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猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒混合感染的检测及TTV遗传变异分析 被引量：6
1
作者 刘建波 郭龙军 +3 位作者 危艳武 黄立平 吴洪丽 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-10,共5页
为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41... 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41.1%和37.5%,PCV1与PCV2混合感染率为19.6%;PCV2阳性样品中TTV1和TTV2混合感染率达75.0%。此外,对2株TTV1基因组进行测序,与GenBank中登录的6个TTV1序列比对,相似性结果为67.3%～95.1%;对4株TTV2基因组测序,与GenBank登录的4条TTV2序列比对,相似性为84.7%～90.4%;将TTV1与TTV2进行序列比对,相似性仅为44.0%。TTV1和TTV2基因高变区分别位于520 nt～2 594 nt和720 nt～2 170 nt;TTV1基因保守区位于1 nt～520 nt和2 595 nt～2 800 nt;而TTV2基因保守区位于1 nt～719 nt和2 171 nt～2 800 nt。以上结果表明,我国猪群中存在TTV与PCV2的混合感染,并且两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在协同致病性;TTV1和TTV2基因型差异较大,具有遗传变异多样性的特点。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒 猪圆环病毒 混合感染 遗传变异分析
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猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化 被引量：1
2
作者 王小敏 何孔旺 +7 位作者 张文文 王东田 周忠涛 张雪寒 周俊明 汪伟 倪艳秀 温立斌 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期38-43,共6页
为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到... 为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达为主,分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加,在15℃时表达量最高,而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。Western Blotting结果表明,重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应,具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因,构建了原核表达载体并获得高效表达,为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下,加入0.2 mmol/L浓度的IPTG,诱导24 h,表达条件最佳。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒2型 基因克隆 原核表达
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猪输血传播病毒2型福建株ORF1基因特征 被引量：1
3
作者 修金生 陈如敬 +3 位作者 吴学敏 王斌 李涛 林群群 《福建农业学报》 CAS 2013年第1期14-17,共4页
参照GenBank中登录的猪输血传播病毒2型(Torque Teno Virus genogroup 2,TTV2)ORF1基因序列特征设计特异性引物,采用PCR方法对从福建省某猪场采集的血液基因组DNA中扩增到猪输血传播病毒2型ORF1基因,并对目的片段进行克隆测序。结果表明... 参照GenBank中登录的猪输血传播病毒2型(Torque Teno Virus genogroup 2,TTV2)ORF1基因序列特征设计特异性引物,采用PCR方法对从福建省某猪场采集的血液基因组DNA中扩增到猪输血传播病毒2型ORF1基因,并对目的片段进行克隆测序。结果表明,所扩增的目的片段编码有TTV2完整的ORF1基因开放阅读框,全长为1 875bp,编码有624个氨基酸。运用生物信息学软件,将获得猪TTV2福建株ORF1基因序列和GenBank中登录的猪TTV2进行分析比较,其和FJ/China/2010/TTV2/2(GenBank登录号JF937656)的同源性高达98.8%,和四川株(GenBank登录号HQ204188)核苷酸同源性最低,仅为83.5%。从遗传进化上看,猪输血传播病毒2型可以分为3个明显的分支亚群,福建分离株在基因1群和基因2群均有分布,推测福建省存在多亚群猪TTV2流行。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒 ORF1基因 特征
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抗猪输血传播病毒1型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1
4
作者 张龙 刘建波 +5 位作者 黄立平 郭龙军 危艳武 唐青海 吴洪丽 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期974-978,共5页
为制备抗猪输血传播病毒1型(TTV1)Cap蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用PCR法扩增TTV1ORF1(1501 nt～2475 nt)编码重组Cap蛋白的C末端截短序列,将PCR产物克隆于pGEX-6P-1载体中,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达,获得含GST标签... 为制备抗猪输血传播病毒1型(TTV1)Cap蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用PCR法扩增TTV1ORF1(1501 nt～2475 nt)编码重组Cap蛋白的C末端截短序列,将PCR产物克隆于pGEX-6P-1载体中,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达,获得含GST标签的重组蛋白(rCap),经SDS-PAGE和western blot鉴定表明rCap约为64.0 ku,以包涵体形式存在。用纯化的rCap免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得8株稳定分泌抗rCap蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚类均为IgG1/κ型;western blot鉴定表明有7株MAbs与rCap产生特异性反应,另1株MAb呈阴性。为验证8株MAbs与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的TTV1 ORF1基因片段克隆于pcDNA3.1载体,转染293T细胞进行蛋白瞬时表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法检测表明,这8株MAbs均能够与瞬时表达的全长rCap产生特异性反应,其中6株与截短表达的rCap反应。本研究表达的rCap蛋白及制备的MAbs,为该病毒检测方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒1型 重组CAP蛋白 单克隆抗体
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猪输血传播病毒检测方法研究进展 被引量：1
5
作者 闫沁男 井申荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1016-1020,共5页
