猪肺巨噬细胞FcγR Ⅲ受体基因的克隆与序列分析 被引量：15

1

作者 徐红运 夏平安 +4 位作者 王中明 张凤华 卢高峰 刘玉松 崔保安 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期66-71,共6页

为研究猪肺巨噬细胞FcγRⅢ的生物学功能,本研究应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪FcγRⅢ的cDNA序列,并对其进行了分析。结果表明,克隆到的序列长820 bp,包含有1个771 bp完整开放阅读框(ORF),与Gen-Bank中登录的猪FcγRⅢ序... 为研究猪肺巨噬细胞FcγRⅢ的生物学功能,本研究应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪FcγRⅢ的cDNA序列,并对其进行了分析。结果表明,克隆到的序列长820 bp,包含有1个771 bp完整开放阅读框(ORF),与Gen-Bank中登录的猪FcγRⅢ序列(AF237453)的核苷酸同源性为99.9%;与人、牛、马、绵羊、猕猴、狗、猫、小鼠氨基酸同源性分别为61.6%、62.9%、55.3%、62.2%、63.0%、59.0%、61.8%和53.2%;蛋白质分子结构预测结果表明,该分子由信号肽(20个氨基酸)、胞外区(185个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(28个氨基酸)组成,在胞外区存在2个Ig样结构域。猪肺巨噬细胞FcγRⅢ基因的成功克隆,为进一步研究其结构与功能奠定基础。 展开更多

关键词 猪肺巨噬细胞fcγr Ⅲ 基因克隆 序列分析

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PCV2感染对猪肺泡巨噬细胞Fc受体数量和吞噬功能的影响 被引量：1

2

作者 周双海 赵东升 +1 位作者 郭鑫 杨汉春 《北京农学院学报》 2006年第1期21-23,共3页

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照组。用EA花环试验测定Fc受体数目,用吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,来分析PCV2感染对PAM某些生物学活性的影响。结... 将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照组。用EA花环试验测定Fc受体数目,用吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,来分析PCV2感染对PAM某些生物学活性的影响。结果显示,PAM表面Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后3 d时下降至最低,之后回升,14 d时基本恢复正常。本研究表明,PCV2感染可引起PAM吞噬和清除病原的能力出现短暂下降。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪肺泡巨噬细胞 fc受体 吞噬

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猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响 被引量：7

3

作者 周双海 赵东升 +2 位作者 磨美兰 郭鑫 杨汉春 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第10期775-778,共4页

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬... 将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示,在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后第3 d明显下降,第7 d有所回升,之后基本恢复,表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 肺泡巨噬细胞 凋亡 fc受体 吞噬

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从屠宰猪肺中分离培养猪肺泡巨噬细胞 被引量：5

4

作者 王贵平 刘福林 +1 位作者 刘建 石冰花 《养猪》 2013年第2期123-124,共2页

单核细胞进入肺部成为巨噬细胞。猪肺泡巨噬细胞是猪肺脏重要的功能细胞。它不仅可吞噬侵入肺脏的粒子，参与肺脏的防御和免疫；而且还能分泌大量的生物活性物质，维持肺脏和机体正常的生理活动。当与致病因子接触后，猪肺泡巨噬细胞将... 单核细胞进入肺部成为巨噬细胞。猪肺泡巨噬细胞是猪肺脏重要的功能细胞。它不仅可吞噬侵入肺脏的粒子，参与肺脏的防御和免疫；而且还能分泌大量的生物活性物质，维持肺脏和机体正常的生理活动。当与致病因子接触后，猪肺泡巨噬细胞将其包围形成吞噬体，与细胞内溶酶体融合， 展开更多

关键词 肺泡巨噬细胞 养猪 分离 猪肺 屠宰 生物活性物质 单核细胞 生理活动

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猪流行性感冒病毒H3N2亚型体外诱导猪肺巨噬细胞发生凋亡 被引量：3

