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副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
1
作者 平宇明 张宏莉 +8 位作者 班亚星 刘建奇 任希恩 邬彩丽 刘东霞 徐丽媛 杨雪娇 常华 李劼 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期1-6,共6页
为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏... 为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 实时荧光定量PCR 检测方法 感染调查
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几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究 被引量：8
2
作者 张灵霞 吴雪琼 +2 位作者 史迎昌 梁建琴 张俊仙 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期116-118,共3页
目的　了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法　常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0... 目的　了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6 (E)、MPT6 4 (M )、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏 (DTH)反应的能力。方法　常规皮肤实验法 :灭活H3 7Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5UPPD标准品为阳性对照 ,0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm ) ,取二者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5UPPD及 0 .8μgE、0 .8μgM、0 .8μgA、0 .4 μgA + 0 .4 μgM、0 .4 μgA + 0 .4 μgE、0 .4 μgE + 0 .4 μgM ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧 ,每批 6只 ,共 3批。注射后 2 4、4 8、72h分别测量硬结反应横、纵直径 (mm) ,取二者的平均值。结果　常规皮肤试验 0 .8μgM、A、M +E及E +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 0 .8μgE抗原及M +A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。时间效应 :重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径 2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后 ,结果与常规皮肤试验结果一致。结论　从试验结果? 展开更多
关键词 结核分支杆菌 重组结核分支杆菌蛋白抗原 迟发超敏反应
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应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌 被引量：6
3
作者 李国利 庄玉辉 +1 位作者 赵铭 孙桂芝 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期14-15,18,共3页
目的 :建立双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌。方法 :通过试验选择双重PCR最佳反应条件 ,检测引物A1、A2和B1、B2扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性 ,并对 34株结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定。结... 目的 :建立双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌。方法 :通过试验选择双重PCR最佳反应条件 ,检测引物A1、A2和B1、B2扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性 ,并对 34株结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定。结果 :引物A1、A2能扩增所试 2 4种分支杆菌 ,B1、B2仅扩增结核分支杆菌复合体菌种 ,两对引物扩增 12种非分支杆菌均为阴性。结果表明 ,用引物A1、A2扩增分支杆菌属共有的 6 5Kda抗原基因383bp片段和B1、B2扩增结核分支杆菌复合体特异的插入序列IS10 812 38bp片段鉴定结核与非结核分支杆菌是特异的。两对引物双重PCR检测结核分支杆菌DNA的敏感性分别为 1Pg和 10 0fg。双重PCR检测 34株临床分离株 ,结核分支杆菌可见 383bp和 2 38bp两条扩增带 ,非结核分支杆菌仅见 383bp一条扩增带。据此差别 ,能将结核与非结核分支杆菌鉴别开 ,并能在 1～ 2d完成试验。结论 展开更多
关键词 双重PCR 结核分支杆菌 非结核分支杆菌 结核
