吉林省部分地区牛瑟氏泰勒虫病流行病学调查 被引量：9

1

作者 胡诗悦 张守发 +4 位作者 钱年超 贾立军 薛书江 孙柯楠 林文娟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期539-541,共3页

为了解吉林省牛瑟氏泰勒虫病的流行情况,本研究采用PCR方法和血涂片染色镜检法对采自吉林省6个地区的234份牛血液样品进行了检测,并对不同地区、不同饲养方式、不同地理条件以及不同年龄间牛瑟氏泰勒虫的感染情况进行了比较分析。结果显... 为了解吉林省牛瑟氏泰勒虫病的流行情况,本研究采用PCR方法和血涂片染色镜检法对采自吉林省6个地区的234份牛血液样品进行了检测,并对不同地区、不同饲养方式、不同地理条件以及不同年龄间牛瑟氏泰勒虫的感染情况进行了比较分析。结果显示,PCR方法检测的样本阳性率为53.4%(125/234),而血涂片染色镜检法检测的阳性率为12.4%(29/234)。经统计学分析,不同年龄间,牛瑟氏泰勒虫感染率差异显著(p<0.05);而不同地区、不同饲养方式以及不同地理条件之间牛瑟氏泰勒虫感染率差异极显著(p<0.01);调查结果表明,吉林省是牛瑟氏泰勒虫病的流行地区,尤其珲春地区牛瑟氏泰勒虫病感染严重。本次调查为吉林省牛瑟氏泰勒虫病的防控提供了依据。 展开更多

关键词 吉林省 牛瑟氏泰勒虫病 分子流行病学 PCR 调查

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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：8

2

作者 金春梅 许应天 +2 位作者 张守发 鲁承 于龙政 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-114,119,共4页

为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定... 为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白 克隆 序列分析

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牛瑟氏泰勒虫P33-P23核酸疫苗研究 被引量：5

3

作者 李娟 许应天 +5 位作者 张西臣 李建华 张国才 宫鹏涛 杨举 孟丹 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1171-1173,1180,共4页

根据牛瑟氏泰勒虫主要表面蛋白基因p23和p33的已知序列,设计特异性引物,将克隆产物与pVAX1表达载体连接,得到真核重组表达质粒pVAX1-p33-p23,脂质体介导其转染Hela细胞后进行表达产物的鉴定,最后进行BALB/c小鼠免疫试验。结果,目的基因... 根据牛瑟氏泰勒虫主要表面蛋白基因p23和p33的已知序列,设计特异性引物,将克隆产物与pVAX1表达载体连接,得到真核重组表达质粒pVAX1-p33-p23,脂质体介导其转染Hela细胞后进行表达产物的鉴定,最后进行BALB/c小鼠免疫试验。结果,目的基因在真核细胞内得到正确表达,动物免疫试验pVAX1-p33-p23核酸疫苗能够提高小鼠的细胞免疫和体液免疫水平,并且pVAX1-p33-p23免疫组的免疫效果均高于pVAX1-P33和pVAX1-P23免疫组(P<0.05)。从而证明,牛瑟氏泰勒虫的重组pVAX1-p33-p23核酸疫苗成功构建。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33 P23 真核表达

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牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立 被引量：7

4

作者 王中光 张守发 +4 位作者 曹世诺 贾立军 薛书江 田万年 王暖成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期108-111,共4页

为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显... 为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,扩增产物经显色、电泳、酶切鉴定后,LAMP方法扩增牛T.sergenti产物检测管显色后呈阳性反应,最低检测量为2.3fg/μL模板DNA,比普通PCR高10倍,牛T.sergenti LAMP产物电泳后呈特征性梯状条带,而弓形虫等对照组均无扩增条带。说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛T.sergenti的检测。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白基因 环介导等温扩增技术

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牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达 被引量：4

5

作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 周末 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期866-869,874,共5页

为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶... 为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P23表面蛋白基因 P33表面蛋白基因 融合基因表达

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牛瑟氏泰勒虫MPSP双表位基因的克隆及原核表达 被引量：3

6

作者 钱年超 贾立军 +2 位作者 薛书江 张影 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期790-793,共4页

