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单纯疱疹病毒I型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究 被引量：6
1
作者 朱明昭 刘宏伟 +3 位作者 刘晓娟 韩晔华 杨宝玲 宋国兴 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期67-70,共4页
目的构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白Ｄ重组质粒ＤＮＡ疫苗，初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果，为研制ＨＳＶ－１新型疫苗奠定基础。方法用ＰＣＲ的方法从ＨＳＶ－１病毒基因组中扩增糖蛋白Ｄ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　... 目的构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白Ｄ重组质粒ＤＮＡ疫苗，初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果，为研制ＨＳＶ－１新型疫苗奠定基础。方法用ＰＣＲ的方法从ＨＳＶ－１病毒基因组中扩增糖蛋白Ｄ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄ，ｇＤ）基因，利用基因重组技术构建重组质粒；将重组质粒体外转染真核细胞ＣＯＳ－７，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测表达产物；于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后腿胫前肌注射免疫，０、２周各免疫１次，１００μｇ／次。初次免疫后０、２、４、６周眼眶采血，ＥＬＩＳＡ间接法检测抗体。结果重组质粒酶切出相应大小片段，经测序证实为ＨＳＶ－１ｇＤ序列。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后，产生特异性抗体，抗体滴度１∶２０００。结论ＨＳＶ－１ｇＤ重组质粒ＤＮＡ有可能作为ＨＳＶ－１的ＤＮＡ疫苗，用于防治ＨＳＶ－１感染及其相关疾病。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 角膜炎 dNA疫苗 糖蛋白d 构建
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单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察 被引量：7
2
作者 李建国 袁育康 +4 位作者 范桂香 王军阳 任会勋 冯捷 马可为 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期304-307,共4页
目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELIS... 目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测用 pLy D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果　经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗 pLy D的构建 ;实验小鼠产生了对HSV 1特异性的抗体 (抗体滴度 :ELISA法 1∶2 0 3,中和试验法 1∶37) ,并经受了HSV 1病毒的攻击 (存活率 :70 % )。结论　成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy D ,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应 ,并具有良好的保护作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白d 聚合酶链式反应 PCR 核酸疫苗 免疫功能
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热休克蛋白70-Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白DDNA疫苗的构建及表达 被引量：6
3
作者 樊建勇 杨慧兰 +2 位作者 关蕾 王颖 仕瑶慧 《医学研究生学报》 CAS 2007年第4期349-352,I0001,共5页
目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白D(gD),以热休克蛋白70(Hsp70)为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法:将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-... 目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白D(gD),以热休克蛋白70(Hsp70)为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法:将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-Hsp70-gD转染COS-7细胞,用免疫组化、SDS-PAGE和W est-ern b lotting方法鉴定重组质粒的表达情况。结果:测序证实重组质粒序列正确,表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为92 000处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。免疫组化方法和W estern b lotting也证明,构建的重组质粒能在COS-7细胞内表达。pVAX-Hsp70-HSV2gD组核酸疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组(P<0.05)。结论:成功构建了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,为其进一步的研究打下了基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白70 糖蛋白d 单纯疱疹病毒 dNA疫苗
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单纯疱疹病毒I型糖蛋白D酵母表达载体的构建 被引量：3
4
作者 王战勇 王志玉 +3 位作者 温红玲 宋艳艳 王桂亭 许洪芝 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2003年第6期611-614,共4页
