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弓形虫p30基因在真核系统中的表达 被引量：3
1
作者 曾方银 刘国章 +2 位作者 陈晓光 李文盛 王珣章 《第一军医大学学报》 CSCD 1998年第2期91-95,共5页
采用聚乙二醇（PEG）沉淀法纯化克隆刚地弓形虫（Toxplasmagondii）p30基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3－p30DNA；将pSXIVVI＋X3－p30DNA与粉纹夜蛾核型多角体缺陷型病毒TnNPV－SVI－GDNA共转染草地夜蛾（Sfg）细胞，构建出既能形成多角... 采用聚乙二醇（PEG）沉淀法纯化克隆刚地弓形虫（Toxplasmagondii）p30基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3－p30DNA；将pSXIVVI＋X3－p30DNA与粉纹夜蛾核型多角体缺陷型病毒TnNPV－SVI－GDNA共转染草地夜蛾（Sfg）细胞，构建出既能形成多角体又能表达外源基因的重组病毒TnNPV－p30。经空斑纯化挑选出6株单克隆重组病毒，感染细胞裂解液在相对分子质量约为34000～35000位置出现一条表达带；其含量占细胞总蛋白的5.13％～5．62％，株间差异不明显；用抗弓形虫多克隆抗血清进行Western－Blot呈一特异反应条带。感染后72h蛋白表达量最高，可达7．18％；96小时次之，为5．91％。 展开更多
关键词 P30基因 弓形体 真核系统 基因表达
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慢病毒介导的猫四连接素蛋白过表达系统的构建
2
作者 杨泽昊 胡佳艺 +2 位作者 赵源杰 刘萌萌 陈宇 《热带生物学报》 2025年第1期58-63,共6页
四连接素(Tetranectin)是一种具有结合钙离子和肝素能力的纤溶酶原结合蛋白。通过构建稳定表达猫四连接素蛋白的细胞系,为后续探究其与猫心血管疾病的关系提供实验材料。本研究利用分子克隆技术构建过表达猫四连接素基因的重组慢病毒质... 四连接素(Tetranectin)是一种具有结合钙离子和肝素能力的纤溶酶原结合蛋白。通过构建稳定表达猫四连接素蛋白的细胞系,为后续探究其与猫心血管疾病的关系提供实验材料。本研究利用分子克隆技术构建过表达猫四连接素基因的重组慢病毒质粒,并通过慢病毒感染获得过表达猫四连接素蛋白的HEK293T细胞系,蛋白免疫印迹法验证蛋白表达。慢病毒质粒测序结果表明,实测猫四连接素基因CDS序列与NCBI数据库预测序列一致。经嘌呤霉素筛选过表达细胞系构建成功,猫四连接素重组蛋白以可溶形式分泌于细胞上清中,分子量约为25kDa并带有flag标签。 展开更多
关键词 猫四连接素蛋白 CLEC3B 慢病毒包装系统 真核表达系统
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口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达 被引量：1
3
作者 张洪英 郭瀛军 +2 位作者 陈祖欢 林懿 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1195-1197,共3页
目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃... 目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃培养2h后用IPTG诱导5h,融合蛋白在2×YT培养液中得到高效表达;全菌中相应蛋白条带与阳性抗体呈阳性反应,阳性反应强弱基本与表位特性及数量有关;得到4个P815细胞阳性克隆,培养上清、细胞膜和细胞质的抗原均为阳性,其中培养上清中浓度较低,细胞膜和细胞质中浓度较高。结论:CAD的融合表位基因在原核和真核系统均得到正确表达;CAD对于表位研究的设计很有帮助。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 表位 基因表达 真核系统 原核系统 计算机辅助设计
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HCV E2区基因在真核表达系统中的表达 被引量：1
4
作者 张东伟 梁布锋 +1 位作者 祁自柏 凌世淦 《微生物学免疫学进展》 2001年第3期10-13,共4页
以原核表达载体 pET E2为模板 ,用PCR的方法重新扩增出带有适于真核表达载体多克隆位点的E2基因。PCR产物经纯化并双酶切后与相同处理的真核表达载体pSecTag2 /Hygro连接并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,重组表达载体在大量扩增并纯化... 以原核表达载体 pET E2为模板 ,用PCR的方法重新扩增出带有适于真核表达载体多克隆位点的E2基因。PCR产物经纯化并双酶切后与相同处理的真核表达载体pSecTag2 /Hygro连接并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,重组表达载体在大量扩增并纯化后再转染COS7细胞。收集的培养上清经过Ni 柱纯化 ,用ELISA进行血清检测显示 :6份HCV阳性血清中有 4份检出有E2抗体 ,而 5份HCV阴性血清中也有一份检出有E2抗体。 展开更多
关键词 HCVE2 真核系统 基因表达 丙肝病毒
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柯萨奇病毒B组3型中国分离株VP1基因真核表达系统的克隆 被引量：3
5
作者 田野 钟照华 +9 位作者 赵铁强 黄建林 安毅 唐伟 沈景霞 钟学宽 孟繁超 黄永麟 鲁凤民 叶鸿瑁 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期169-172,共4页
目的探讨构建柯萨奇病毒Ｂ组３型（ＣＶＢ３）基因疫苗的可行性。方法应用逆转录ＰＣＲ技术扩增ＣＶＢ３中国分离株ＶＰ１基因，通过ＴＡ克隆法构建ｐＣＲ２．１－ＣＶＢ３ＶＰ１，将ＣＶＢ３ＶＰ１亚克隆至真核表达载体ｐＣＥＰ４，构... 目的探讨构建柯萨奇病毒Ｂ组３型（ＣＶＢ３）基因疫苗的可行性。方法应用逆转录ＰＣＲ技术扩增ＣＶＢ３中国分离株ＶＰ１基因，通过ＴＡ克隆法构建ｐＣＲ２．１－ＣＶＢ３ＶＰ１，将ＣＶＢ３ＶＰ１亚克隆至真核表达载体ｐＣＥＰ４，构建真核表达系统ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１，并进行酶切和测序鉴定。结果发现ＣＶＢ３的中国分离株与Ｎａｎｃｙ株的ＶＰ１基因基本一致，均编码２９３个氨基酸，其中有５９处核苷酸存在变异，但仅改变了１０处氨基酸编码，证实克隆的片段为ＣＶＢ３ＶＰ１基因，表达载体为ｐＣＥＰ４。结论实验成功地构建了ＣＶＢ３中国分离株的真核表达系统ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１。 展开更多