为了探究表位疫苗是否可以应用于预防牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),根据MPSP(Majorpiroplasm surface protein)基因序列(FJ515689.1)设计合成了2对引物,以T.sergenti基因组DNA为模板,通过SOE-PCR扩增出长约361 bp的双表位基因融合... 为了探究表位疫苗是否可以应用于预防牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti),根据MPSP(Majorpiroplasm surface protein)基因序列(FJ515689.1)设计合成了2对引物,以T.sergenti基因组DNA为模板,通过SOE-PCR扩增出长约361 bp的双表位基因融合片段,2个表位基因通过linker(Gly4Ser)3相连。将该片段连接pGEX-4T-2,构建pGEX-4T-E1-2重组表达载体,转化BL2l,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳显示表达了约39 ku的融合蛋白。Western blot分析表明该双表位重组蛋白可与T.sergenti阳性血清发生特异性反应,表明融合蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 MPSP 表位 原核表达

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牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法的建立 被引量：4

7

作者 王轶男 贾立军 +3 位作者 薛书江 张影 钱年超 张守发 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期80-82,共3页

本试验根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫ITS基因序列(AY661522.1),应用Primer Premier 5.0和Oligo 6.31软件设计合成1对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,建立了牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法。该方法扩增片段大小为1020 bp,与参... 本试验根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫ITS基因序列(AY661522.1),应用Primer Premier 5.0和Oligo 6.31软件设计合成1对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,建立了牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法。该方法扩增片段大小为1020 bp,与参考序列的同源性为98%;建立的PCR方法与猪附红细胞体、犬新孢子虫和弓形虫均无交叉反应,最低DNA检出量为1.5 pg/μL;通过对60份临床样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异、敏感等特点,适用于牛瑟氏泰勒虫的检测。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 ITS基因 PCR

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牛瑟氏泰勒虫双拷贝p33表面蛋白基因在原核细胞中的串联表达 被引量：3

8

作者 杨兴 许应天 +2 位作者 张守发 沈岩 白雪梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期647-649,共3页

为串联融合表达牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)p33表面蛋白,本研究根据GenBank中登录的T.sergenti p33基因序列(D87198),在去掉信号肽的部分设计两对引物。PCR扩增出两段相同的p33基因(p331、p332),大小均为684bp,并将两个基因片段... 为串联融合表达牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)p33表面蛋白,本研究根据GenBank中登录的T.sergenti p33基因序列(D87198),在去掉信号肽的部分设计两对引物。PCR扩增出两段相同的p33基因(p331、p332),大小均为684bp,并将两个基因片段按顺序依次插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建pGEX-p331-p332(2p33)。将pGEX-2p33重组质粒转化E.coli BL21中进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示,该融合蛋白获得了高效表达,分子量约为80ku,表达产物以包涵体的形式存在。Western blot试验表明,融合蛋白可被T.sergenti阳性血清识别,具有较好的反应原性。该蛋白的串联融合表达为T.sergenti新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 p33蛋白 串联表达

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牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与原核表达 被引量：2

9

作者 李春花 张西臣 +1 位作者 张守发 许应天 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期292-295,共4页

本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%。将该基因与pET-28a... 本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因设计1对引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫全血基因组DNA,PCR扩增得到了大小为786 bp的基因片断,测序分析证明,它与已报道序列的核苷酸同源性可达99%。将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了含有目的基因片段的重组表达载体pET-28a-P33。将此质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,用IPTG进行诱导。结果证实,该基因在大肠杆菌中用IPTG诱导4 h时表达量达到高峰,表达产物为分子质量约30.3 ku的融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的43%,以包涵体形式存在;Western blotting试验证明,表达蛋白P33可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白基因 原核表达

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牛瑟氏泰勒虫P23基因的克隆与生物信息学分析 被引量：3

10

作者 金春梅 张守发 于龙政 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第24期10381-10382,共2页

[目的]为研制牛瑟氏泰勒虫病基因工程苗和诊断试剂盒提供依据。[方法]通过PCR方法从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中克隆了1个P23基因,连接到pGEM-T-Easy载体中。运用生物信息学方法对该基因进行分析。[结果]P23基因全长为684 bp,包含1个长672... [目的]为研制牛瑟氏泰勒虫病基因工程苗和诊断试剂盒提供依据。[方法]通过PCR方法从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中克隆了1个P23基因,连接到pGEM-T-Easy载体中。运用生物信息学方法对该基因进行分析。[结果]P23基因全长为684 bp,包含1个长672 bp的开放阅读框,编码223个氨基酸,相对分子量是25.886 kD,等电点pI为9.22,包括1段19个氨基酸组成的信号肽和2段跨膜区。该序列在GenBank上的注册号为EU573168,与瑟氏泰勒虫Chitose型(D84446)和Ikeda型(D84447)的同源性分别为99%、90%。[结论]P23基因编码的蛋白有较好稳定性和免疫原性,可作为制备牛瑟氏泰勒虫基因疫苗的候补抗原。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P23基因 克隆 生物信息学

