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BD FACSAria流式分选仪无菌制备流程的优化
1
作者 杨欢 郭英华 +3 位作者 张雪芳 罗佳 杜立颖 吕红霞 《实验科学与技术》 2025年第2期128-132,共5页
为优化BD FACSAria流式分选仪无菌制备和无菌维护的流程,以保持设备长期稳定的无菌分选状态,从无菌制备的成本、操作流程和系统稳定性等方面进行优化,探索了LB培养基监测管路无菌状态的方法,并对HCT116细胞无菌分选状态及长期培养情况... 为优化BD FACSAria流式分选仪无菌制备和无菌维护的流程,以保持设备长期稳定的无菌分选状态,从无菌制备的成本、操作流程和系统稳定性等方面进行优化,探索了LB培养基监测管路无菌状态的方法,并对HCT116细胞无菌分选状态及长期培养情况进行观察。优化后的无菌制备方法简化了操作流程、节约了成本,能够长期保持仪器液管的无菌状态;HCT116结直肠癌细胞分选后在无双抗培养基中长期培养状态良好且未出现污染的情况。优化的BD FACSAria分选仪无菌制备方法及维护流程为仪器的运行和管理提供了简单可行的方案,为科研工作提供更加优质稳定的无菌分选技术服务。 展开更多
关键词 流式分选仪 无菌制备优化 无菌维护 无菌分选
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流式分选仪的创新调试及在初始T细胞纯化中的应用
2
作者 万雅娟 王瑞 +2 位作者 张松 周颖 龙加福 《实验科学与技术》 2024年第2期8-13,共6页
针对敏感细胞样本如何调试流式分选仪以获得高纯度、高活性的分选产物是众多流式分选从业者关注的问题。该文以流式分选仪FACSAria Fusion为例,首创性地将工程师调试界面与用户调试界面相结合调整系统默认最低样品进样压力,并配合85μm... 针对敏感细胞样本如何调试流式分选仪以获得高纯度、高活性的分选产物是众多流式分选从业者关注的问题。该文以流式分选仪FACSAria Fusion为例,首创性地将工程师调试界面与用户调试界面相结合调整系统默认最低样品进样压力,并配合85μm喷嘴,按照用户常规操作流程,在流速1.0的情况下对小鼠原代初始T细胞进行纯化,并对产物的质量进行检测。结果证明阐述的调试方法可以成功地获得高纯度初始T细胞,并且诱导分化成的调节T细胞产生特异转录因子Foxp3的能力与未分选细胞相当。 展开更多
关键词 流式分选 进样压力 初始T细胞 调节T细胞 FOXP3
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流式分选仪FACSAriaⅡ分选GFP阳性乳腺癌MCF-7细胞株的条件优化研究 被引量：11
3
作者 郭陈智 史桂英 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期127-130,共4页
目的研究流式分选仪FACSAriaⅡ分选绿色荧光蛋白(GFP)阳性乳腺癌MCF-7细胞株时不同条件选择对分选后细胞的纯度、得率和活性的影响。方法流式分选仪FACSAriaⅡ分别选择70、85和100μm三种喷嘴以及4-way purity、purity、yield三种分选... 目的研究流式分选仪FACSAriaⅡ分选绿色荧光蛋白(GFP)阳性乳腺癌MCF-7细胞株时不同条件选择对分选后细胞的纯度、得率和活性的影响。方法流式分选仪FACSAriaⅡ分别选择70、85和100μm三种喷嘴以及4-way purity、purity、yield三种分选模式分选MCF-7细胞的GFP阳性稳转株,计数分选后的细胞并计算分选得率,流式细胞术检测分选细胞的纯度,锥虫蓝染色法检测分选细胞的活性。结果 70、85和100μm三种喷嘴分选GFP阳性细胞纯度均达99%以上,分选得率分别为(37.67±2.05)%、(56.33±2.62)%和(43.33±0.47)%,活细胞比例分别为(88.23±0.97)%、(91.87±1.05)%和(95.33±0.90)%;选择85μm喷嘴,4-way purity、purity和yield三种分选模式分选细胞的得率分别为(51.00±2.45)%、(67.33±2.05)%和(74.00±0.82)%,纯度分别为99.6%、99.3%和96.2%。结论流式分选仪FACSAriaⅡ分选乳腺癌MCF-7细胞GFP阳性稳转株,选择85μm喷嘴以及purity分选模式较合适。 展开更多
关键词 流式分选 喷嘴 分选模式 纯度 得率
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小麦流式分选染色体的鉴定 被引量：2