目的:构建含有单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础。方法:应用PCR方法从HSV-I基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,... 目的:构建含有单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础。方法:应用PCR方法从HSV-I基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD。结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%。结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒I型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白d 克隆 基因 酵母菌
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我国单纯疱疹病毒Ⅰ型168株糖蛋白D基因的克隆及其在痘苗病毒天坛株中的表达 被引量：3
5
作者 杨雄虎 尚大庄 +4 位作者 杨新科 段淑敏 候云德 阮力 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期220-226,共7页
将我国单纯疮疹病毒Ⅰ型１６８株基因组ＤＮＡ中扩增出的糖蛋白Ｄ基因，插入痘苗病毒ｐ７．５启动子下游，使其在痘苗病毒天坛株表达。免疫荧光分析表明，产生的重组病毒糖蛋白Ｄ能被运到被重组病毒感染的１４３细胞表面表达，表达的产... 将我国单纯疮疹病毒Ⅰ型１６８株基因组ＤＮＡ中扩增出的糖蛋白Ｄ基因，插入痘苗病毒ｐ７．５启动子下游，使其在痘苗病毒天坛株表达。免疫荧光分析表明，产生的重组病毒糖蛋白Ｄ能被运到被重组病毒感染的１４３细胞表面表达，表达的产物经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ鉴定为分子量约５０ｋＤ的多肽。Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ证明重组病毒基因组中整合有ＨＳＶ－１１６８株糖蛋白基因片段，重组病毒免疫家兔后，产生了高滴度的ＨＳＶ特异性中和抗体。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 I型 糖蛋白d 痘苗病毒 基因克隆
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HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析 被引量：2
6
作者 刘微 罗晓华 +7 位作者 陈文婧 董媛 朱洁 郭健 姜勇 张磊 孟桂先 王会岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期720-724,共5页
目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4... 目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒(P4),通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2组),以PBS作为阴性对照(PBS组),ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果:PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×109 pfu·mL-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37 000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。 展开更多
关键词 生殖器疱疹 疱疹病毒2型 人 糖蛋白d 昆虫-杆状病毒表达系统
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Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达 被引量：3
7
作者 姜德玉 刘坤 +4 位作者 赵晓燕 张伟 李君丽 王希良 于三科 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第6期58-61,共4页
以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化E.coilDH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf... 以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化E.coilDH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达HSV-2 gD蛋白,为下一步的工作奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅱ型单纯疱疹病毒 糖蛋白d Bac-to-bac表达系统
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疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗的初步免疫评价 被引量：3
8
作者 杨慧兰 王捷 +2 位作者 吴锦银 郝飞 刘荣卿 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期363-364,共2页
将疱疹病毒II型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平。将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次。ELISA检测豚... 将疱疹病毒II型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平。将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次。ELISA检测豚鼠血清中gD抗体的水平;MTT法评价脾T淋巴细胞增殖反应。pcDNA-gD免疫组全部豚鼠均诱发抗HSV-2抗体(0.283±0.075);pcDNA3质粒组(0.062±0.015)和生理盐水组(0.057±0.016)的抗HSV-2抗体为阴性。pcDNA-gD免疫组豚鼠脾淋巴细胞增殖反应(2.08±0.18)程度明显高于对照组(P<0.01)。提示疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗可在豚鼠体内诱发体液免疫和细胞免疫反应。 展开更多
关键词 疱疹病毒Ⅱ型 糖蛋白d 多聚核苷酸疫苗 豚鼠 病毒感染性疾病
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单纯疱疹病毒糖蛋白D的表达及免疫学鉴定 被引量：1
9
作者 王志玉 王战勇 +3 位作者 温红玲 宋绍霞 宋艳艳 许洪芝 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期175-178,共4页