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奶牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：2

11

作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 柴方红 张守发 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第3期15-17,共3页

研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明... 研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明:10份样品中9份为阳性,所扩增的目的基因核苷酸长为868bp,共编码283个氨基酸;该段基因片段与牛泰勒虫韩国株核苷酸序列同源性为99·4%,氨基酸同源性为99·3%。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33表面蛋白基因序列 克隆 序列分析

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牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70的克隆与原核表达重组质粒的构建 被引量：1

12

作者 王轶男 贾立军 +3 位作者 薛书江 胡诗悦 钱年超 张守发 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第2期60-63,共4页

为了构建牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70(HSP70)基因片段原核重组表达质粒,本试验根据Gen-Bank上登录的牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70基因序列(D12692.1),应用Primer Premier 5.0软件设计合成一对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,扩增片段大... 为了构建牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70(HSP70)基因片段原核重组表达质粒,本试验根据Gen-Bank上登录的牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70基因序列(D12692.1),应用Primer Premier 5.0软件设计合成一对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,扩增片段大小为1 692bp,与参考序列的同源性为99%。将该基因与pET-28a(+)载体进行连接,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSP70,本试验为进一步研究牛瑟氏泰勒虫HSP70基因佐剂作用、研制基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 热休克蛋白70 重组质粒

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牛瑟氏泰勒虫HSP70 cDNA片段的克隆与系统发育分析 被引量：1

13

作者 曹世诺 于龙政 +2 位作者 薛书江 贾立军 张守发 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第1期21-24,共4页

从血液涂片检查为牛瑟氏泰勒虫阳性的病牛血液中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP70基因,将其重组到pMD-18TSimple载体后进行克隆、序列测定及分析。结果表明该片段长1 966 bp,编码620个氨基酸残基,将该基因片段序列与Gen... 从血液涂片检查为牛瑟氏泰勒虫阳性的病牛血液中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP70基因,将其重组到pMD-18TSimple载体后进行克隆、序列测定及分析。结果表明该片段长1 966 bp,编码620个氨基酸残基,将该基因片段序列与GenBank中13种已知梨形虫的相应序列进行比较分析,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与已报道的牛瑟氏泰勒虫亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫,与马巴贝斯虫亲缘关系较远。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 HSP70基因 RT—PCR 系统发育树

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牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达 被引量：1

14

作者 常巧呈 李太元 +3 位作者 许应天 李艳茹 谷长维 陈媛媛 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2008年第5期14-17,共4页

目的构建牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达载体。方法根据已发表的牛瑟氏泰勒虫(Thei-leria sergenti)表面蛋白p33基因的核苷酸序列设计引物,应用PCR技术从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中扩增p33基因片段并克隆入pMD18-Tsimple载体。进... 目的构建牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达载体。方法根据已发表的牛瑟氏泰勒虫(Thei-leria sergenti)表面蛋白p33基因的核苷酸序列设计引物,应用PCR技术从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中扩增p33基因片段并克隆入pMD18-Tsimple载体。进一步将该基因插入到真核表达载体pVAXⅠ,转染Hela细胞后进行RT-PCR检测和IFA检测。结果牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p3基因成连接到pVAXⅠ载体中,并在真核细胞中有效表达。结论本研究试验为今后该基因的进一步动物试验奠定了基础。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P33 真核表达

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牛瑟氏泰勒虫P23主要表面蛋白基因的克隆及原核表达 被引量：1

15

作者 李文学 李海峰 金清洙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第16期8462-8465,8483,共5页

[目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达。[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX... [目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达。[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒pGEX-4T-P23,转化宿主菌BL21获得重组菌。通过对诱导条件的优化,根据SDS-PAGE确定表达蛋白的最佳表达条件;Western-blotting检测表达蛋白的反应原性。[结果]所克隆的牛瑟氏泰勒虫P23基因片段长507 bp,与牛瑟氏泰勒虫日本株P23基因的核苷酸同源性达99.4%,表达的融合蛋白大小约为46 ku;诱导时机以接种培养后2 h为最佳,诱导时间以6 h为最佳,诱导温度以34℃为最佳,0.008-1.000 mmol/L的IPTG对表达量的影响不大。Western blotting检测表明该蛋白具有较好的抗原性。[结论]为牛瑟氏泰勒虫病的免疫学诊断和预防等研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 重组P23表面蛋白 大肠杆菌 表达条件