关键词 VP1基因 真核表达系统 柯萨奇B病毒 克隆
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真核表达系统的研究进展 被引量：14
6
作者 高云 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期292-294,298,共4页
真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系 ,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质。基因工程中常用的真核表达系统有 :酵母表达系统、昆虫细胞表达系统及哺乳动物细胞表达系统。甲醇酵母主要利用醇氧化酶的基因启动子在甲醇诱导下表达外源蛋... 真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系 ,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质。基因工程中常用的真核表达系统有 :酵母表达系统、昆虫细胞表达系统及哺乳动物细胞表达系统。甲醇酵母主要利用醇氧化酶的基因启动子在甲醇诱导下表达外源蛋白 ,而三磷酸甘油脱氢酶启动不需甲醇诱导 ,可缩短到达峰值表达的时间。杆状病毒是昆虫细胞表达系统中最常用的表达载体 ,利用转座原理构建重组杆状病毒是一种有效的构建重组体的方法 ;杆状病毒 S2 系统是最近构建的一种不裂解宿主细胞的新型昆虫细胞表达系统。哺乳动物细胞表达系统中 ,腺病毒是常用的表达载体 ,通过细菌内同源重组和Cre/loxp系统构建重组体 ,可提高重组效率 ;利用杆状病毒将外源基因导入哺乳动物细胞 ,不会引起病毒基因的表达 ;四环素诱导表达系统是目前应用最广泛的哺乳动物细胞诱导表达系统 ,该系统具有严密、高效。 展开更多
关键词 真核表达系统 酵母 昆虫细胞 哺乳动物细胞
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慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立 被引量：1
7
作者 张黎 彭海燕 +6 位作者 周明浩 余慧燕 曾晓燕 祁贤 崔仑标 焦永军 史智扬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期630-634,共5页
目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD1... 目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒载体 真核表达系统
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口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立 被引量：1
8
作者 崔丽瑾 王兴龙 +4 位作者 段小宇 刘铠 党源 郎需龙 李晓艳 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第5期51-54,共4页
应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口... 应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 2B基因 序列分析 SIRNA 真核表达系统
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葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
9
作者 孙爱华 邵浙新 +2 位作者 阮萍 毛亚飞 严杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期303-306,310,共5页
目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA... 目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0 5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果　可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论　我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 基因 真核表达系统 构建 重组蛋白 鉴定
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mCLCA3增强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及功能分析
10
作者 吴庆田 侯霞 +4 位作者 任继秋 崔刚 李丽秋 杨景云 马淑霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期236-238,共3页
目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar ... 目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar Optima荧光仪对mCLCA3的氯离子通道功能进行测定分析。结果构建真核表达模型能够稳定高表达mCLCA3及增强型绿色荧光蛋白,适用于离子通道功能分析。结论成功构建了mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,并通过功能分析证明mCLCA3可能不是氯离子通道。 展开更多
关键词 mCLCA3氯离子通道 真核表达系统 增强型绿色荧光蛋白
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葡萄球菌肠毒素B基因真核表达系统的构建及目的蛋白的鉴定
11
作者 孙爱华 毛亚飞 严杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期341-343,379,共4页