4
作者 郭东伟 胡甘 +4 位作者 佘茂云 李连城 陈明 徐兆师 马有志 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期89-94,共6页
构建染色体BAC文库对于简化拥有庞大基因组植物的测序、物理作图和基因克隆具有重要意义。分选染色体的鉴定是整个文库构建过程的关键环节之一。本文在前人研究的基础上,分别采用荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(C-PRINS)和PCR方法,对分选... 构建染色体BAC文库对于简化拥有庞大基因组植物的测序、物理作图和基因克隆具有重要意义。分选染色体的鉴定是整个文库构建过程的关键环节之一。本文在前人研究的基础上,分别采用荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(C-PRINS)和PCR方法,对分选的6VS、3B和7BL染色体(臂)进行了鉴定。结果表明,这3种方法都能对流式分选染色体进行有效鉴定,其中PCR法速度最快、重复性好,但结果不具可视性、也不能鉴定分选纯度;而FISH法重复性好、结果具有可视性、能够鉴定分选纯度,但操作程序复杂耗时,受探针特异性的限制;C-PRINS法则综合了上述两种方法的优点,是最具潜力的鉴定方法,如果与液体原位杂交相结合,有可能为解决染色体分选问题开辟新的途径,但也存在重复性差、杂交信号不稳定的缺点。 展开更多
关键词 小麦染色体 流式分选 PCR 原位PCR 荧光原位杂交
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荧光探针及流式分选法追踪胰腺癌细胞增殖的研究 被引量：3
5
作者 米蕊芳 潘春晓 +2 位作者 张俊文 刘福生 金贵善 《医学研究杂志》 2016年第6期29-32,共4页
目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺... 目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺癌全基因组突变文库细胞增殖;并于一定的时间点,应用流式分选法分选增殖速度减慢细胞群;通过CCK-8法检测分选前后的细胞增殖曲线。结果 CFSE探针可均匀染色胰腺癌细胞,呈现较强的绿色荧光;在CFSE荧光探针染色后的不同时间点(0、48、96及144h),胰腺癌细胞荧光强度呈现逐级衰减趋势;应用细胞饥饿法对细胞进行同步化后,细胞呈现更好的同步化衰减趋势;在一定的荧光衰减时间点(144h),通过流式分选从细胞突变文库中获得了胰腺癌增殖减慢细胞群;CCK-8实验显示,相对于分选前的细胞,分选出的荧光强度强的胰腺癌细胞群增殖速度明显减慢(P=0.006)。结论 CFSE荧光探针可很好追踪胰腺癌细胞增殖,结合流式分选法可获得肿瘤突变文库中的增殖减慢细胞群。 展开更多
关键词 胰腺癌 荧光探针 流式分选 ASPC-1细胞
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利用流式分选技术富集小鼠单倍体精子细胞 被引量：1
6
作者 夏小雨 郭陈智 徐晨 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期106-110,共5页
目的:建立并完善流式分选单倍体精子细胞的方法。方法:制备小鼠睾丸单细胞悬液;活细胞DNA染料Hoechst 33342孵育细胞;利用流式细胞术分选富集单倍体圆形精子细胞或长型精子细胞;在分选富集得到的精子细胞中,通过RT-PCR方法检测多种组蛋... 目的:建立并完善流式分选单倍体精子细胞的方法。方法:制备小鼠睾丸单细胞悬液;活细胞DNA染料Hoechst 33342孵育细胞;利用流式细胞术分选富集单倍体圆形精子细胞或长型精子细胞;在分选富集得到的精子细胞中,通过RT-PCR方法检测多种组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达情况;检测组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素对上述基因表达的影响。结果:用Hoechst 33342染色结合流式分选方法可以高效地富集高纯度的精子细胞,还可以进一步纯化圆形精子细胞与长型精子细胞。RT-PCR结果表明,与睾丸整体组织相比,精子细胞中组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达具有特异性,并受姜黄素处理的影响。结论:该流式分选方法提高了富集单倍体精子细胞的效率和纯度,为阐明精子形成的机制提供了简便易学、适于推广的技术平台。 展开更多