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是TORCH综合征的病原体之一.新生儿可通过宫内、产道和出生后等多种途径感染,大部分患儿呈现症状,如皮炎、角膜炎、口唇疱疹,也可发生涉及多个器官的播散性感染,严重者出现疱疹性脑膜炎,并常导... 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是TORCH综合征的病原体之一.新生儿可通过宫内、产道和出生后等多种途径感染,大部分患儿呈现症状,如皮炎、角膜炎、口唇疱疹,也可发生涉及多个器官的播散性感染,严重者出现疱疹性脑膜炎,并常导致婴幼儿死亡.目前尚无全身用的特效药物和有效的防范措施.HSV包膜糖蛋白D(glycoprotein D,gD)是极为保守的免疫原性蛋白,在体内可诱导高滴度的中和抗体,因此gD基因成为近些年来诊断研究的靶基因.本文尝试将gD蛋白在酵母菌中表达,并分析其抗原性,为建立快速易行的重组抗原诊断试剂盒奠定基础.此外,利用该表达系统表达的HSV gD蛋白,可为HSV基因工程重组疫苗的研制提供依据,对优生优育、提高人口出生质量具有重要的理论及实际意义. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 HSV 糖蛋白d 表达 免疫学 毕赤酵母菌
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全长单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D毕赤酵母表达载体的构建 被引量：2
10
作者 刘仲荣 曹春来 +2 位作者 杨慧兰 郭勇 王捷 《实用医学杂志》 CAS 2005年第11期1117-1119,共3页
目的:构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D(gD)的毕赤酵母表达载体,为进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗奠定基础。方法:PCR从HSV-2基因组中扩增gD2基因,再用PCR的方法在基因两端加入两个限制性内切酶切位点XhoⅠ和XbaⅠ;PCR... 目的:构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D(gD)的毕赤酵母表达载体,为进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗奠定基础。方法:PCR从HSV-2基因组中扩增gD2基因,再用PCR的方法在基因两端加入两个限制性内切酶切位点XhoⅠ和XbaⅠ;PCR产物经过双酶切后按照正确的读码框顺序克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中;转化到大肠杆菌感受态细胞TOP10F'中,抗生素得到筛选转化子。结果:核酸序列测定PCR扩增的gD2片段与GeneBank中HSV-2G株gDDNA碱基同源性达98.4%,氨基酸同源性达95.7%。在实验过程中构建了四个表达载体,经过双酶切后琼脂糖电泳鉴定正确。结论:构建了gD2毕赤酵母表达载体四个,其中两个含有HSV-2gB的CTL表位序列。 展开更多
关键词 全长单纯疱疹病毒Ⅱ型 糖蛋白d 毕赤酵母 表达载体
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以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D的重组活疫苗的建立 被引量：1
11
作者 崔虹 尚大庄 +4 位作者 杨天忠 杨雄虎 侯云德 阮力 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期193-201,共9页
从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１－１６８株）病毒基因组中，分离出含有糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的１．２ｋｂ片段，插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ区的质粒ｐＪＳＢ１１７５Ｐ７．５ｋ启动子下游，转染无白血病鸡胚原代细胞... 从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１－１６８株）病毒基因组中，分离出含有糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的１．２ｋｂ片段，插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ区的质粒ｐＪＳＢ１１７５Ｐ７．５ｋ启动子下游，转染无白血病鸡胚原代细胞，获得带有ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ糖蛋白抗原，能与特异性单克隆抗体反应。在感染细胞中表达的膜抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，表达分子量为５４ｋＤ糖蛋白。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了重组病毒ＤＮＡ中特异的ｇＤ基因，对作为活疫苗的重组痘苗病毒株进行了一些微生物学活性、免疫原性和毒力等方面的研究。 展开更多
关键词 痘苗病毒载体 疱疹病毒 病毒疫苗 糖蛋白d 研制
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白细胞介素-2基因佐剂对单纯疱疹病毒糖蛋白D DNA疫苗的免疫增强作用 被引量：2
12
作者 李伟荣 王得新 +3 位作者 杨琪 王健伟 王佳伟 冯子敬 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2006年第2期98-101,共4页
目的探讨白细胞介素-2(IL-2)基因佐剂对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)糖蛋白D(gD)DNA疫苗的免疫调节作用。方法将表达HSV-ⅠgD基因的DNA疫苗质粒IRES-gD以及HSV-ⅠgD与IL-2基因共表达的重组质粒IRES-gD-IL-2分别注入BALB/c鼠股四头肌,检测... 目的探讨白细胞介素-2(IL-2)基因佐剂对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)糖蛋白D(gD)DNA疫苗的免疫调节作用。方法将表达HSV-ⅠgD基因的DNA疫苗质粒IRES-gD以及HSV-ⅠgD与IL-2基因共表达的重组质粒IRES-gD-IL-2分别注入BALB/c鼠股四头肌,检测特异性抗体和中和抗体的产生情况,并于第3次注射后14 d用滴度100组织培养半数感染量(TCID50)的HSV-1病毒感染小鼠,观察小鼠的生存情况。结果IRES-gD组和IRES-gD-IL-2组均可刺激小鼠产生抗HSV-ⅠgD的特异性抗体和中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高,IRES-gD-IL-2组小鼠产生的抗体及中和抗体滴度明显高于IRES-gD组,两组小鼠的生存率差异无统计学意义。结论IL-2基因佐剂可促进HSV-ⅠgD DNA疫苗诱导抗体的产生,并具有免疫增强作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白d 白细胞介素-2 dNA疫苗