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牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：1

16

作者 钱年超 张守发 《延边大学农学学报》 2009年第1期53-56,共4页

从病牛血液中提取总RNA,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫HSP 70基因序列设计合成1对引物,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP 70基因,并将该基因克隆到pMD18-T Si mple载体上,经PCR鉴定和EcoRⅠ、SalⅠ双酶切鉴定为阳性的重组质粒测... 从病牛血液中提取总RNA,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫HSP 70基因序列设计合成1对引物,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP 70基因,并将该基因克隆到pMD18-T Si mple载体上,经PCR鉴定和EcoRⅠ、SalⅠ双酶切鉴定为阳性的重组质粒测定及分析结果表明,该片段长1 966 bp,编码620个氨基酸残基.同源性分析表明,该序列与牛瑟氏泰勒虫HSP 70基因同源性为95.78%. 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 热休克蛋白 序列分析

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牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学分析

17

作者 沈岩 许应天 +2 位作者 李静 栾杨 杨兴 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第31期15175-15176,15182,共3页

为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计2对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,对测序结果... 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计2对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,对测序结果用DNAMAN软件对其与GenBank上8个虫株相关序列进行同源性比较,建立系统发育树。结果显示,牛瑟氏泰勒虫中国延边株的18SrRNA基因大小为1 744 bp,瑟氏泰勒虫延边株、兰州株、日本株以及水牛泰勒虫中国株彼此之间亲缘关系最近;瑟氏泰勒虫延边株与突变泰勒虫亲缘关系较远。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 18S RRNA基因 克隆 分子分类学

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牛瑟氏泰勒虫HSP70基因的克隆及原核表达

18

作者 金超 贾立军 +3 位作者 薛书江 王娜 钱年超 张守发 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期16-18,共3页

根据GenBank(D12692.1)上发表的牛瑟氏泰勒虫HSP70基因序列设计、合成1对特异性的引物,采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫HSP70基因片段,将扩增产物与pMD18-Tsimple载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序;用pGEX-4T-1表达载体构建重组质粒p... 根据GenBank(D12692.1)上发表的牛瑟氏泰勒虫HSP70基因序列设计、合成1对特异性的引物,采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫HSP70基因片段,将扩增产物与pMD18-Tsimple载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序;用pGEX-4T-1表达载体构建重组质粒pGEX-HSP70,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果表明:扩增的HSP70基因与D12692.1序列同源性为99.3%;表达的融合蛋白分子质量约为68ku,而且可与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生特异性反应。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 HSP70 克隆 原核表达

原文传递

荧光定量PCR检测牛瑟氏泰勒虫方法的建立

19

作者 王轶男 胡诗悦 +3 位作者 陈洪涛 金春梅 金一 于龙政 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期33-37,共5页

本试验旨在建立快速诊断牛瑟氏泰勒虫的荧光定量PCR检测方法。以常规PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P33基因,将其克隆至载体pMD-18T,然后进行质粒标准品的构建,以此为模板建立牛瑟氏泰勒虫P33基因TaqMan荧光定量PCR和SYBR Green荧光定量PCR检... 本试验旨在建立快速诊断牛瑟氏泰勒虫的荧光定量PCR检测方法。以常规PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P33基因,将其克隆至载体pMD-18T,然后进行质粒标准品的构建,以此为模板建立牛瑟氏泰勒虫P33基因TaqMan荧光定量PCR和SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示:2种方法均能检测到2.26~2.26×10^(8)copies/μL范围,特异性试验中与其他病原体均无特异性扩增曲线,批内和批间变异系数都小于4%。鉴于2种方法均具有较好的敏感性、特异性和重复性,适用于牛瑟氏泰勒虫P33基因的临床实验室鉴别。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 荧光定量PCR P33基因 检测方法

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牛瑟氏泰勒虫吉林株18S rRNA基因的扩增及系统发育研究

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作者 曹世诺 牟伟峰 +3 位作者 于龙政 薛书江 贾立军 张守发 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第10期14-17,共4页

本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列... 本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列与GenBank中8种已知泰勒虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与水牛泰勒虫亲缘关系最近,与小泰勒虫亲缘关系较远。这一结果说明宿主因素对泰勒虫的基因型影响较大。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 PCR 18S RRNA 系统发育树

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