关键词 流式分选 Hoechst 33342染色 单倍体精子细胞 小鼠
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稳定转染结合流式分选技术筛选猪GBP1,GBP2基因高表达PK-15细胞 被引量：2
7
作者 马国剑 黄菁 +2 位作者 贾浩 李奎 赵书红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期188-192,共5页
猪的GBP1,GBP2基因是重要的抗病候选基因,建立其高表达细胞模型可为深入研究基因的抗病能力及机理提供良好的素材。利用pEGFP载体上的Neor抗性筛选标记,采用G418药物筛选方法,结合利用GFP荧光标记,采用流式细胞分选技术,获得了超表达猪G... 猪的GBP1,GBP2基因是重要的抗病候选基因,建立其高表达细胞模型可为深入研究基因的抗病能力及机理提供良好的素材。利用pEGFP载体上的Neor抗性筛选标记,采用G418药物筛选方法,结合利用GFP荧光标记,采用流式细胞分选技术,获得了超表达猪GBP1和GBP2基因的PK-15细胞,并通过定量PCR方法对筛选后细胞的超表达效果进行验证。结果显示猪GBP1和GBP2基因在转录水平的表达量相对于正常的PK-15细胞分别升高了近40倍和60倍,表明药物筛选结合流式分选是获得目的基因稳定高表达细胞株的快速便捷的方法。 展开更多
关键词 猪GBP1 GBP2 PK-15细胞 稳定转染 流式分选
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高纯度流式分选模式与带电滴数的选择 被引量：1
8
作者 黄向润 石学耕 +1 位作者 史桂英 王炼 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1996年第2期121-122,共2页
作者研究了ＰＡＣＳｔａｒＰＬＵＳ分选仪上分选模式和带电滴数对分选纯度和回收率的影响，总结了不同分选模式的适应性，并提供选择的实验依据。
关键词 激光流式分选 带电滴数 纯度 回收率
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Moflo Astrios EQ超高速流式分选系统的使用调节与维护 被引量：1
9
作者 郭婷婷 吴永强 孟文彤 《中国医学装备》 2021年第6期201-204,共4页
探讨Moflo Astrios EQ超流速分选系统的使用调节和维护方法,针对实验室的使用环境、仪器调节以及仪器管理等问题进行分析,采用正确有效的调节方法和科学的管理手段,以提高使用者的分选效率,保证分选在实验中的可行性,以便更好的保护仪器... 探讨Moflo Astrios EQ超流速分选系统的使用调节和维护方法,针对实验室的使用环境、仪器调节以及仪器管理等问题进行分析,采用正确有效的调节方法和科学的管理手段,以提高使用者的分选效率,保证分选在实验中的可行性,以便更好的保护仪器,使其充分发挥作用,为科研和教学提供更优质的服务。 展开更多
关键词 超高速 流式分选 调节 维护
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CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞的流式分选及其肿瘤干细胞特性的初步鉴定 被引量：3
10
作者 王玲燕 王斌 +5 位作者 马清华 金泗虎 高红伟 李素波 卞修武 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2012年第1期56-59,共4页
目的:通过表面标志分选法富集乳腺癌干细胞,并初步鉴定其肿瘤干细胞特性。方法:采用流式细胞分选术从人乳腺癌细胞系MCF-7中分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,并进行干细胞比例分析;用免疫荧光法检测、比较分选获得的细胞和对照细胞的干... 目的:通过表面标志分选法富集乳腺癌干细胞,并初步鉴定其肿瘤干细胞特性。方法:采用流式细胞分选术从人乳腺癌细胞系MCF-7中分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,并进行干细胞比例分析;用免疫荧光法检测、比较分选获得的细胞和对照细胞的干性和分化标记物Oct-4、SOX-2、CK-18和α-SMA的表达状态。结果:分选获得的CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞阳性比例达90%以上;免疫荧光检测结果显示,CD44+CD24-/low细胞亚群比non-CD44+CD24-/low细胞亚群高表达干细胞转录因子Oct-4、SOX-2,低表达分化因子CK-18、α-SMA;体外实验表明,CD44+CD24-/low细胞亚群具有更强的成球生长能力,并具有双向分化潜能。结论:CD44+CD24-/low表面标记物分选的方法可以富集高纯度的乳腺癌干细胞,且呈现干性因子Oct-4和SOX-2高表达。 展开更多