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单纯疱疹病毒1型糖蛋白D主要抗原表位区的表达、纯化及鉴定 被引量：2
13
作者 刘红 刘宾 +1 位作者 和骁 赵晓涛 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第3期350-355,共6页
目的原核表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原表位区,纯化融合表达蛋白并对其进行鉴定。方法用Lasergene7.0中Protean软件对HSV-1 gD氨基酸序列进行抗原表位预测和分析,筛选出gD主要抗原表位区(gD MED),人工合成该区域cDNA序... 目的原核表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原表位区,纯化融合表达蛋白并对其进行鉴定。方法用Lasergene7.0中Protean软件对HSV-1 gD氨基酸序列进行抗原表位预测和分析,筛选出gD主要抗原表位区(gD MED),人工合成该区域cDNA序列,构建原核表达载体pET-GST-gD MED;将重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过GST.Bind纯化试剂盒对gDMED融合蛋白进行纯化;Western blot对gD MED融合蛋白的免疫活性进行分析。结果 HSV-1 gD在266～394区域富含抗原表位,人工合成了该区域的cDNA序列,并成功构建了原核表达载体pET-GST-gD MED;gD MED融合蛋白主要以可溶形式表达,分子质量约为45 ku,纯度能达95%;Western blot结果显示,gD MED融合蛋白能与感染HSV-1患者的血清发生特异结合。结论成功表达和纯化了具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融合蛋白,为HSV免疫诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制提供了依据。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型 糖蛋白d 主要抗原表位区 原核表达
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HSV-1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免疫效果观察 被引量：4
14
作者 余颖 马文煜 杨乔欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期308-310,共3页
目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)... 目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)。所得重组质粒pcDNA gD以电穿孔法转染CHO细胞 ,并以荧光染色法鉴定表达效果。用 pcDNA gD免疫小鼠 ,ELISA法检测基因免疫的应答效果。结果成功地构建了可在真核细胞中有效表达的HSV 1gD真核表达载体 ,用其直接免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答。结论 gD的真核表达载体有可能作为HSV 1的基因疫苗 ,为进一步研究基于 gD的表位生物学和表位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 HSV-1 糖蛋白d 真核表达 基因免疫 载体构建
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猿猴疱疹病毒B糖蛋白D的表达及抗原性的探讨 被引量：2
15
作者 肖镜 付瑞 贺争鸣 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第6期436-440,共5页
目的表达猴B病毒糖蛋白D(BVgD)并对其抗原性进行初步研究。方法应用体外原核表达BVgD,继而进行Ni离子亲和层析纯化。采用Western blotting对蛋白抗原性进行分析,评估其抗原潜力。结果完成了对BVgD的小量表达和纯化。Western blotting结... 目的表达猴B病毒糖蛋白D(BVgD)并对其抗原性进行初步研究。方法应用体外原核表达BVgD,继而进行Ni离子亲和层析纯化。采用Western blotting对蛋白抗原性进行分析,评估其抗原潜力。结果完成了对BVgD的小量表达和纯化。Western blotting结果表明表达出的重组蛋白BVgD具有特异性结合猴B病毒抗体的能力。结论BVgD重组蛋白具有良好的抗原性,与HSV-1抗体无交叉反应。具有进一步开发的潜力,也为BVgD免疫原性等方面的进一步研究提供了条件。 展开更多
关键词 疱疹病毒1型 猕猴 猴B病毒糖蛋白d(BVgd) B病毒抗体 ELISA
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单纯疱疹病毒I型糖蛋白D在酵母中的表达 被引量：2
16
作者 李智华 徐维明 +3 位作者 姬秋彦 龙海亭 彭正华 李健峰 《中国病毒学》 CSCD 2006年第1期6-10,共5页
从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1～314aa的基因gDt,将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gD蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达... 从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1～314aa的基因gDt,将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gD蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到250mg/L,该目的蛋白可被gD单抗(1-I-9)特异性识别。表达产物经离子交换、金属螯合、分子筛柱层析纯化后得到纯度较高的重组蛋白。重组gD蛋白免疫BALB/c小鼠可诱生一定水平的特异性抗体,表明该蛋白具有较好的免疫原性,能够诱导小鼠产生体液免疫应答。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 包膜糖蛋白d 毕赤酵母表达 纯化
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Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价 被引量：1
17
作者 姜德玉 刘坤 +4 位作者 张伟 周朋 李君丽 王希良 于三科 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期494-497,共4页
