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人细胞核自身抗原精子蛋白的重组表达及多克隆抗体制备 被引量：2
1
作者 王旻 石建莉 +3 位作者 程国艳 胡燕琴 刘春萌 徐晨 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第10期867-871,共5页
目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备。方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28 a(+)中。在E.coli... 目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备。方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28 a(+)中。在E.coliBL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达H is融合蛋白。样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体。结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白。ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体。结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体。 展开更多
关键词 人细胞核自身抗原精子蛋白 基因克隆 蛋白表达 多克隆抗体
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人细胞核自身抗原精子蛋白的研究进展 被引量：1
2
作者 牛晓兵 王增军 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2011年第4期382-383,共2页
人细胞核自身抗原精子蛋白(human nuclear autoantigenic sperm protein,hNASP)是一种组蛋白结合蛋白,存在于所有的分裂细胞中。NASP作为组蛋白的转运蛋白参与细胞周期的调节。人类NASP分为睾丸型和体细胞型两种,与组蛋白结合参与核小... 人细胞核自身抗原精子蛋白(human nuclear autoantigenic sperm protein,hNASP)是一种组蛋白结合蛋白,存在于所有的分裂细胞中。NASP作为组蛋白的转运蛋白参与细胞周期的调节。人类NASP分为睾丸型和体细胞型两种,与组蛋白结合参与核小体形成,其表达不充分将会使DNA复制停止以及细胞分裂的停止。本文就NASP的组成、活性调节、生理功能、在细胞周期调节中的作用以及其临床检测的应用进行综述。 展开更多
关键词 人细胞核自身抗原精子蛋白 组蛋白 细胞周期 自身抗体
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染锰鼠睾丸增殖细胞核抗原与热休克蛋白表达 被引量：14
3
作者 才秀莲 李兴升 +1 位作者 李季蓉 张先平 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1331-1333,共3页
目的研究锰对小鼠精子数量与睾丸增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将小鼠随机分为3个不同剂量MnCl2(7.5,15,30 mg/kg)组和对照组,分别于染锰,3,7,14,28,56 d计数精子数量,用免疫组化S-P法结合图象分析技术测... 目的研究锰对小鼠精子数量与睾丸增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将小鼠随机分为3个不同剂量MnCl2(7.5,15,30 mg/kg)组和对照组,分别于染锰,3,7,14,28,56 d计数精子数量,用免疫组化S-P法结合图象分析技术测定睾丸PCNA和HSP70表达。结果随染锰剂量增加和时间延长精子数量减少、睾丸PCNA表达降低。3个不同剂量MnCl2组精子计数于染锰28 d明显低于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.01),睾丸PCNA表达于染锰14,28,56 d比对照组明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),直线相关分析各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。睾丸HSP70表达,15,30 mg/kg组染锰56 d明显低于染锰28 d(P<0.01)。结论锰对小鼠生精功能的损伤呈一定的剂量-效应和时间-效应关系。各染锰组小鼠精子数量与睾丸PCNA表达呈正相关(r=0.794,P<0.01)。锰可诱导小鼠睾丸HSP70表达,染锰28 d达高峰。 展开更多
关键词 锰 精子数量 增殖细胞核抗原(PCNA) 热休克蛋白70(HSP70)
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十足目甲壳动物精子发生过程顶体形成和细胞核变化 被引量：3
4
作者 康现江 王所安 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期35-39,共5页
关键词 十足目 顶体 细胞核 碱性蛋白 精子发生
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大鼠精子细胞分化过程中核碱性蛋白的研究 被引量：1
5
作者 费仁仁 纪林 +3 位作者 陈晖 刘平 陈啸梅 章静波 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期268-268,共1页
大鼠精子细胞分化过程中核碱性蛋白的研究（中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０，中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所费仁仁，纪林，陈晖，刘平，陈啸梅，章静波）精子发生可分为精原细胞、精母细... 大鼠精子细胞分化过程中核碱性蛋白的研究（中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０，中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所费仁仁，纪林，陈晖，刘平，陈啸梅，章静波）精子发生可分为精原细胞、精母细胞及精子细胞阶段。在精子细胞分化过... 展开更多
关键词 精子细胞核 核碱性蛋白 精核蛋白 分化过程 大鼠睾丸 组蛋白 中国医学科学院 精母细胞 精原细胞 中国协和医科大学
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卵巢癌顺铂化疗耐药细胞中细胞核自身抗原精子蛋白的表达
6
作者 王慧香 谭岩 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期61-63,共3页