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结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究 被引量：1
4
作者 华树成 李丹 李洋 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期36-38,共3页
目的探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多... 目的探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增,其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp,并对439bp进行BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶消化,同时,将135例临床标本进行培养、涂片,和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCRRFLP)检测。结果mPCRRFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论mPCRRFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性分析 结核分支杆菌 非结核分支杆菌
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非结核分支杆菌肺病8例误诊分析 被引量：1
5
作者 张春智 娄乐山 +1 位作者 钟敏 王安容 《临床肺科杂志》 2000年第4期306-307,共2页
关键词 非结核分支杆菌肺病 误诊分析 非结核分支杆菌病 肺结核病 抗酸杆菌 肺结核患者 抗酸染色 抗结核药物 痰培养 痰涂片
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PCR-SSCP快速检测结核分支杆菌rPOB基因突变
6
作者 胡忠义 靳安佳 +1 位作者 王莉莉 王芳 《临床肺科杂志》 1999年第1期24-25,共2页
结核分支杆菌的耐药性问题仍是人们长期关注的焦点问题。利福平是当今最主要的抗结核药物之一,如感染菌为利福平耐药,则治疗效果将受到严重影响。因此,利福平耐药性测定尤为重要。然而,由于结核分支杆菌生长缓慢,常规药敏试验需4～6周,... 结核分支杆菌的耐药性问题仍是人们长期关注的焦点问题。利福平是当今最主要的抗结核药物之一,如感染菌为利福平耐药,则治疗效果将受到严重影响。因此,利福平耐药性测定尤为重要。然而,由于结核分支杆菌生长缓慢,常规药敏试验需4～6周,不能满足临床之急需。分子生物学技术的不断发展给结核分支杆菌耐药性的快速检测带来了希望。近年的研究表明结核分支杆菌利福平耐药与rPOB基因突变有关。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 RPOB基因 利福平 快速检测 PCR-SSCP 药敏试验 临床分离株 耐药株 结核分支杆菌H37Rv 基因突变
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重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值 被引量：38
7
作者 张小刚 庄玉辉 +5 位作者 何秀云 熊志红 董恩军 李书琳 张永胜 李昕 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2001年第5期281-283,共3页
目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法　以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果　 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵... 目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法　以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果　 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论　rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 重组蛋白38kD 结核病 重组蛋白16kD ELISA 血清学诊断
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结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究 被引量：21
8
作者 吴雪琼 张俊仙 +5 位作者 李洪敏 史迎昌 张灵霞 梁建琴 金关甫 由昆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期17-19,22,共4页
目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检... 目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。 展开更多
关键词 DNA疫苗 结核分支杆菌 结核病 免疫治疗
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66例非结核分支杆菌肺病的临床分析 被引量：24
9
作者 吴龙章 蔡杏珊 +3 位作者 关玉华 汪福康 张院良 冯宝玲 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期257-259,共3页