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体... 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅱ型单纯疱疹病毒 糖蛋白d Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 免疫原性 中和活性
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 被引量：4
18
作者 段玉友 崔治中 殷震 《中国病毒学》 CSCD 1996年第2期176-182,共7页
用ＰＣＲ技术，从ＧＡ株马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染的成纤维细胞（ＧＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因片段的约１３００ｂｐ编码序列，将该ｐｃＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和Ｋｐｎｌ位点克隆到ｐＵＣ１８质... 用ＰＣＲ技术，从ＧＡ株马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染的成纤维细胞（ＧＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因片段的约１３００ｂｐ编码序列，将该ｐｃＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和Ｋｐｎｌ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中，在以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记的ｇＤＰＣＲ产物作为探针，进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆，再根据酶切分析筛选到含ＭＤＶｇＤ基因的重组质粒ｐ１８ＭｇＤ。将ｐ１８ＭｇＤ质粒ＤＮＡ用ｄｉｇ标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ－Ａ克隆中的Ａ片段ＤＮＡ。酶切位点分析表明，该ｇＤ克隆也和已发表的ＭＤＶ的ＲＢＩＢ株ｇＤ一样，不含有ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ｐｖｕⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是ＭＤＶｇＤ克隆。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 糖蛋白d 聚合酶链式反应
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马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D基因的分离克隆、定序及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1
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作者 段玉友 崔治中 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期544-550,共7页
用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进... 用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ－Ａ克隆中的Ａ片段ＤＮＡ（含ｇＤ全基因）。重组质粒序列分析结果表明，ＭＤＶＧＡ株ｇＤ与ＭＤＶＲＢ１Ｂ株ｇＤ在ＤＮＡ和氨基酸序列组成上略显差异。将ｇＤ基因从重组的ｐＵＣ１８质粒中切出，插入表达性质粒ｐＥＺＺ１８载体中的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的信号肽基因的下游。对含ｇＤ重组ｐＥＺＺ１８质粒插入序列进行部分测序，结果表明，ｇＤ阅读框与ｐＥＺＺ１８中ＳＰＡ信号肽的阅读框是吻合的。ｇＤ重组ｐＥＺＺ１８质粒在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达ｇＤ，即ｇＤ与ＳＰＡ的信号肽（１４０００）相连。根据ＳＰＡ的信号肽可与ＩｇＧ结合的特性，用兔ＩｇＧ结合的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ制备的亲和凝胶柱来纯化表达的ｇＤ融合蛋白。纯化的表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定后，? 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 糖蛋白d 聚合酶链式反应 克隆
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单纯疱疹病毒2型全长糖蛋白D抗原的原核表达及抗原性分析 被引量：1
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作者 周翠 曹春来 +1 位作者 樊建勇 杨慧兰 《实用医学杂志》 CAS 2008年第10期1668-1670,共3页
目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)全长糖蛋白D(gD)基因原核表达质粒,研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达,并鉴定重组蛋白的gD抗原性。方法:提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,并转化大肠杆菌BL21。PCR、双酶... 目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)全长糖蛋白D(gD)基因原核表达质粒,研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达,并鉴定重组蛋白的gD抗原性。方法:提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,并转化大肠杆菌BL21。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白GST-gD,并进行免疫学鉴定。结果:获得了gDDNA。测序鉴定表明,该序列与Gen Bank中的序列一致,gD基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD经IPTG诱导后能在大肠杆菌中高效表达,Western Blotting证实,该蛋白具有天然gD抗原性。结论:成功构建了融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD,在大肠杆菌中获得了有效表达,并证实融合蛋白具有gD免疫原性。为进一步研究gD蛋白的免疫学特性,制备gD亚单位疫苗和单克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒属 糖蛋白d 重组融合蛋白 抗原性
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