猪输血传播病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种单链,无包膜的DNA病毒。在健康的或患有某些疾病的猪中,都能检测到它的存在,具有很高的流行率。目前,针对TTSuV的检测方法有多种,如PCR方法,血清免疫学方法等,但是各有优缺点,因此本... 猪输血传播病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种单链,无包膜的DNA病毒。在健康的或患有某些疾病的猪中,都能检测到它的存在,具有很高的流行率。目前,针对TTSuV的检测方法有多种,如PCR方法,血清免疫学方法等,但是各有优缺点,因此本文就现有的TTSuV检测方法做一个简单综述,使读者能够对TTSuV的检测方法有一个全面了解。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒(TTSuV) PCR 滚环扩增(RCA) ELISA
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PCR检测猪输血传播病毒Ⅱ型方法的建立及其应用 被引量：5
6
作者 娄高明 冯顺胜 +1 位作者 殷华平 黄健强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1259-1261,1289,共4页
根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型(Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ)基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ... 根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型(Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ)基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆、猪霍乱沙门菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性。该方法的灵敏性试验表明,最低能检测到10.2pg核酸。利用所建立的PCR方法检测来自我国华南地区192份临床样品,阳性率为21.4%(41/192)。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒Ⅱ型 PCR 建立 应用
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PCR检测猪输血传播病毒Ⅰ型方法的建立及其初步应用 被引量：1
7
作者 娄高明 殷华平 +1 位作者 冯顺胜 黄健强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1107-1110,共4页
参照GenBank已公布的猪源输血传播病毒Ⅰ型(Torque Teno Virus genogroupⅠ,TTVⅠ)全基因序列,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增片段为194bp,测序结果与已公布的猪TTVⅠ型序列同源性为92.6%。用所建立的方法检测猪圆环病毒Ⅱ型、猪细... 参照GenBank已公布的猪源输血传播病毒Ⅰ型(Torque Teno Virus genogroupⅠ,TTVⅠ)全基因序列,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增片段为194bp,测序结果与已公布的猪TTVⅠ型序列同源性为92.6%。用所建立的方法检测猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌等病原,无特异性条带出现,不存在交叉反应。该法灵敏度高,能检测到11.3pg的阳性核酸。检测某规模化猪场送检的44份健康母猪血清,结果TTVⅠ型的阳性率为13.6%(6/44);检测2006年7月到2007年3月期间采自广东、江西、湖南、广西、福建等5个省154份疑似"猪高热病"病料组织,结果TTVⅠ型的阳性率为40.9%(63/154),这表明我国规模化猪场TTVⅠ型感染率是非常高的。试验结果证明所建立的PCR方法为猪TTVⅠ的检测和流行病学调查提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒Ⅰ型 PCR 建立 应用
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猪细环病毒流行病学与遗传变异研究进展 被引量：3
8
作者 刘建波 刘长明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期89-93,共5页
猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但... 猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但仍没有找到合适的细胞系适于病毒的体外培养。论文主要围绕其流行病学和遗传变异情况进行了综述,简要介绍了该病毒的多种检测方法,这对进一步研究该病毒的分布和致病性及防控有重要意义。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒 流行病学 遗传变异
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猪输血性传播病毒2型全基因组的克隆与序列分析 被引量：2
9
作者 赵玲 徐志文 +2 位作者 朱玲 梅淼 吴云飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期582-587,共6页
为了监测猪输血性传播病毒2型(TTV2)的疫源和进化情况,为进一步研究TTV2的形态结构、遗传变异和基因功能奠定生物学基础,参照国外发表的猪输血性传播病毒(TTV)全基因组核苷酸序列(GU456386.1),设计3对特异性引物,采用巢式PCR对采自四川... 为了监测猪输血性传播病毒2型(TTV2)的疫源和进化情况,为进一步研究TTV2的形态结构、遗传变异和基因功能奠定生物学基础,参照国外发表的猪输血性传播病毒(TTV)全基因组核苷酸序列(GU456386.1),设计3对特异性引物,采用巢式PCR对采自四川省的疑似猪输血性传播病毒感染的血清样品进行TTV全基因组的克隆、测序和拼接,并对其进行同源性分析和遗传进化分析。结果显示,该基因组全长2 802bp,与国内外参考株同源性介于87%～96%之间,ORF1的同源性介于81%～95%;ORF2的同源性较高,介于93%～99%之间。系统进化树分析表明,该分离株与美国株PTTV2c-VA的同源性高达96%。结果表明,该毒株为TTV2,与国内外参考株有一定的相似性。 展开更多
关键词 猪输血性传播病毒2型 克隆 序列分析
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PCV2、P1和TTV混合感染的流行病学调查 被引量：3
10
作者 王小敏 何孔旺 +6 位作者 王东田 周忠涛 茅爱华 俞正玉 汪伟 倪艳秀 温立斌 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期864-868,共5页
【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为6... 【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为64.81%,P1感染率为12.96%,TTV1感染率为33.33%,TTV2感染率为51.85%,其中8份样品表现为PCV2和P1的混合感染,42份样品表现为PCV2和TTV的混合感染,4份样品表现为PCV2、P1和TTV的混合感染,分别占样品总数的7.41%、38.89%和3.7%。【结论】猪群中PCV2和TTV的感染比较普遍,P1的感染率较低,PCV2和TTV的混合感染率较高,混合感染种类复杂,加重了疫病防控的难度。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 类猪圆环病毒因子P1 猪输血传播病毒
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