环介导的等温扩增技术对HBV、HCV和HIV核酸检测的研究 被引量：3

1

作者 王迅 贾尧 +4 位作者 郑岚 伍晓菲 刘晓颖 易进华 钱开诚 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2008年第11期829-833,共5页

目的建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和H IV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核。方法通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBVDNA、HCV RNA和H IV RNA扩增体系;用连续稀释... 目的建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和H IV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核。方法通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBVDNA、HCV RNA和H IV RNA扩增体系;用连续稀释的阳性样本和不含任何病毒核酸的正常人血浆考核所建立的LAMP扩增体系的灵敏度和特异性。结果建立了LAMP HBV DNA扩增体系及HCV/H IV RNA双联检体系,该体系对5 CP/m l的HBV DNA样本的检出率为51.85%,对100 CP/m l的HCV RNA阳性样本的检出率为61.90%,对100 CP/m l的H IV RNA阳性样本的检出率为45%。对考核样本检测的相对灵敏度和特异性均为100%。结论LAMP HBV、HCV和H IV检测灵敏度较高,在进一步优化以后能用于HBV、HCV和H IV的核酸检测。 展开更多

关键词 环介导的等温扩增 核酸检测 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒

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环介导的等温扩增与实时荧光PCR检测问号钩端螺旋体的比较

2

作者 方葆 丁士标 +1 位作者 严杰 林旭瑷 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期751-754,共4页

目的通过比较环介导的等温扩增技术（loop—mediatedisothermalamplification，LAMP）与实时荧光PCR（real．timePCR）技术在检测问号钩端螺旋体的特异性及灵敏度方面的差异，寻找一种快速、灵敏且特异性强的问号钩端螺旋体检测方法。... 目的通过比较环介导的等温扩增技术（loop—mediatedisothermalamplification，LAMP）与实时荧光PCR（real．timePCR）技术在检测问号钩端螺旋体的特异性及灵敏度方面的差异，寻找一种快速、灵敏且特异性强的问号钩端螺旋体检测方法。方法根据问号钩端螺旋体liplAl基因序列设计LAMP及实时荧光PCR扩增所用的特异性引物，对我国15群15株问号钩端螺旋体参考菌株进行检测，比较二者在检测的特异性和灵敏度方面的差异。结果LAMP反应大约可在30min内完成，整个分析过程不超过1h。Real-timePCR的整个过程大约需要60min。二者具有相同的检测灵敏度和特异性，最低检出限度均为100个拷贝，整个检测过程没有出现假阳性。结论在检测速度、灵敏度和特异性方面，LAMP技术与real—timePCR技术相当，但LAMP检测技术是在恒温条件下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，在基层实验室及现场检测方面具有明显的优势，是可应用于问号钩端螺旋体检测的一种有效技术。 展开更多

关键词 问号钩端螺旋体 环介导的等温扩增 REAL-TIME PCR lipL41基因

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基于链置换反应的DNA等温扩增技术应用进展 被引量：6

3

作者 何艳 蒋涛 《医学综述》 2010年第1期24-27,共4页

DNA等温扩增是在恒定温度下用非热变性的方法解开DNA双链的一种扩增技术。链置换反应指某些具有链置换活性的DNA聚合酶在延伸新链的同时将下游旧链剥离,它已被用于多种体外等温扩增技术,包括链置换扩增、滚环扩增、多重置换扩增、环介... DNA等温扩增是在恒定温度下用非热变性的方法解开DNA双链的一种扩增技术。链置换反应指某些具有链置换活性的DNA聚合酶在延伸新链的同时将下游旧链剥离,它已被用于多种体外等温扩增技术,包括链置换扩增、滚环扩增、多重置换扩增、环介导的等温扩增等。其主要应用于DNA测序、全基因组扩增、基因芯片、微生物病原体检测等领域。 展开更多

关键词 等温扩增 链置换扩增 滚环扩增 多重置换扩增 环介导的等温扩增

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环介导等温扩增法检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ型方法的建立 被引量：1