5

作者 祁贤 姚火春 陆承平 《微生物与感染》 2009年第2期76-80,共5页

本文旨在探讨H3N2亚型猪流行性感冒病毒(SIV)引起机体免疫抑制的机制。用SIV分离株体外感染猪肺巨噬细胞(PAM),发现SIV可在PAM中进行生产性复制。感染后96h,病毒的血凝效价达到64。琼脂糖凝胶电泳显示,感染细胞的DNA呈"梯样"... 本文旨在探讨H3N2亚型猪流行性感冒病毒(SIV)引起机体免疫抑制的机制。用SIV分离株体外感染猪肺巨噬细胞(PAM),发现SIV可在PAM中进行生产性复制。感染后96h,病毒的血凝效价达到64。琼脂糖凝胶电泳显示,感染细胞的DNA呈"梯样"图谱;流式细胞仪检测显示,细胞在感染后24h出现明显的亚二倍体DNA峰,72h凋亡细胞达25%。光学显微镜和电子显微镜下可见感染细胞的形态发生特征性改变,如细胞皱缩、细胞表面微绒毛消失、胞质内出现大量空泡、细胞核染色体发生浓缩等。结果提示,SIV可在体外诱导PAM凋亡,推测PAM凋亡可能是SIV引起机体免疫抑制的重要因素之一。 展开更多

关键词 猪流行性感冒病毒 H3N2亚型 猪肺巨噬细胞 凋亡 体外

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一种改良的猪肺血管内巨噬细胞分离方法

6

作者 伍伟玲 陈正堂 +2 位作者 李胜亮 程涛 蔡恩齐 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期376-377,共2页

目的　寻找一种简单、稳定、高产的肺血管内巨噬细胞 (PIM)分离方法 ,为急性肺损伤 (ALI)等肺部炎症性疾病发生机制的研究提供一个可靠的细胞模型。方法　按文献的方法加以改良 ,以改良配制的灌注液 ,行体内原位经心脏肺血管灌注 ,贴壁... 目的　寻找一种简单、稳定、高产的肺血管内巨噬细胞 (PIM)分离方法 ,为急性肺损伤 (ALI)等肺部炎症性疾病发生机制的研究提供一个可靠的细胞模型。方法　按文献的方法加以改良 ,以改良配制的灌注液 ,行体内原位经心脏肺血管灌注 ,贴壁法分离PIM ,培养 2h后 ,光镜、瑞氏染色及非特异性脂酶染色等观察鉴定。结果　细胞得率为 10× 10 7/猪 ,存活率为 99% ,优于文献报道。结论　本改良PIM分离方法简便、高产、稳定 。 展开更多

关键词 肺血管内巨噬细胞 分离 猪 PIM

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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能 被引量：3

7

作者 郑修军 王琦 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1022-1026,共5页

目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表... 目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。 展开更多

关键词 fcγrⅡB 慢病毒诱导表达载体 抑制性受体 巨噬细胞 吞噬和趋化

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猪肺脏巨噬细胞的分离培养 被引量：1

8

作者 张岩岩 胡亚萍 +3 位作者 张雪梅 刘欢 王鹏 王钦富 《大连大学学报》 2015年第6期66-69,74,共5页

提取分离猪肺泡巨噬细胞(PAM)、猪肺血管巨噬细胞(PIM)、猪肺间质巨噬细胞(IM)三种细胞并进行体外培养,采用免疫组化和流式细胞术进行细胞的异质性研究。无菌条件下通过支气管肺泡灌洗获取PAM,右心室插管经心脏行肺血管原位灌注的方法... 提取分离猪肺泡巨噬细胞(PAM)、猪肺血管巨噬细胞(PIM)、猪肺间质巨噬细胞(IM)三种细胞并进行体外培养,采用免疫组化和流式细胞术进行细胞的异质性研究。无菌条件下通过支气管肺泡灌洗获取PAM,右心室插管经心脏行肺血管原位灌注的方法分离得到PIM,肺组织机械处理结合酶消化法(胶原酶IA)分离IM。显微镜下观察三种细胞的形态上的不同;免疫组化和流式细胞术检测细胞表型。三种巨噬细胞形态有明显的不同,PAM较大,表面粗糙,PIM和IM较小,并且细胞光滑;PAM细胞大多为CD163阳性,IM和PIM则CD86阳性较多。PAM、PIM、IM在形态和表型上存在异质性。 展开更多

