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CRISPR/Cas9结合loxP-Cre技术制备肝特异性G6PC基因缺陷小鼠的实验研究
被引量：
1
1
作者
王薇
宋红梅
+3 位作者
张胜海
刘铭
张长青
邱正庆
《北京医学》
CAS
2020年第11期1127-1131,共5页
目的建立肝特异性G6PC基因纯合缺陷的Ia型糖原累积症(glycogen storage disease Ia,GSD Ia)小鼠模型。方法通过CRISPR/Cas9基因重组技术使C57BL/6J小鼠受精卵中G6PC基因外显子2两侧分别插入1个loxP原件,产仔后经鉴定打靶成功的小鼠通过...
目的建立肝特异性G6PC基因纯合缺陷的Ia型糖原累积症(glycogen storage disease Ia,GSD Ia)小鼠模型。方法通过CRISPR/Cas9基因重组技术使C57BL/6J小鼠受精卵中G6PC基因外显子2两侧分别插入1个loxP原件,产仔后经鉴定打靶成功的小鼠通过扩繁、兄妹交配及与Alb-Cre小鼠交配,最终产生G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表达的肝特异性G6PC基因2号外显子纯合敲除的GSD Ia小鼠模型。通过监测模型鼠及背景鼠的餐后0~12 h的血糖来验证模型是否成功。结果经PCR鉴定F0及F1代小鼠成功于G6PC基因2号外显子两侧插入loxP原件并可稳定遗传;最终成功建立G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表达的GSD Ia小鼠,检测餐后1~12 h血糖均低于背景鼠,说明造模成功。结论应用CRISPR/Cas9基因重组技术及loxP-Cre系统可建立肝特异性G6PC基因缺陷的GSD Ia小鼠,可用于该病的病理研究及药物研发。
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关键词
糖原累积症Ia型
肝特异性g6pc基因敲除
小鼠模型
CRISPR/Cas9
loxP-Cre
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职称材料
肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定
被引量：
1
2
作者
王语涵
许雅萍
+6 位作者
李南
陈婷婷
李玲
高萍萍
王华
魏伟
孙妩弋
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期189-194,共6页
目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/...
目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/fl))和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2^(ΔHSC))小鼠模型。观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态。结果成功鉴定Grk2^(ΔHSC)小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2^(ΔHSC)小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2^(ΔHSC)小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2^(ΔHSC)小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2^(fl/fl)相比差异无显著性,可用于后续研究。结论本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具。
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关键词
g
蛋白偶联受体激酶2
Cre-loxP重组酶系统
细胞
特
异性
敲除
肝
星状细胞
基因
鉴定
繁育
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职称材料
题名
CRISPR/Cas9结合loxP-Cre技术制备肝特异性G6PC基因缺陷小鼠的实验研究
被引量：
1
1
作者
王薇
宋红梅
张胜海
刘铭
张长青
邱正庆
机构
中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院儿科
北京科信必成医药科技发展有限公司
出处
《北京医学》
CAS
2020年第11期1127-1131,共5页
基金
国家重点研发计划(2016YFC0901500)
北京市自然科学基金(7194308)。
文摘
目的建立肝特异性G6PC基因纯合缺陷的Ia型糖原累积症(glycogen storage disease Ia,GSD Ia)小鼠模型。方法通过CRISPR/Cas9基因重组技术使C57BL/6J小鼠受精卵中G6PC基因外显子2两侧分别插入1个loxP原件,产仔后经鉴定打靶成功的小鼠通过扩繁、兄妹交配及与Alb-Cre小鼠交配,最终产生G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表达的肝特异性G6PC基因2号外显子纯合敲除的GSD Ia小鼠模型。通过监测模型鼠及背景鼠的餐后0~12 h的血糖来验证模型是否成功。结果经PCR鉴定F0及F1代小鼠成功于G6PC基因2号外显子两侧插入loxP原件并可稳定遗传;最终成功建立G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表达的GSD Ia小鼠,检测餐后1~12 h血糖均低于背景鼠,说明造模成功。结论应用CRISPR/Cas9基因重组技术及loxP-Cre系统可建立肝特异性G6PC基因缺陷的GSD Ia小鼠,可用于该病的病理研究及药物研发。
关键词
糖原累积症Ia型
肝特异性g6pc基因敲除
小鼠模型
CRISPR/Cas9
loxP-Cre
Keywords
g
lyco
g
en stora
g
e disease type Ia
liver-specific
g
6
pc
g
ene knock-out
mouse model
CRISPR/Cas9
loxP-Cre
分类号
R725.8 [医药卫生—儿科]
R-332 [医药卫生]
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职称材料
题名
肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定
被引量：
1
2
作者
王语涵
许雅萍
李南
陈婷婷
李玲
高萍萍
王华
魏伟
孙妩弋
机构
安徽医科大学临床药理研究所
安徽医科大学第一附属医院肿瘤科
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期189-194,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No 82370632)
安徽省高校杰出青年科研项目(No 2023AH020033)
+2 种基金
安徽省转化医学研究院科研基金项目(No 2022zhyx-C07)
安徽医科大学科研水平提升计划(No 2021xkjT016)
安徽医科大学第三附属医院基础与临床合作研究提升计划培育专项(No 2022sfy014)。
文摘
目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/fl))和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2^(ΔHSC))小鼠模型。观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态。结果成功鉴定Grk2^(ΔHSC)小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2^(ΔHSC)小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2^(ΔHSC)小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2^(ΔHSC)小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2^(fl/fl)相比差异无显著性,可用于后续研究。结论本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具。
关键词
g
蛋白偶联受体激酶2
Cre-loxP重组酶系统
细胞
特
异性
敲除
肝
星状细胞
基因
鉴定
繁育
Keywords
g
protein-coupled receptor kinase 2
Cre-loxP recombinase system
cell specific knockout
hepatic stellate cell
g
enotypin
g
identification
breedin
g
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.47 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R345.57 [医药卫生—基础医学]
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
R977.3 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CRISPR/Cas9结合loxP-Cre技术制备肝特异性G6PC基因缺陷小鼠的实验研究
王薇
宋红梅
张胜海
刘铭
张长青
邱正庆
《北京医学》
CAS
2020
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定
王语涵
许雅萍
李南
陈婷婷
李玲
高萍萍
王华
魏伟
孙妩弋
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
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