4

作者 顾菊萍 潘淑静 +1 位作者 陈道桢 朱斌 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第4期763-766,共4页

目的建立稳定、可靠的环介导等温扩增法(LAMP)快速检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV-Ⅰ)DNA的方法。方法通过对影响LAMP反应体系的几个主要因素进行优化,确定最佳反应条件,并对其特异性、灵敏度及可靠性进行评判。结果 LAMP检测HSV-Ⅰ ... 目的建立稳定、可靠的环介导等温扩增法(LAMP)快速检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV-Ⅰ)DNA的方法。方法通过对影响LAMP反应体系的几个主要因素进行优化,确定最佳反应条件,并对其特异性、灵敏度及可靠性进行评判。结果 LAMP检测HSV-Ⅰ DNA的最佳反应条件:甜菜碱和Mg2+的终浓度分别为1.0mol/L和10mmol/L,于62℃恒温反应1h。扩增产物可被Hinf Ⅰ消化,理论上检测下限可达10个拷贝,与定量PCR相比符合率达94.5%。结论本实验建立的LAMP检测HSV-I的方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,适合基层用于HSV-Ⅰ筛查。 展开更多

关键词 环介导的等温扩增 单纯疱疹病毒Ⅰ型 基因检测 孕妇血清

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基于环式等温扩增的烟草青枯病病原菌快速检测方法 被引量：7

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作者 贾蒙骜 陈兴江 +1 位作者 林叶春 商胜华 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期93-98,共6页

针对烟草青枯病的防控,开发快速、高效的病原菌检测方法是必要的。环式等温扩增(LAMP)是一种在等温条件下快速完成靶标基因扩增的新方法。将青枯病菌贵州分离株FQY4基因组序列(NCBI号:CP004013)与其他已发表菌株序列比对分析,确定编码... 针对烟草青枯病的防控,开发快速、高效的病原菌检测方法是必要的。环式等温扩增(LAMP)是一种在等温条件下快速完成靶标基因扩增的新方法。将青枯病菌贵州分离株FQY4基因组序列(NCBI号:CP004013)与其他已发表菌株序列比对分析,确定编码鞭毛蛋白的fliC基因的保守区域可被选作检测靶标。根据LAMP原理以及靶标序列的特点,设计了一组由6条引物组成的环式等温扩增反应体系。结果表明:61℃条件下孵育45min,可完成对青枯病病原菌单菌落和带菌烟草叶片的检测,结果判定可以通过颜色变化被肉眼直接识别,也可以通过琼脂糖凝胶电泳检测。通过这种新方法,可以实现对青枯病菌菌落的快速鉴别,还可以用于对田间疑似带病烟草植株的快速检测。 展开更多

关键词 烟草 茄科劳尔氏菌 fliC基因 环介导的等温扩增

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的核酸等温扩增方法研究进展

6

作者 赵雨佳 范培蕾 +4 位作者 李冉 刘然 李晶晶 赵海波 梁亮 《计量科学与技术》 2024年第12期21-31,共11页

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因高耐药性和高致死率成为医院与社区感染的重要病原。基于PCR检测mecA基因被认为是检测MRSA的“金标准”,然而该方法无法摆脱对精密控温仪器的依赖,难以满足现场检测的需求。与传统的PCR扩增不同,核酸... 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因高耐药性和高致死率成为医院与社区感染的重要病原。基于PCR检测mecA基因被认为是检测MRSA的“金标准”,然而该方法无法摆脱对精密控温仪器的依赖,难以满足现场检测的需求。与传统的PCR扩增不同,核酸等温扩增能够在恒定温度下进行反应,极大地简化了操作过程,适用于临床快速检测、病房床头诊断、社区基层医疗、现场流行病学调查等多种应用场景。近年来,环介导的等温扩增、重组酶聚合酶扩增和滚环扩增等核酸等温扩增方法被开发用于检测MRSA。对其进行综述,为MRSA的现场检测提供参考。 展开更多