关键词 猪肺泡巨噬细胞 猪肺血管巨噬细胞 猪肺间质巨噬细胞

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用位点杂交法检测自然感染仔猪肺中PRRSV核酸

9

作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1999年第5期6-6,共1页

韩国研究人员用位点杂交法研究了7头自然感染仔猪福尔马林固定石蜡包埋肺组织中猪繁殖和呼吸道综合征病毒(PRRSV)的复制,本法使用洋地黄毒苷标记的探针。用PCR生成一个433bp cDNA探针,该探针可用于编码一个Korean PRRSV分离物核壳体蛋... 韩国研究人员用位点杂交法研究了7头自然感染仔猪福尔马林固定石蜡包埋肺组织中猪繁殖和呼吸道综合征病毒(PRRSV)的复制,本法使用洋地黄毒苷标记的探针。用PCR生成一个433bp cDNA探针,该探针可用于编码一个Korean PRRSV分离物核壳体蛋白的病毒RNA。所有7头用PRRSV感染的仔猪都表现清晰的阳性信号,散布于整个肺泡隔与间隙。 展开更多

关键词 PrrSV 自然感染 杂交法 呼吸道综合征 核壳体蛋白 CDNA探针 肺泡巨噬细胞 石蜡包埋 猪肺 位点杂交

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猪肺巨噬细胞源IFN-λ1的分子克隆、表达与活性分析 被引量：2

10

作者 许汪 杜寿文 +11 位作者 曹婷婷 郑威 白杰英 田明尧 王茂鹏 赵飞 朱羿龙 孙文超 刘立明 赵翠青 李昌 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期692-699,共8页

Ⅲ型干扰素（interferonlambda，IFN-λ）在机体抗病毒固有免疫、适应性免疫、黏膜免疫及抗肿瘤免疫等方面发挥重要作用。本研究利用RT—PCR技术从猪肺巨噬细胞CRL2845中扩增获得猪IFN—x1基因（pIFN—λ1），并进行遗传进化分析和信号... Ⅲ型干扰素（interferonlambda，IFN-λ）在机体抗病毒固有免疫、适应性免疫、黏膜免疫及抗肿瘤免疫等方面发挥重要作用。本研究利用RT—PCR技术从猪肺巨噬细胞CRL2845中扩增获得猪IFN—x1基因（pIFN—λ1），并进行遗传进化分析和信号肽预测；将含信号肽的pIFNX1基因分别克隆至真核表达载体pcDNA3．1中，通过常规的质粒转化、阳性茵落筛选、质粒提取及酶切鉴定，获得重组质粒pcDNA-plFNλ1；利用脂质体转染CRL2845细胞，转染48h后通过qRTPCR、Westernblot、间接免疫荧光方法分析pIFNX1表达及胞内定位；收集转染细胞总RNA，通过qRT—PCR方法分析OAS1、ISG15、PKR、WITM3等干扰素刺激基因的表达，并利用舍报告基因的痘病毒VTT—EGFP感染瞬时表达pIFN—λ1的CRL2845细胞，通过流式细胞术分析pIFN—λ1抗痘病毒效果。结果显示，成功在猪肺巨噬细胞中扩增获得pIFN—λ1基因，并在CRL2845细胞内成功表达；瞬时表达后选择性诱导OAS1、ISG15的表达，并可抑制约38％的痘苗病毒感染CRL2845细胞。结果表明，瞬时表达pIFN—λ1能选择性诱导部分干扰素刺激基因的表达，且具有抗病毒活性，为深入研究猪IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用奠定基础。 展开更多

关键词 猪IFNλ1 猪肺巨噬细胞 干扰素刺激基因 抗病毒活性

原文传递

猪肺磷脂注射液联合经鼻间歇正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征的临床疗效及其对血清人高迁移率族蛋白B1、重组人巨噬细胞移动抑制因子水平的影响 被引量：20

11

作者 刘艳妮 姚艳粉 《实用心脑肺血管病杂志》 2019年第6期94-97,共4页

目的 分析猪肺磷脂注射液联合经鼻间歇正压通气(NIPPV)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的临床疗效及其对血清人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、重组人巨噬细胞移动抑制因子(MIF1)水平的影响。方法 选取2015年7月—2018年8月山东省立第三医院... 目的 分析猪肺磷脂注射液联合经鼻间歇正压通气(NIPPV)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的临床疗效及其对血清人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、重组人巨噬细胞移动抑制因子(MIF1)水平的影响。方法 选取2015年7月—2018年8月山东省立第三医院第二新生儿病房收治的NRDS患儿80例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组40例。两组患儿均给予常规治疗及NIPPV,观察组患儿同时给予猪肺磷脂注射液;两组患儿均连续治疗2周。比较两组患儿临床疗效,辅助通气时间及氧疗时间,治疗前后动脉血气分析指标〔包括动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)〕及血清HMGB1、MIF1水平,并观察两组患儿治疗期间不良反应发生情况。结果 (1)观察组患儿临床疗效优于对照组(P<0.05)。(2)观察组患儿辅助通气时间、氧疗时间短于对照组(P<0.05)。(3)治疗前两组患儿PaO2、PaCO2、SaO2比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患儿PaO2、SaO2高于对照组,PaCO2低于对照组(P<0.05)。(4)治疗前两组患儿血清HMGB1、MIF1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患儿血清HMGB1、MIF1水平低于对照组(P<0.05)。(5)两组患儿治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 猪肺磷脂注射液联合NIPPV治疗NRDS的临床疗效确切,可有效改善患儿动脉血气指标及通气状况,降低血清HMGB1、MIF1水平,有利于减轻患儿炎性反应及肺组织损伤程度,且安全性较高。 展开更多