目的　了解非结核分支杆菌 (NTM )肺病的临床特征。方法　对 1998— 2 0 0 2年 4年间广州地区 4 12 9例分支杆菌培养阳性的病例中 ,经菌型鉴定而确诊为NTM肺病的资料完整的 6 6例病例进行分析。结果　 6 6例NTM肺病中 ,快速生长型感染的... 目的　了解非结核分支杆菌 (NTM )肺病的临床特征。方法　对 1998— 2 0 0 2年 4年间广州地区 4 12 9例分支杆菌培养阳性的病例中 ,经菌型鉴定而确诊为NTM肺病的资料完整的 6 6例病例进行分析。结果　 6 6例NTM肺病中 ,快速生长型感染的有 4 0例 ,其中脓肿分支杆菌 2 9例 ,龟分支杆菌 7例 ,耻垢分支杆菌 3例和偶然分支杆菌 1例 ;慢速生长型感染的有 2 6例 ,其中鸟分支杆菌 18例 ,胞内分支杆菌 6例 ,蟾分支杆菌和海分枝杆菌各 1例。分枝杆菌混合感染的有 10例 ;新发现病例16例 ,病程在 1～ 10年的有 31例 ,11～ 2 5年 11例 ,30年以上的有 8例 ;主要症状依次为咳嗽、咳白粘痰、咯血和发热 ;X线胸片示两侧受累者达 6 9.7% ,右侧 2 1.2 % ,左侧仅有 4 .5 % ,无病灶者占4 .5 % ;出现胸腔积液的有 7例 ;NTM对抗结核药物呈现高度的原始耐受性 ,但对喹诺酮类、大环内脂类和氨基糖甙类的耐药率相对较低。结论　NTM肺病的临床特征无特异性 ,病程长 ,常规的抗结核治疗效果差。 展开更多
关键词 非结核分支杆菌肺病 临床分析 诊断 治疗 龟分支杆菌 脓肿分支杆菌
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应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的研究 被引量：10
10
作者 梁建琴 吴雪琼 +2 位作者 曹立雪 李洪敏 张俊仙 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期215-219,共5页
应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇 (EMB)耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应 (PCR)产物进行反向斑点杂... 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇 (EMB)耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应 (PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR 单链构象多态性 (PCR SSCP)和PCR 直接测序 (PCR DS)结果比较。对 81株结核分支杆菌临床分离株进行分析 ,31株EMB敏感株中 ,2 6株embB基因的SSCP图谱、膜反向斑点杂交结果与标准株 (H37Rv)完全相同 ;其余 5株SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 3株E1b杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→GTG突变 ;2株E1d杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→ATA突变。 5 0株耐EMB菌株中 ,2 4株PCR SSCP图谱与标准菌株相同 ,E1杂交阳性 ;2 6株PCR SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 18株E1b杂交阳性 ,2株E1c杂交阳性 ,5株E1d杂交阳性 ,1株E1e杂交阳性 ,未发现E1f杂交阳性 ,与PCR SSCP、PCR DS分析结果一致。突变检出率为 5 2 %。膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法。 展开更多
关键词 膜反向斑点杂交 结核分支杆菌 乙胺丁醇 EMBB基因 药物耐受性 结核病
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链霉素耐药结核分支杆菌rpsL基因分析 被引量：9
11
作者 黄海南 韩金祥 +3 位作者 王进鸿 宋长征 梁浩 张忠玲 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期376-381,共6页
结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis.TB)的rpsL基因突变往往与链霉素 (Streptomycin .SM)耐药变异有关。选择了 77例TB临床分离株 ,应用BACTEC4 6 0快速培养系统进行常规药敏实验 ,同时针对rpsL基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,对PC... 结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis.TB)的rpsL基因突变往往与链霉素 (Streptomycin .SM)耐药变异有关。选择了 77例TB临床分离株 ,应用BACTEC4 6 0快速培养系统进行常规药敏实验 ,同时针对rpsL基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,对PCR产物进行单链构型多态性 (SSCP)分析 ,MboⅡ酶切后的限制性片段长度分析 (RFLP)和序列测定分析。常规药敏实验显示 :有 2 0株为SM敏感 ,5 7株为耐药。SSCP显示 :34株的rpsL基因为野生型 ,4 3株为突变型。与常规药敏相比SSCP的特异性和阳性预期值分别为 95 %和 98%。RFLP显示 :81 4 %的突变类型使其失去MboⅡ酶切位点。序列测定显示 :失去MboⅡ酶切位点的突变为rpsL基因 4 3位密码子存有单碱基突变 (AAG→AGG)。实验结果表明 ,TB对SM耐药变异与rpsL基因突变相关 ,其中第 4 3位密码子的突变是最常见的原因。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 链霉素耐药 RPSL基因 基因突变