关键词 计量学 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 核酸等温扩增 环介导的等温扩增 重组酶聚合酶扩增 滚环扩增

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嗜肺军团菌核酸等温扩增快速检测技术研究 被引量：5

7

作者 张兵 徐昌平 +2 位作者 程东庆 冯燕 卢亦愚 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第7期782-784,788,共4页

目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测... 目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测技术,进而验证方法的灵敏性、特异性,并对浙江省不同地区的中央空调冷却水水样进行检测。结果环介导的等温扩增试纸条及pH显色检测方法灵敏度可高达3 cfu/μl,特异性好,且检测时间仅需40 min左右。检测的灵敏度与荧光定量PCR的方法基本一致,对外环境空调冷却水的检测阳性率与荧光定量也相符。结论建立的嗜肺军团菌试纸条与pH显色快速检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 MIP基因 环介导的等温扩增技术 横向流动试纸条 pH显色

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鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用 被引量：11

8

作者 谢晶 于吉锋 +7 位作者 周泷 曹冶 林毅 李兴玉 肖璐 叶勇刚 潘梦 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期565-572,共8页

试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplificatio... 试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。 展开更多

关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 环介导的等温扩增技术(LAMP) TK基因

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E.coli O157:H7 LAMP检测方法的建立 被引量：7

9

作者 朱海 吕敬章 +4 位作者 范放 洪小柳 马淑棉 黄李华 刘慧玲 《分子诊断与治疗杂志》 2010年第2期98-101,共4页

目的建立检测E.coli O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP)。方法选取E.coli O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157:H7 LAMP体系具有良好的特... 目的建立检测E.coli O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP)。方法选取E.coli O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157:H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coli O157:H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coli O157:H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,E.coli O157:H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的E.coli O157:H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。 展开更多

关键词 环介导的等温扩增 E.coliO157:H7 rfbE

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新布尼亚病毒流行病学及检测方法的研究进展 被引量：5

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作者 张丽萍 王玉春 +3 位作者 赵勇 马雪征 甄维 胡孔新 《检验检疫学刊》 2014年第4期67-71,共5页

着重对近期关于新布尼亚病毒基本特性、国内外流行病学特点、检测方法等方面的研究进展进行综述。应用原子力显微镜观测病毒的基本形貌获得相关数据;流行病学方面SFTS病例也陆续在日本、韩国等国家有发现和报道;检测方面除针对病毒不同... 着重对近期关于新布尼亚病毒基本特性、国内外流行病学特点、检测方法等方面的研究进展进行综述。应用原子力显微镜观测病毒的基本形貌获得相关数据;流行病学方面SFTS病例也陆续在日本、韩国等国家有发现和报道;检测方面除针对病毒不同基因组的荧光定量方法外,还有反转录环介导的等温扩增技术,以及通过将反转录交叉启动扩增和垂直流偶联快速准确的检测该病毒。 展开更多

关键词 新布尼亚病毒 原子力显微镜 反转录环介导的等温扩增技术 反转录交叉启动扩增

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樱桃小果病毒1 RT-LAMP检测方法的建立与应用

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作者 刘云岫 尚勤旺 +2 位作者 韩紫硕 徐晓厚 王德亚 《落叶果树》 2023年第1期12-15,共4页

