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猿猴疱疹病毒B糖蛋白D的表达及抗原性的探讨 被引量：2
1
作者 肖镜 付瑞 贺争鸣 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第6期436-440,共5页
目的表达猴B病毒糖蛋白D(BVgD)并对其抗原性进行初步研究。方法应用体外原核表达BVgD,继而进行Ni离子亲和层析纯化。采用Western blotting对蛋白抗原性进行分析,评估其抗原潜力。结果完成了对BVgD的小量表达和纯化。Western blotting结... 目的表达猴B病毒糖蛋白D(BVgD)并对其抗原性进行初步研究。方法应用体外原核表达BVgD,继而进行Ni离子亲和层析纯化。采用Western blotting对蛋白抗原性进行分析,评估其抗原潜力。结果完成了对BVgD的小量表达和纯化。Western blotting结果表明表达出的重组蛋白BVgD具有特异性结合猴B病毒抗体的能力。结论BVgD重组蛋白具有良好的抗原性,与HSV-1抗体无交叉反应。具有进一步开发的潜力,也为BVgD免疫原性等方面的进一步研究提供了条件。 展开更多
关键词 疱疹病毒1型 猕猴 猴b病毒糖蛋白d(bvgd) b病毒抗体 ELISA
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鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达 被引量：1
2
作者 王雅静 郭东春 +6 位作者 刘家森 王淑亚 原冬伟 姜骞 林欢 司昌德 曲连东 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第12期18-20,23,共4页
为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb... 为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb-gB-gD转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE表明:获得串联表达的gB和gD重组蛋白约60.5 Ku,与预期蛋白的分子质量一致,主要以包涵体的形式存在。Western-blot表明:串联表达的gB和gD重组蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联表达的gB和gD重组蛋白为下一步建立针对鸭肠炎病毒的诊断方法奠定基础。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 糖蛋白b 糖蛋白d 串联表达
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猴B病毒被膜糖蛋白gC的原核表达及诊断价值评价 被引量：1
3
作者 王代平 叶华虎 +6 位作者 董罡 张文韬 陈旖 白杰英 胡娟峰 曾林 聂奎 《生物技术通讯》 CAS 2011年第4期522-526,531,共6页
目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础。方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转... 目的:原核表达猴B病毒糖蛋白gC胞外区片段,评价其在猴B病毒血清学检测中的特异性和敏感性,为猴B病毒检测奠定基础。方法:利用PCR方法扩增gC胞外区基因片段,同时合成该片段的优化密码子序列,将其插入表达载体pET-28b(+)形成重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达;纯化蛋白先以Western印迹进行验证,再以ELISA方法和标准阳性、阴性血清评价其诊断价值。结果:直接从病毒DNA模板上获得的基因片段未能表达,而优化后的基因片段表达水平较高,表达蛋白的相对分子质量约为48×103,为包涵体形式,占菌体总蛋白的30%左右;Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;34份标准阳性血清和25份阴性血清的ELISA检测结果显示,重组蛋白的敏感性和特异性分别为94.1%(32/34)和100%(25/25)。结论:利用原核表达系统制备的gC胞外区重组蛋白,可作为猴B病毒血清学检测抗原,其特异性和敏感性都较好。 展开更多
关键词 猴b病毒 被膜糖蛋白gC 原核表达 血清学诊断
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猴B病毒囊膜蛋白gC基因密码子优化及其在大肠埃希菌中的表达 被引量：2
4
作者 王代平 叶华虎 +4 位作者 曾林 白杰英 董罡 张文韬 聂奎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期1-4,共4页
根据猴B病毒E2490标准株gC基因,选择大肠埃希菌偏好的密码子,设计合成了1 200个碱基,共编码400个氨基酸,测序证实后,克隆入pET-28b(+)载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得50 ku以包涵体形式表达的gC重组蛋白。Western blo... 根据猴B病毒E2490标准株gC基因,选择大肠埃希菌偏好的密码子,设计合成了1 200个碱基,共编码400个氨基酸,测序证实后,克隆入pET-28b(+)载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得50 ku以包涵体形式表达的gC重组蛋白。Western blot分析表明表达产物能够被猴B病毒标准阳性血清识别。间接ELISA检测表明,重组蛋白与人单纯疱疹病毒1型、2型阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测猴B病毒抗体间接ELISA方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猴b病毒 C糖蛋白 基因合成 高效表达
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HSV-1糖蛋白B和糖蛋白D的T细胞表位重组核酸疫苗的构建及其免疫原性 被引量：2
5
作者 王丹凤 马小力 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期141-144,167,共5页