关键词 呼吸窘迫综合征 新生儿 肺表面活性剂 猪肺磷脂注射液 经鼻间歇正压通气 人高迁移率族蛋白B1 重组人巨噬细胞移动抑制因子 治疗结果

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PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用 被引量：17

12

作者 彭长凌 高崧 刘秀梵 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期256-260,共5页

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗... 以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗体。PRRSV+PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀,PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀,对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM进行抹片,同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明,用所获得的3 株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外,用IIF检测7 头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片,其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应;对这2头猪的肺组织进行病毒分离,在盲传到第4代时Marc 145细胞上产生明显的细胞病变,进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠,且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。 展开更多

关键词 PrrSV 荧光检测法 猪生殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 单克隆抗体 应用 肺泡巨噬细胞 间接免疫荧光 联合感染 肺组织 ATCC 检查试验 临床表现 采食情况 血清抗体 人工感染 阳性反应 病毒分离 细胞病变 临床样品 抗体检测

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猪源IFN-λ3的克隆、表达及抗病毒活性分析 被引量：3

13

作者 陈竞 许汪 +6 位作者 宋利娜 郝鹏飞 姜宇航 付婷婷 金鑫 金宁一 李昌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期32-37,共6页

为了解猪源IFN-λ3的体外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞(CRL2845)中扩增获得猪源IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48 h后通... 为了解猪源IFN-λ3的体外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞(CRL2845)中扩增获得猪源IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48 h后通过Western blot分析pIFN-λ3瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于PK15、MDCK细胞进行pIFN-λ3抗病毒活性分析。结果显示,本研究成功扩增获得pIFN-λ3基因,并在293细胞内成功表达;瞬时表达能够抑制表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus-green fluorescent protein,VSVG)在PK15、MDCK细胞上的增殖。本研究结果为深入研究猪源IFN-λ3在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用提供参考和依据。 展开更多

关键词 猪IFN-λ3 猪肺巨噬细胞 抗病毒活性

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HPS OmpP2膜外结构环诱导PAMs IL-8 mRNA转录的研究 被引量：2

14

作者 罗银珠 贺现辉 +5 位作者 周素明 冯赛祥 姚文凤 徐成刚 廖明 辛朝安 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期3-6,共4页

OmpP2是副猪嗜血杆菌的致病因子,也是其重要的免疫原性蛋白。为探明OmpP2蛋白8个膜外结构环(Loop)在HPS感染过程中的促炎作用,本试验以猪肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophages,PAMs)为细胞模型,以HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白、HP... OmpP2是副猪嗜血杆菌的致病因子,也是其重要的免疫原性蛋白。为探明OmpP2蛋白8个膜外结构环(Loop)在HPS感染过程中的促炎作用,本试验以猪肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophages,PAMs)为细胞模型,以HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白、HPS血清5型标准菌株全菌体及牛血清白蛋白(BSA)作为参照,通过Real-Time PCR的方法研究OmpP2 8个膜外结构环诱导PAMs产生炎性应答的作用。结果显示,与空白对照组相比,HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白膜外结构环均能诱导PAMs细胞使其促炎细胞因子IL-8的转录水平出现不同程度的上调,表明它们在HPS感染过程中参与了宿主肺泡巨噬细胞的促炎性免疫应答;在8个膜外结构环中,Loop7(2^(-△△Ct)≈8,P<0.05)表现出非常显著的刺激活性,远远高于其他膜外结构环组,并与HPS血清5型标准菌株OmpP2蛋白组的诱导上调幅度(2^(-△△Ct)≈12(P<0.05))最接近,表明Loop7在OmpP2蛋白诱导PAMsIL-8促炎性免疫应答过程中扮演着重要角色,结果暗示Loop7很可能是OmpP2致宿主肺巨噬细胞促炎性功能活跃区。本试验为进一步了解OmpP2蛋白功能及了解HPS诱导宿主细胞炎症反应分子机制提供实验基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 OmpP2 膜外结构环 猪肺巨噬细胞 细胞因子 IL-8