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γ干扰素在非结核分支杆菌感染中的作用研究进展 被引量：2
12
作者 邱佳熠 王春芳 钱爱东 《动物医学进展》 北大核心 2017年第6期71-74,共4页
非结核分支杆菌是指除结核分支杆菌复合群与麻风分支杆菌以外的其他分支杆菌。非结核分支杆菌广泛分布在土壤、水和自然环境中,研究人员发现非结核分支杆菌能够严重危害人类的健康。IFN-γ是一种具有免疫调节、抗肿瘤等作用的细胞因子,... 非结核分支杆菌是指除结核分支杆菌复合群与麻风分支杆菌以外的其他分支杆菌。非结核分支杆菌广泛分布在土壤、水和自然环境中,研究人员发现非结核分支杆菌能够严重危害人类的健康。IFN-γ是一种具有免疫调节、抗肿瘤等作用的细胞因子,在非结核分支杆菌感染过程中起着重要的作用。论文就IFN-γ在非结核分支杆菌感染中起到的作用做一综述。 展开更多
关键词 非结核分支杆菌 结核分支杆菌 Γ干扰素 巨噬细胞
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利用基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的研究 被引量：7
13
作者 梁莉 乐军 +2 位作者 李瑶 肖和平 王洪海 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期841-844,共4页
目的利用基因芯片技术对我国结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变进行研究,建立大规模快速检测结核分支杆菌耐药基因型的基因芯片分子药敏试验方法。方法利用寡核苷酸基因芯片技术分析19株结核分支杆菌临床分离株的rpoB基因突... 目的利用基因芯片技术对我国结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变进行研究,建立大规模快速检测结核分支杆菌耐药基因型的基因芯片分子药敏试验方法。方法利用寡核苷酸基因芯片技术分析19株结核分支杆菌临床分离株的rpoB基因突变,并经PCR-直接测序法(PCR-DS)验证,以结核分支杆菌H37Rv标准株为对照。结果7株结核分支杆菌药物敏感株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变,12株RFP耐药株中,1株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变;11株rpoB基因有突变,其中5株为531位TCG→TTG或TGG突变,5株为526位CAC→TAC或GAC或CGC突变,531位和526位突变占耐药菌株rpoB突变的83.3%,其余为502、505、506、507、516、518、522、538位突变;芯片检测和PCR-DS分析结果符合率达100%。结论大多数结核分支杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致,采用基因芯片技术可以快速、准确、大规模地确定结核分支杆菌RFP耐药突变的部位和性质,是一种有前途的结核分支杆菌分子药敏试验方法。 展开更多
关键词 基因芯片 结核 结核分支杆菌 利福平 分子药敏试验
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福建省畲族人群结核分支杆菌IS6110DNA指纹图谱特征分析 被引量：6
14
作者 梁庆福 陈求扬 +5 位作者 赵永 林建 林淑芳 林勇明 吴能健 郑金凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期926-929,共4页
目的分析福建省畲族人群和汉族人群结核病患者分支杆菌DNA指纹特征,探讨畲族人群结核病的分子流行病学特征。方法采用基于IS6110的PCR分型方法,对我省10个畲族乡镇调查点分离的50例畲族人群结核菌株和50例汉族人群结核菌株进行检测,用Ge... 目的分析福建省畲族人群和汉族人群结核病患者分支杆菌DNA指纹特征,探讨畲族人群结核病的分子流行病学特征。方法采用基于IS6110的PCR分型方法,对我省10个畲族乡镇调查点分离的50例畲族人群结核菌株和50例汉族人群结核菌株进行检测,用Gel-Pro analyzer4.0软件和NTSYSpc2.10e软件对DNA指纹图谱进行聚类分析。结果100株结核分支杆菌共分为4个主要类型,其中Ⅰ型(北京基因型)59株占59%,Ⅱ型38株占38%,Ⅲ型2株占2%,IV型为1株占1%。汉族病例菌株指纹为Ⅰ、Ⅱ型,以I型为主,占80%,畲族为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型,以II型为主,占56%;经χ2分析,两族病例菌株指纹的型别分布差异有显著统计学意义(P<0.01)。Ⅱ型菌株耐药率(47.4%,18/38)与Ⅰ型菌株耐药率(20.3%,12/59)差异也有显著统计学意义(P<0.05)。结论畲、汉两族主要基因型不同,汉族人群以北京基因型(Ⅰ型)流行为主,而畲族人群则以非北京基因型(Ⅱ型)为主,该型菌耐药率明显高于Ⅰ型,提示与畲族人群结核病高疫情相关,有待于进一步研究。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 指纹图谱 聚类分析 畲族