目的　克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPI... 目的　克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPIC9K连接。将重组真核载体pPIC9K SEB转化入P .pastorisGS115株 ,经PCR筛选并鉴定pPIC9K SEB P .pastorisGS115。在 0 5 % (v v)甲醇诱导下 ,采用SDS PAGE检测重组SEB(rSEB)的表达 ,并对rSEB的N端氨基酸序列和诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1α和TNFα的作用进行了检测。结果　所克隆的SEB基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。表达的SEB在SDS PAGE图谱的位置与预期相符。rSEB氨基末端氨基酸序列与预期完全相符。rSEB与SEB商品有相似的促人脐静脉内皮细胞EVC 30 4分泌IL 1α和TNFα的活性。结论　已成功地构建了SEB的真核表达系统 ,为进一步分析SEB分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 基因 真核表达系统 蛋白 突变体
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β-NGF在真核细胞蛋白表达系统中的表达及活性鉴定
12
作者 李贤慧 王桂云 +1 位作者 王育强 郭新民 《牡丹江医学院学报》 2002年第1期7-10,共4页
目的 :得到较高表达 ,且表达产物具有良好生物学活性的神经生长因子。方法 :将神经胶质源 β -NGF基因克隆于DNA转移载体pBacPAK8中 ,获得重组DNA转移载体pBacPAK -NGF ,与线性化Bm -BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染Bm -N细胞 ,经过体... 目的 :得到较高表达 ,且表达产物具有良好生物学活性的神经生长因子。方法 :将神经胶质源 β -NGF基因克隆于DNA转移载体pBacPAK8中 ,获得重组DNA转移载体pBacPAK -NGF ,与线性化Bm -BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染Bm -N细胞 ,经过体内重组 ,筛选到重组病毒。用重组病毒感染家蚕幼虫 ,经SDS-PAGE检测及利用PC12细胞进行NGF生物活力测定。结果 :感染重组病毒BmNPV -NGF5d的家蚕血淋巴有一条与天然NGF单体分子易相近的蛋白组分 ,且有类似于小鼠 2 .5gNGF的活性。结论 :神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达 。 展开更多
关键词 真核表达系统 神经生长因子 生物活性 β-NGF基因 神经胶质源 基因表达 基因活性 中枢神经系统疾病
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具有重要应用价值的真核表达系统 被引量：5
13
作者 陈峰 朱祯 《生物工程进展》 CSCD 1998年第1期31-31,共1页
基于Ｔ７ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７强启动子（１０）间的特异识别而建立起来的偶联表达系统在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果。最近，该系统在酵母、昆虫、哺乳动物细胞和植物细胞中陆续实现了高效表达。Ｔ７ＲＮＡ聚合酶－１０启动子... 基于Ｔ７ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７强启动子（１０）间的特异识别而建立起来的偶联表达系统在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果。最近，该系统在酵母、昆虫、哺乳动物细胞和植物细胞中陆续实现了高效表达。Ｔ７ＲＮＡ聚合酶－１０启动子偶联表达系统的相对独立性和高效性，不仅预示着该系统可以在真核基因工程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 真核表达系统 T7RNA 聚合酶 基因工程
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1型糖尿病自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2真核表达系统的构建和鉴定 被引量：1
14
作者 刘煜 朱虎 +5 位作者 曾丽玲 陈家伟 杨金奎 钟耀华 王若宁 陈小章 《中华糖尿病杂志（1006-6187）》 CSCD 北大核心 2005年第3期230-233,共4页
目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光... 目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光显微镜下鉴定其表达,利用共培养体系检测IA2刺激淋巴细胞增殖率。结果双酶切结果表明成功构建了重组pEGFP/IA2真核表达系统,免疫印迹法证实可在RIN5F细胞内高表达IA2。并且该表达的IA2可显著促进NOD小鼠淋巴细胞增殖反应(P<0.05)。结论成功构建的IA2真核表达系统对于T1DM基因疫苗预防策略和对于IA2生理功能的研究都具有重要的意义。 展开更多
关键词 1型糖尿病 自身抗原 胰岛素瘤相关蛋白2 真核表达系统 IA-2 疫莳
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真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果 被引量：1
15
作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 王缨 储以微 徐薇 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,15,共6页
目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核... 目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P<0·05)。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P<0·01)。结论真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。 展开更多
关键词 真核化的原核表达系统 基因免疫 HBV
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几种基因表达的真核载体系统与新型口蹄疫疫苗 被引量：1