目的构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性。方法登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-... 目的构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性。方法登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-1 gB和gD的T细胞表位。将已知表位和预测表位串联,设计并合成HSV-1 gB、gD的T细胞多表位基因盒(Tg)。将Tg克隆入真核表达载体pVAX,构建真核表达质粒pVAX-Tg。pVAX-Tg转染293T细胞,鉴定其蛋白表达。将pVAX-Tg免疫小鼠,检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)水平的变化。结果成功构建真核表达质粒pVAX-Tg,且该质粒能够成功转染细胞并表达目的蛋白。将pVAX-Tg免疫小鼠后,血清IFN-γ水平明显升高(P<0.001)。结论本研究成功设计构建HSV-1 gB和gD的T细胞表位核酸疫苗,其能够在体外真核细胞中表达,并能够有效诱导细胞免疫,为HSV-1多表位核酸疫苗的研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 Ⅰ型单纯疱疹病毒 糖蛋白b 糖蛋白d T细胞表位 核酸疫苗
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串联表达传染性喉气管炎病毒gB、gD抗原表位基因的重组鸡痘病毒转移载体的构建 被引量：2
6
作者 刘文波 梁成珠 +3 位作者 徐彪 朱来华 张素芳 陈溥言 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期453-456,460,共5页
根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)SA-2株基因序列设计并合成2对引物,以烟台分离株为模板,分别扩增其gB和gD的抗原表位基因,并亚克隆到pBluescriptⅡSK(+)中,得到重组质粒pSK-gB-gD,然后再将gB-gD片段亚克隆到鸡痘病毒转移质粒载体p... 根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)SA-2株基因序列设计并合成2对引物,以烟台分离株为模板,分别扩增其gB和gD的抗原表位基因,并亚克隆到pBluescriptⅡSK(+)中,得到重组质粒pSK-gB-gD,然后再将gB-gD片段亚克隆到鸡痘病毒转移质粒载体pEFgpt12s中。酶切鉴定结果显示已成功构建了重组鸡痘病毒转移质粒载体pEF-gB-gD,可为进一步在细胞中转染并获得串联表达传染性喉气管炎病毒gB及gD主要抗原表位基因的重组鸡痘病毒奠定基础。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 糖蛋白b 糖蛋白d 鸡痘病毒
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猪瘟病毒E2蛋白B/C抗原区基因在毕赤酵母中的表达与鉴定
7
作者 徐学清 郑其升 +2 位作者 曹瑞兵 苏小运 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期53-57,共5页
基于猪瘟病毒主要保护性抗原———E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位———B C抗原区和A D抗原区 ,设计引物扩增编码猪瘟病毒E2蛋白B C抗原区的基因 ,将大小为2 61bp的PCR产物插入含有强启动子PAOX1和α MF信号肽序列的巴斯德... 基于猪瘟病毒主要保护性抗原———E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位———B C抗原区和A D抗原区 ,设计引物扩增编码猪瘟病毒E2蛋白B C抗原区的基因 ,将大小为2 61bp的PCR产物插入含有强启动子PAOX1和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC中 ,构建成重组质粒pPICZα BC ,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母菌X3 3 中 ,经ZeocinTM 筛选得到 3株高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot及ELISA试验表明 ,酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白。 展开更多
关键词 C抗原 E2蛋白 b/C 表达 基因 膜糖蛋白 d抗原 猪瘟病毒 株高 诊断抗原
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HSV-1糖蛋白B和糖蛋白D重组抗原表位串联疫苗的构建及免疫保护作用研究
8
作者 刘雨轩 董晓鸣 +2 位作者 杨吉琨 张劲松 王静 《国际眼科杂志》 2025年第4期530-536,共7页
目的:构建1型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)重组抗原表位核酸疫苗,并进一步研究该疫苗在动物模型中的免疫保护作用及组织表达。方法:筛选HSV-1的gB、gD表位基因进行串联,构建重组蛋白编码基因X,并转入原核表达载体PET28(... 目的:构建1型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)重组抗原表位核酸疫苗,并进一步研究该疫苗在动物模型中的免疫保护作用及组织表达。方法:筛选HSV-1的gB、gD表位基因进行串联,构建重组蛋白编码基因X,并转入原核表达载体PET28(a),利用重组蛋白制备单克隆抗体,免疫新西兰大白兔心脏采血分离血清检测纯化蛋白的免疫原性及血清中的多克隆抗体并获取血清抗体效价。构建真核表达载体pcDNA3.1-X,并采取肌肉注射的方式对4-6 wk BALB/c雌性小鼠进行3针免疫程序,ELISA实验法检测血清中抗体及免疫相关的细胞因子,免疫组化检测小鼠眼球、三叉神经节和脑组织中蛋白X的表达。结果:重组蛋白X免疫大兔后,在兔血清中检测到目的多克隆抗体,血清抗体的效价为1∶3200。小鼠免疫真核重组质粒pcDNA3.1-X后,血清中检测到了实验组的HSV-1 IgM抗体含量为12.13±0.85 ng/L,显著高于载体对照组(0.49±0.44 ng/L)(t=21.07,P<0.001)。实验组细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的含量分别为11.63±0.60、22.65±1.47、85.75±14.12、114.90±6.39 ng/L,均显著高于载体对照组和空白对照组(均P<0.05)。免疫组织化学染色法表明实验组眼球、三叉神经节和脑组织中均发现目的蛋白X的表达。结论:本研究成功构建了HSV-1 gB和gD串联表位核酸疫苗,能够诱导机体产生较强的免疫应答,并能在眼球、三叉神经节和脑组织中稳定表达,具有较强的免疫原性,为HSV-1重组抗原表位串联疫苗的研制提供了基础数据。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒(HSV-1) 核酸疫苗 糖蛋白b 糖蛋白d 抗体
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