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γ-干扰素对免疫低下小鼠结核分支杆菌感染的影响 被引量：8
15
作者 张天托 周宇麒 +3 位作者 毕筱刚 张扣兴 张贤兰 唐英春 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期132-135,共4页
目的　观察、评价γ 干扰素 (IFN γ)对免疫功能低下小鼠结核分支杆菌感染的影响和疗效。方法　将DBA/ 2小鼠 90只按免疫功能正常和免疫功能低下 2种状态分别制成小鼠结核分支杆菌感染模型。随机分组给予IFN γ或IFN γ单克隆抗体治疗 ... 目的　观察、评价γ 干扰素 (IFN γ)对免疫功能低下小鼠结核分支杆菌感染的影响和疗效。方法　将DBA/ 2小鼠 90只按免疫功能正常和免疫功能低下 2种状态分别制成小鼠结核分支杆菌感染模型。随机分组给予IFN γ或IFN γ单克隆抗体治疗 ,检测肺组织菌落计数 ,观察治疗后生存率。结果　免疫正常组小鼠无死亡 ,第 2周、第 4周菌落数分别为 (5 1.5± 17.5 )× 10 3cfu/mL、(10 6 .3± 4 1.0 )× 10 3cfu/mL。免疫低下组 8只死亡 ,菌落数分别为 (16 3.7± 6 1.7)× 10 3cfu/mL、(76 8.3± 2 0 6 .5 )× 10 3cfu/mL ,免疫低下 +IFN γ组 3只死亡 ,菌落数分别为 (5 4.2± 2 1.3)× 10 3cfu/mL、(2 12 .7± 80 .7)× 10 3cfu/mL ,免疫低下组与免疫低下 +IFN γ组比较有显著性差异。免疫正常小鼠给予IFN γ抗体后肺组织菌落数增多 ,与对照组比较有显著性差异。结论　IFN γ增强宿主免疫功能 ,对结核分支杆菌感染小鼠产生保护效应 ,适用于免疫功能低下宿主合并结核感染的辅助治疗。 展开更多
关键词 γ—干扰素 免疫低下小鼠 结核分支杆菌 感染 影响
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结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用 被引量：8
16
作者 熊志红 庄玉辉 +2 位作者 张晓刚 何秀云 董恩军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第21期48-51,共4页
目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳... 目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体。结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD。经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上。Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌。纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 MPT64 基因表达 诊断
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结核分支杆菌ESAT-6真核表达质粒的构建及蛋白表达的鉴定 被引量：8
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作者 蒋玉凤 钟森 +3 位作者 史小玲 王明勇 张建军 邓存良 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期65-68,47,共5页
目的　用 6kDa早期分泌性抗原靶蛋白 (ESAT - 6 )基因构建真核表达重组质粒pcDNA3 1(+) -ESAT - 6 ,并鉴定其在真核细胞 (COS - 7)中的蛋白表达。方法　以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板 ,用PCR对ESAT - 6基因进行扩增 ,将扩增的产物... 目的　用 6kDa早期分泌性抗原靶蛋白 (ESAT - 6 )基因构建真核表达重组质粒pcDNA3 1(+) -ESAT - 6 ,并鉴定其在真核细胞 (COS - 7)中的蛋白表达。方法　以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板 ,用PCR对ESAT - 6基因进行扩增 ,将扩增的产物连接于测序载体pUCm -T上 ,经测序反应确定无误后 ,再将PCR反应产物克隆于真核表达载体 pcDNA3 1(+)上。并用脂质体介导真核表达重组质粒 pcDNA3 1(+) -ESAT - 6转染真核细胞COS - 7,72h后 ,通过SDS -PAGE和免疫印迹鉴定ESAT - 6基因表达的蛋白。结果　用结核杆菌基因ESAT - 6构建重组真核表达质粒 pcDNA3 1(+) -ESAT-成功 ,通过SDS -PAGE证明重组质粒转化的细胞内有一分子量 6kDa的特异蛋白 ,免疫印迹证明该 6kDa蛋白能与抗ESAT - 6单克隆抗体反应。结论　结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT - 6真核表达重组质粒成功构建 ,该质粒转染的细胞能够产生、分泌结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT - 6。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 ESAT-6 真核表达质粒 蛋白表达 鉴定 早期分泌性抗原靶蛋白
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聚合酶链反应与分离培养技术检测结核分支杆菌诊断关节结核的对照研究 被引量：6