16
作者 渠春菁 潘丽 张永光 《畜牧兽医科技信息》 2002年第3期17-19,共3页
1、口蹄疫及其防治现状:口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。其爆发流行时,由于动物生产力下降及贸易限制会带来极大的经济损失。FMD在世界上流行广且持久。在所有易感动物中使用灭活... 1、口蹄疫及其防治现状:口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。其爆发流行时,由于动物生产力下降及贸易限制会带来极大的经济损失。FMD在世界上流行广且持久。在所有易感动物中使用灭活病毒作为免疫原构成了控制及消除本病的基础,然而,在流行地区用完整病毒粒子灭活苗控制FMD所引起的免疫保护具有血清型局限性,保护期短,因此需要多次重复免疫。 展开更多
关键词 基因表达 真核载体系统 新型口蹄疫疫苗
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口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其SiRNA真核表达系统的建立
17
《中国畜牧兽医文摘》 2011年第1期127-127,共1页
应用RT—PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因，将其克隆到MD18-T载体中，测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析，筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求，合成shRNA表达模板，连接到含有U6启动子的真核表达载体中，建立了... 应用RT—PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因，将其克隆到MD18-T载体中，测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析，筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求，合成shRNA表达模板，连接到含有U6启动子的真核表达载体中，建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统，为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 真核表达系统 SIRNA 2B基因 生物信息 真核表达载体 SIRNA 学分
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达 被引量：3
18
作者 林绮萍 吴少庭 +8 位作者 翁亚彪 秦莉 张仁利 高世同 黄达娜 袁仕善 雷明军 潘晖榕 温见翔 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期788-792,747,共6页
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况。方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVACGRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK293细胞,用RTPCR法及Westernblot法检测其表达情况... 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况。方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVACGRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK293细胞,用RTPCR法及Westernblot法检测其表达情况;利用基因枪导入法将该重组质粒导入BALB/c小鼠体内细胞,测定免疫鼠T淋巴细胞亚群及IFNγ、IL4含量,并观察攻毒试验后小鼠存活情况,以评价其免疫保护力。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVACGRA4;转染GRA4的HEK293细胞,RTPCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Westernblot鉴定,其分子量约为41kD,能被特异性免疫血清所识别;经pVACGRA4免疫后的小鼠,其CD+4T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD+8T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD+4/CD+8比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫鼠IFNγ的A值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4免疫鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论构建的真核表达质粒pVACGRA4能在HEK293细胞中和小鼠体内细胞中表达,为弓形虫疫苗的进一步研究打下基础。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白4 真核系统 克隆 表达
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毕赤酵母表达系统 被引量：21
19
作者 韩雪清 刘湘涛 尹双辉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期35-40,共6页
选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响... 选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响其表达的因素等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 表达系统 真核表达系统 基因组表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量：10
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作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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