樱桃小果病毒1(LChV-1)已成为严重影响樱桃产量与质量的重要因素之一。本研究基于环介导的等温扩增技术建立LChV-1的快速检测体系。依据NCBI数据库中LChV-1外壳蛋白基因序列设计了3组特异性引物,经优化,筛选获得1组特异性引物。以感染LC... 樱桃小果病毒1(LChV-1)已成为严重影响樱桃产量与质量的重要因素之一。本研究基于环介导的等温扩增技术建立LChV-1的快速检测体系。依据NCBI数据库中LChV-1外壳蛋白基因序列设计了3组特异性引物,经优化,筛选获得1组特异性引物。以感染LChV-1的甜樱桃叶片总RNA为模板,构建RT-LAMP检测体系为:6.0 mM Mg^(2+),0.2μM的外引物和1.2μM的内引物,在57℃条件下反应60 min。使用RT-LAMP方法对35个疑似樱桃小果病的甜樱桃样品进行检测,发现有13个样品感染了LChV-1,检测结果与RT-PCR法一致。RT-LAMP法具有特异性强、快速等特点,适合对LChV-1田间样品的快速检测与鉴定。 展开更多

关键词 樱桃小果病毒1 检测 环介导的等温扩增技术

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乳腺癌前哨淋巴结转移快速诊断的初步研究 被引量：3

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作者 郝晓鹏 刘毅 +3 位作者 孙恒 胡海旭 刘兵 尉承泽 《中华乳腺病杂志（电子版）》 CAS 2012年第4期13-17,共5页

目的建立快速准确、全面客观的判断前哨淋巴结转移状态的分子病理检查方法。方法合成细胞角蛋白19(CK19)的环介导等温扩增(LAMP)引物,应用LAMP技术扩增乳腺癌细胞MCF-7的cDNA,验证引物序列的可靠性;通过RT-LAMP技术分别检测MCF-7、Daudi... 目的建立快速准确、全面客观的判断前哨淋巴结转移状态的分子病理检查方法。方法合成细胞角蛋白19(CK19)的环介导等温扩增(LAMP)引物,应用LAMP技术扩增乳腺癌细胞MCF-7的cDNA,验证引物序列的可靠性;通过RT-LAMP技术分别检测MCF-7、Daudi、Namawal细胞的RNA,验证实验体系的可行性;将手术获取的乳腺癌患者前哨淋巴结行RT-LAMP检测CK19表达,与常规病理学方法的检测结果相对比,最终通过荧光定量以及离心观测沉淀等手段缩短整体检测时间。结果应用LAMP技术能够检测到MCF-7乳腺癌细胞的CK19表达,而Daudi、Namawal细胞CK19的表达均为阴性;经病理检查证实为癌转移阳性的3枚前哨淋巴结,通过RT-LAMP均检测到CK19表达;经荧光定量及离心观测沉淀等手段优化后反应时间可以缩短至1h之内。结论 LAMP检测CK19表达,能够准确区分上皮来源细胞和淋巴瘤细胞,检测转移阳性淋巴结的结果与常规病理学结果完全符合,其具有简便、准确、快速等优点。 展开更多

关键词 环介导的等温扩增 细胞角蛋白19 乳腺肿瘤 前哨淋巴结 转移

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LAMP法检测超级细菌NDM-1基因

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作者 潘翊 何金洋 +1 位作者 刘亚敏 李兰芳 《医学动物防制》 2011年第5期433-435,共3页

目的建立超级细菌NDM-1基因的LAMP检测方法。方法根据目前Genbank上公布的超级细菌NDM-1基因序列,交由商业性的公司化学合成NDM-1全基因,然后以PCR、酶切及测序鉴定基因合成是否成功;再以LAMP法扩增NDM-1基因重组质粒,电泳观察扩增是否... 目的建立超级细菌NDM-1基因的LAMP检测方法。方法根据目前Genbank上公布的超级细菌NDM-1基因序列,交由商业性的公司化学合成NDM-1全基因,然后以PCR、酶切及测序鉴定基因合成是否成功;再以LAMP法扩增NDM-1基因重组质粒,电泳观察扩增是否成功。结果经证实化学合成NDM-1基因是成功的;之后进行的LAMP法扩增NDM-1基因也是成功的。结论成功建立了LAMP法检测超级细菌NDM-1基因的方法,为超级细菌的检测提供了一种可用的方法。 展开更多

关键词 新德里金属-β-内酰胺酶-1 环介导的等温扩增 检测

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