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干扰素基因刺激因子基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响 被引量：4

15

作者 侯璐 王一 +9 位作者 张爽 李国利 曾磊 郭玉堃 翟云云 于朋伟 王棋 王春凤 杜永坤 万博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2273-2282,共10页

研究干扰素基因刺激因子(STING)基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响。用CRISPR/Cas9技术敲除猪肺巨噬细胞系(3D4/21)的STING基因,用T7核酸酶检测靶基因敲除效率,用细胞计数试剂盒检测基因敲除细胞的活力,用表达绿色荧光蛋白(GFP)... 研究干扰素基因刺激因子(STING)基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响。用CRISPR/Cas9技术敲除猪肺巨噬细胞系(3D4/21)的STING基因,用T7核酸酶检测靶基因敲除效率,用细胞计数试剂盒检测基因敲除细胞的活力,用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组病毒PRV-GFP感染基因敲除细胞,用流式细胞术检测感染细胞的荧光强度,用定量RT-PCR检测PRV的gB、TK基因表达及其感染细胞的IL-1β、IFN-β、ISG15基因转录,用Western blot检测PRV gE蛋白表达水平,用病毒滴定法测定子代病毒滴度。结果显示:设计的3个STING基因外显子2特异sgRNA均能切割3D4/21细胞的靶序列,其中sgRNA3的基因编辑效率最高;对sgRNA1介导STING基因敲除系进行克隆化,获得基因敲除细胞系3株,基因敲除对细胞活力无影响;亲本细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占80.77%,STING基因敲除细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占95.55%;STING基因敲除对PRV基因表达具有促进作用,亲本3D4/21细胞的病毒滴度为106.2 TCID50·0.1 mL^-1,STING基因敲除细胞的病毒滴度为108.3TCID50·0.1 mL^-1,病毒感染细胞的IL-1β、IFN-β和ISG15转录下调明显。STING基因敲除能促进PRV在3D4/21细胞中复制,可能与感染细胞的IL-β、IFN-β和ISG15表达抑制有关。 展开更多

关键词 CrISPr/Cas9 干扰素基因刺激因子 猪肺巨噬细胞 伪狂犬病病毒

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miRNA调控PRRSV增殖的研究进展 被引量：1

16

作者 樊宏超 姚睿智 +1 位作者 邓清华 马德慧 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期77-79,82,共4页

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以导致怀孕母猪流产和仔猪呼吸困难为主要特征的疾病,PRR... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以导致怀孕母猪流产和仔猪呼吸困难为主要特征的疾病,PRRS已给养猪业造成巨大的经济损失。微RNA(miRNA)是一类重要的转录后调控基因表达的微小RNA分子,广泛存在于各种生物体内。文章综述了miRNA-23、miRNA-26、miRNA-29、miRNA-125、miRNA-181、miRNA-506对PRRSV在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)或非洲绿猴肾上皮细胞(african green monkey kidney epithelial cell line,Marc-145)中复制的调控作用。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PrrS) 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PrrSV) 微rNA(mirNA) 猪肺 泡巨噬细胞(PAM) 非洲绿猴肾上皮细胞(Marc-145) 调控作用

原文传递

血小板受体FcγRⅡA免疫学功能研究

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作者 张钊 周向慧 +1 位作者 程志鹏 胡豫 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期609-614,共6页

血小板是来源于巨噬细胞的无核片段,广泛分布于人体血液循环中,其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用[1]。近年来的研究表明,血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用[2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体... 血小板是来源于巨噬细胞的无核片段,广泛分布于人体血液循环中,其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用[1]。近年来的研究表明,血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用[2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体的识别、影响内皮屏障功能和改变血管通透性、释放储存的炎症因子、与白细胞相互作用并进行信号传导以及通过表面受体进行免疫调节[3,4]。近年来,针对血小板表面受体调节免疫信号的研究取得了明显进展,相关受体包括Toll样受体(TLR)、血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)、血小板Fc受体FcγRⅡA、钙离子依赖型凝集素样受体-2(CLEC-2)、血小板内皮黏附分子-1(PECAM-1)、癌胚抗原相关黏附分子-1(CEACAM-1)和髓样细胞触发受体样转录因子-1(TLT-1)等[5]。其中血小板表面受体FcγRⅡA是一种对单体免疫球蛋白(Ig)G具有低亲和力而对含IgG免疫复合物具有高亲和力的受体,无论是IgG单体还是免疫复合物中的IgG都通过Fc片段与FcγRⅡA结合。此外,FcγRⅡA也广泛分布在于巨噬细胞、中性粒细胞、部分树突细胞及其他细胞[6],在血小板介导的各类免疫反应中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 人体血液循环 fcγr 免疫复合物 血管通透性 巨噬细胞 免疫学功能 癌胚抗原 树突细胞