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作者 孙永生 温建民 +5 位作者 吕卫新 娄思权 焦长庚 杨素敏 徐海斌 段永状 《中国骨伤》 CAS 2009年第7期504-506,共3页
目的:研究聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在关节结核标本结核分支杆菌检测方面的作用,探讨PCR技术对关节结核诊断的临床价值。方法:自1993年6月至2001年8月,对95例(男55例,女40例;年龄2～75岁)关节结核标本分别应用PC... 目的:研究聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在关节结核标本结核分支杆菌检测方面的作用,探讨PCR技术对关节结核诊断的临床价值。方法:自1993年6月至2001年8月,对95例(男55例,女40例;年龄2～75岁)关节结核标本分别应用PCR技术和分离培养法盲法检测结核分支杆菌,计算两者检测阳性率,通过统计学处理进行比较。结果:95例关节结核标本结核分支杆菌检测中,PCR技术检测阳性78例,阴性17例,阳性率82%;分离培养法检测阳性15例,阴性80例,阳性率16%。PCR技术与分离培养法比较,χ2=67,P<0.001,两种方法对于关节结核标本结核分支杆菌的检出率比较差异有统计学意义。PCR扩增整个过程自动化控制,可在数小时内完成。结论:PCR技术检测关节结核标本具有快速、简便、敏感与特异等优点,明显优于分离培养,对关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断具有较重要的临床价值。 展开更多
关键词 结核 骨关节 聚合酶链反应 培养技术 结核分支杆菌 诊断
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三种结核分支杆菌耐药基因的检测方法 被引量：8
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作者 李洪敏 王巍 +6 位作者 李素梅 韩慧新 佟爱华 肖漓 张宾 雷红 刘军 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第6期317-319,共3页
目的　建立 3种结核分支杆菌耐药基因的检测方法 ,了解耐药基因突变和耐药水平的关系。方法　 10 8例临床痰标本分离株均做聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)和传统梯度药敏试验。结果　耐SM (rpsL)、RFP (rpoB)、INH (KatG)基... 目的　建立 3种结核分支杆菌耐药基因的检测方法 ,了解耐药基因突变和耐药水平的关系。方法　 10 8例临床痰标本分离株均做聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)和传统梯度药敏试验。结果　耐SM (rpsL)、RFP (rpoB)、INH (KatG)基因突变率分别为 78.5 % ,6 8.2 % ,70 .5 % ,其中 ,高耐SM ,RFP ,INH分离株分别为 86 .5 % ,89.3% ,84 .3% ;低耐分离株分别为 2 8.5 % ,16 .5 % ,7.1%。结论　结核分支杆菌耐药基因突变与耐药水平有密切联系 ,绝大多数结核分支杆菌耐药基因突变发生在高耐药株 ,少部分在低耐药株发生基因突变。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 检测方法 药物耐受性 聚合酶链反应 单链构象多态性 梯度药敏试验 抗结核药物
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110株结核分支杆菌对喹喏酮类药物的药敏试验分析 被引量：8
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作者 李丽 夏俊娣 +2 位作者 张文华 董志云 于维琴 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期146-148,共3页
目的　分析 110株结核分支杆菌对环丙沙星 (CPLX )、氧氟沙星 (OFLX)、左氧氟沙星(LVFX)、司帕沙星 (SPFX)的药敏试验结果。方法　采用 2倍稀释法 ,改良罗氏培养基进行药敏试验。结果　 4 9例初治病人耐药率 :CPLX 4 % ,OFLX 8% ,LVFX 2... 目的　分析 110株结核分支杆菌对环丙沙星 (CPLX )、氧氟沙星 (OFLX)、左氧氟沙星(LVFX)、司帕沙星 (SPFX)的药敏试验结果。方法　采用 2倍稀释法 ,改良罗氏培养基进行药敏试验。结果　 4 9例初治病人耐药率 :CPLX 4 % ,OFLX 8% ,LVFX 2 % ,SPFX 6 % ;5 2例耐多药菌株耐药率 :CPLX 5 2 % ,OFLX 4 4% ,LVFX 2 2 % ,SPFX 10 % ;110株结核分支杆菌总耐药率 :CPLX2 6 .2 % ,OFLX 2 4 .7% ,LVFX 10 .5 % ,SPFX 7.2 %。交叉耐药率 2 3.6 %。结论　 (1)初治结核病人 ,抗炎治疗尽量避免使用喹喏酮类药物 ;(2 )复治结核病人要选择合理治疗方案 ,避免假联合用药 ;(3)应用喹喏酮类药物 ,剂量要足 ,疗程要够 ;(4 )建议将喹喏酮类药列入结核分枝杆菌常规药敏试验中。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 喹喏酮类药物 药敏试验 分析 环丙沙星 氧氟沙星
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