~100%。氨基酸进化位点分析表明,来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。在基因进化树上,32株流行株全部处于C4a基因亚型分支上,但位于不同的进化簇中。结论 EVA71是引起宁波市2008~2010年HFMD的优势毒株,也是导致HFMD重症病例和死亡病例的主要病原。来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。32株代表株均属于C4a基因亚型,与同期我国其他地区流行株共同进化。
文摘目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法进行筛查,对HEV_（A71）阳性标本进行病毒分离,对分离到的病毒提取核酸,用RT-PCR方法对VP1编码区进行扩增及核苷酸序列测定和整理分析,并与HEV_（A71）各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果对青海省2013年分离的62株HEV_（A71）进行VP1编码区核苷酸序列测定后,分析发现它们在VP1编码区核苷酸水平和氨基酸水平的同源性分别为95.5%-100.0%和99.0%-100.0%。与其他各基因型和基因亚型的HEV_（A71）代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV_（A71）分离株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型C_（4a）进化分支。与2008年、2012年在青海省分离的HEV_（A71）在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为95.8%-97.5%和99.0%-99.7%。结论2013年,C_（4a）亚型HEV_（A71）在青海省持续传播并占有绝对优势,且存在两条传播链的流行。
文摘目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,r RT-PCR）方法对北京市丰台区2013年3-9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果在81份咽拭子标本中,有26份经r RT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点（43、58、164、184、240、249）存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸（Alanine,Ala）-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸。核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3%-100.0%,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性最高（90.0%-97.6%）。进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支。
文摘目的 对西宁市2017年手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)中肠道病毒A组71型(Enterovirus A group 71 type,EV-A71)的基因特征进行分析。方法 采用实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法对西宁市2017年HFMD病例的临床标本进行EV-A71筛查,阳性标本进行病毒分离。利用EV-A71特异性引物对病毒分离到的阳性毒株的VP1编码区进行扩增,并进行核苷酸序列测定和分析,同时将本研究序列与EV-A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果 西宁市2017年共分离到57株EV-A71,均为C4a基因亚型,亲缘性分析显示,分属2个不同的小分支。2017年西宁市流行的EV-A71序列与我国其他省流行株的基因亲缘关系较为接近。结论 西宁市2017年流行的EV-A71以C4a为绝对优势基因亚型并与我国其他地区流行的EV-A71共同进化。
文摘手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒A组71型(Enterovirus group A 71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CV-A16)。EV-A71感染易引发重症病例及死亡病例,而CV-A16感染所致的症状普遍较轻,且CV-A16容易引发重复感染,但目前其中的机理仍不清楚。本研究比较了EV-A71与CV-A16感染正常人呼吸道上皮细胞16HBE后I型干扰素(Type I interferon,IFN-Ι)产生相关基因的改变。结果发现EV-A71感染后TLR3、TLR7、RIG-I、MDA5、MAVS、MyD88、IRF3、IRF7、IFNα和IFNβ的基因表达量均发生了显著性地上调,而在CV-A16感染后仅MDA5显著性上调;TLR3和IRF3的基因表达水平显著性地下降,而其它基因表达水平均无显著性地变化。此外,病毒滴度和病毒拷贝数的检测结果显示,CV-A16在16HBE上的复制效率明显高于EV-A71。上述结果提示我们EV-A71和CV-A16感染16HBE对其IFN-I产生相关基因表达的影响完全不一样,且CV-A16更容易感染人呼吸道上皮细胞。本研究为EV-A71和CV-A16引起的临床症状差异的机理研究以及CV-A16重复感染的机理研究提供了线索。