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PRRSV感染对PAM IFI30基因表达的影响 被引量：8

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作者 李传民 张晓军 +3 位作者 郭将 丁壮 赵志辉 孙博兴 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期112-115,共4页

干扰素γ诱导蛋白30(interferon,gamma-inducible protein 30,IFI30)在MHC-Ⅱ限制性抗原加工递呈过程和MHC-Ⅰ限制性抗原交叉递呈过程中起关键性作用。利用3个不同浓度PRRSV感染猪肺支气管巨噬细胞(PAM),应用qPCR在不同时间点检测IFI30... 干扰素γ诱导蛋白30(interferon,gamma-inducible protein 30,IFI30)在MHC-Ⅱ限制性抗原加工递呈过程和MHC-Ⅰ限制性抗原交叉递呈过程中起关键性作用。利用3个不同浓度PRRSV感染猪肺支气管巨噬细胞(PAM),应用qPCR在不同时间点检测IFI30基因表达水平。结果表明:0.08,0.10,0.12 MOI 3个剂量PRRSV感染PAM,IFI30基因表达差异不显著(P>0.05);PRRSV感染1.5 h IFI30表达量降低,但差异不显著(P>0.05),之后表达量上调;在感染后12,24,36 h IFI30基因表达量极显著提高(P<0.01),之后IFI30基因表达量有所下降(P<0.05)。IFI30基因在PRRSV感染PAM过程中表达量的变化,可能是PRRSV与宿主相互作用的机制之一。 展开更多

关键词 猪肺气泡巨噬细胞 猪繁殖与呼吸综合征病毒 IFI30基因

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大剂量免疫球蛋白对抑制性受体的免疫调控作用 被引量：9

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作者 张爱民 郑军华 +1 位作者 陈涛涌 闵志廉 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期354-356,共3页

目的　通过观察大剂量免疫球蛋白 (IVIG)作用前后某些免疫细胞表面抗体活化性受体 (FcγRIIa)和抑制性受体 (FcγRIIb)的表达 ,探讨IVIG免疫调节作用的机理。方法　运用RT PCR、Westernblot和FACS的方法来检测某些免疫效应细胞表面的Fc... 目的　通过观察大剂量免疫球蛋白 (IVIG)作用前后某些免疫细胞表面抗体活化性受体 (FcγRIIa)和抑制性受体 (FcγRIIb)的表达 ,探讨IVIG免疫调节作用的机理。方法　运用RT PCR、Westernblot和FACS的方法来检测某些免疫效应细胞表面的FcγRIIa和FcγRIIb的表达 ,并观察IVIG作用前后两者的表达差异。结果　FcγRIIa主要表达于单核巨噬细胞 ,在B细胞和T细胞中没有表达。FcγRIIb在检测的细胞中无表达。在组织淋巴瘤U937细胞中FcγRIIa的表达量比较高。U937细胞在经过IVIG作用后 ,抑制性FcγRIIb的表达逐渐升高 ,2 4h时表达达到最高。在IVIG作用后 ,FcγRIIb的表达在蛋白水平也逐渐增高 ,与RT PCR的结果一致 ;U937细胞表面的FcγRIIb表达显著增高 ,表现为荧光强度峰值的增强和右移。用IVIG治疗的患者 ,单核巨噬细胞表面的FcγRIIb的表达比正常人外周血单核巨噬细胞明显增加。结论　IVIG的免疫调节作用可部分归因于增加某些免疫效应细胞表面抗体抑制性受体FcγRIIb的表达。 展开更多

关键词 fcγrⅡb 表达量 IVIG 抑制性受体 U937细胞 大剂量 免疫球蛋白 表达差异 荧光强度 单核巨噬细胞

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