目的探讨细胞核自身抗原精子蛋白（NASP）在卵巢癌顺铂化疗耐药细胞中的表达。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质，应用差异凝胶电泳（DIGE），通过Decyder^TM分析软件获得差异表达蛋白质点，进行基质辅助激光解吸／电离飞... 目的探讨细胞核自身抗原精子蛋白（NASP）在卵巢癌顺铂化疗耐药细胞中的表达。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质，应用差异凝胶电泳（DIGE），通过Decyder^TM分析软件获得差异表达蛋白质点，进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）分析、鉴定。结果DIGE分析胶经BVA软件分析发现卵巢癌顺铂耐药细胞中1个表达明显降低的差异蛋白质点，此蛋白质点在耐药细胞中表达下调了21％（P〈0．01）。经质谱分析确认为细胞核自身抗原精子蛋白。结论NASP蛋白的鉴定为深入研究卵巢癌顺铂化疗耐药机制奠定了基础。 展开更多
关键词 卵巢癌 耐药 细胞核自身抗原精子蛋白 差异凝胶电泳
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小鼠NASP基因突变对脾脏淋巴细胞亚群的影响 被引量：3
7
作者 朱耀强 李跃文 +4 位作者 郑凯 徐晓琳 战倩 徐志伟 鞠吉雨 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期773-779,共7页
目的制备NASP基因突变小鼠,探讨NASP基因突变对小鼠脾脏淋巴细胞亚群的影响。方法通过ES打靶技术定点突变小鼠NASP基因,提取鼠尾DNA,通过PCR和DNA测序技术鉴定突变阳性小鼠B6-NASP^M,通过RT-PCR和Western blot检测NASP的mRNA和蛋白表达... 目的制备NASP基因突变小鼠,探讨NASP基因突变对小鼠脾脏淋巴细胞亚群的影响。方法通过ES打靶技术定点突变小鼠NASP基因,提取鼠尾DNA,通过PCR和DNA测序技术鉴定突变阳性小鼠B6-NASP^M,通过RT-PCR和Western blot检测NASP的mRNA和蛋白表达水平。取6月龄B6-WT小鼠和B6-NASP^M小鼠脾脏,计算脾脏指数并用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞亚群的比例和细胞周期。结果PCR和DNA测序检测显示,成功制备了B6-NASP^M小鼠;NASP基因突变后不影响NASP蛋白在皮肤、脾脏、胸腺的表达。NASP基因突变对小鼠脾脏指数无显著影响(P>0.05)。流式细胞术检测结果表明,B6-NASP^M小鼠与B6-WT小鼠相比,其脾脏CD3^+T细胞比例下降(P<0.01),CD19^+B细胞比例上升(P<0.01);CD3^+CD4^+T细胞比例下降(P<0.05),CD3^+CD8^+T细胞比例上升(P<0.01),CD4/CD8比值下降(P<0.01);NK细胞比例下降(P<0.05)。B6-NASP^M小鼠脾脏淋巴细胞S期细胞略高于B6-WT小鼠(P<0.05)。结论NASP基因突变不影响NASP蛋白的表达,但可以改变小鼠脾脏的淋巴细胞的比例,造成B细胞比例升高,T细胞比例降低,降低CD4/CD8比值,从而造成小鼠免疫功能紊乱。 展开更多
关键词 细胞核自身抗原性精子蛋白 基因突变 淋巴细胞亚群
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精子DNA损伤在生殖医学中的研究现状 被引量：11
8
作者 曾兰 李运星 叶飞 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2010年第1期60-62,共3页
关键词 精子DNA损伤 生殖医学 鱼精蛋白 人类精子 细胞核内 DNA双链 遗传信息 蛋白分子
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miR-29c和NASP在非小细胞肺癌细胞中的表达、对后者生物学行为影响及靶向关系预测验证
9
作者 王方炜 李超乾 《山东医药》 CAS 2021年第3期5-9,共5页
目的观察非小细胞肺癌细胞A549中微小RNA-29c(miR-29c)、细胞核自身抗原精子蛋白(NASP)的表达变化,探讨二者对非小细胞肺癌细胞A549增殖迁移侵袭和凋亡的影响,并预测、验证二者之间的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞A549与正常人肺... 目的观察非小细胞肺癌细胞A549中微小RNA-29c(miR-29c)、细胞核自身抗原精子蛋白(NASP)的表达变化,探讨二者对非小细胞肺癌细胞A549增殖迁移侵袭和凋亡的影响,并预测、验证二者之间的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞A549与正常人肺上皮细胞HBE,采用qRT-PCR法检测细胞中miR-29cmRNA、NASP mRNA,Western blotting法检测细胞中NASP蛋白。将非小细胞肺癌细胞A549分为miR-NC组(转染miR-29c阴性对照序列)、miR-29c组(转染miR-29c过表达序列)、si-NC组(转染NASP沉默阴性对照序列)、si-NASP组(转染NASP沉默序列)、miR-29c+NC组(miR-29c过表达序列和NASP过表达阴性对照序列共转染)和miR-29c+NASP组(miR-29c过表达和NASP过表达序列共转染)。采用CCK8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术测算各组细胞的凋亡率;Transwell法检测各组细胞迁移、侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测试验鉴定miR-29c与NASP之间的靶向关系。结果与正常肺上皮细胞HBE相比,非小细胞肺癌细胞A549中的miR-29c表达降低,NASP表达升高(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-29c组A549细胞增殖活性减弱,凋亡率升高,迁移、侵袭个数减少(P均<0.05)。与si-NC组相比,si-NASP组A549细胞增殖活性减弱,凋亡率升高,迁移、侵袭个数减少(P均<0.05)。与miR-29c+NC组相比,miR-29c+NASP组A549细胞增殖活性升高,凋亡率降低,迁移、侵袭个数增加(P均<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-29c与NASP之间存在靶向关系。结论非小细胞肺癌细胞A549中miR-29c呈高表达、NASP呈低表达。miR-29c抑制肺癌A549细胞增殖和迁移侵袭,并促进其凋亡,而NASP促进肺癌A549细胞的增殖和迁移侵袭,并抑制其凋亡,并且过表达NASP可逆转miR-29c对A549细胞增殖和迁移、侵袭能力的抑制作用和对其凋亡的诱导作用。miR-29c与NASP之间存在靶向关系。 展开更多
关键词 微小RNA-29c 细胞核自身抗原精子蛋白 非小细胞肺癌 细胞生物学行为 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡 靶向关系
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