关键词 乳腺癌干细胞 流式细胞分选 细胞分化 细胞表面分子标记
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高端流式分选与免疫磁珠法纯化T细胞的比较 被引量：4
11
作者 黄莹莹 尹盛夏 +2 位作者 曹文强 李艳伟 王佳佳 《国际医药卫生导报》 2016年第22期3377-3383,共7页
目的 为建立一种高效、高活性的T细胞的分离纯化方法,分别采用流式细胞分选技术（FACS）及免疫磁珠分选技术（MACS）从小鼠脾脏组织分离纯化CD8＋T细胞.方法 通过测定分选后细胞的纯度、回收率、细胞活力、实验耗时及细胞学形态等指标,... 目的 为建立一种高效、高活性的T细胞的分离纯化方法,分别采用流式细胞分选技术（FACS）及免疫磁珠分选技术（MACS）从小鼠脾脏组织分离纯化CD8＋T细胞.方法 通过测定分选后细胞的纯度、回收率、细胞活力、实验耗时及细胞学形态等指标,综合全面地比较了上述两种纯化方法分离CD8＋T细胞的差异.结果 流式细胞分选仪分选后CD8＋T细胞纯度为（99.5±0.00）％,而免疫磁珠法的纯度为（95.6±0.25）％.流式细胞分选仪分选CD8＋T细胞的回收率为（74.33±3.28）％,而免疫磁珠法的回收率为（60.00±1.53）％.流式细胞分选法耗时1.5 h,免疫磁珠法则需要2.5 h.流式细胞分选后的细胞活力要比免疫磁珠法收集的要高.经流式分选后得到的细胞在12h时就开始出现集落生长,24 h时生长最佳,而经免疫磁珠分选后的细胞总体生长趋势较流式分选后的细胞缓慢.结论 流式细胞分选法较免疫磁珠法效率更高,能得到更高活性的细胞. 展开更多
关键词 流式细胞分选 免疫磁珠分选 T细胞
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流式分选仪液滴延迟自动校准方法研究
12
作者 韩天昊 王鹏 余兴龙 《机电工程》 CAS 2016年第7期810-814,共5页
针对现有流式分选仪在工作压力发生变化时难以维持液滴延迟稳定的问题,基于液滴延迟产生机理和射流不稳定性理论,在推导出射流速度随工作压力的数学关系后,又推导出了液滴延迟与工作压力和压电激励幅值的数学关系,提出了通过监测工作压... 针对现有流式分选仪在工作压力发生变化时难以维持液滴延迟稳定的问题,基于液滴延迟产生机理和射流不稳定性理论,在推导出射流速度随工作压力的数学关系后,又推导出了液滴延迟与工作压力和压电激励幅值的数学关系,提出了通过监测工作压力实现自动校准液滴延迟的方法。通过实验验证了射流速度随工作压力、液滴延迟与工作压力和压电激励幅值的理论计算结果,同时还完成了根据工作压力调节压电幅值后实现液滴延迟稳定的实验。研究结果表明,实验结果与理论计算结果基本一致,进一步研究后还能得到改善;根据工作压力调节压电幅值后实现液滴延迟稳定的方法行之有效,T值误差仅为0.06。这些研究结果可用于指导根据工作压力变化调节压电激励幅度,实现自动校准液滴延迟,提高细胞分选精度。 展开更多
关键词 流式分选仪 液滴延迟 数学模型 自动校准
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MoFlo Astrios EQS型超高速流式分选仪的管理和使用优化 被引量：1
13
作者 陈晓燕 林惠珠 +2 位作者 阳莉 李翠平 卢建溪 《中国医学装备》 2022年第7期186-189,共4页
针对MoFlo Astrios EQS型超高速流式分选仪的环境质量控制、仪器日常维护、样品要求以及仪器操作人员要求等,分析优化其管理和使用方法,并分析从仪器操作使用过程中的技巧、常见问题和故障案例等。通过科学管理及使用,以快速精确地设置... 针对MoFlo Astrios EQS型超高速流式分选仪的环境质量控制、仪器日常维护、样品要求以及仪器操作人员要求等,分析优化其管理和使用方法,并分析从仪器操作使用过程中的技巧、常见问题和故障案例等。通过科学管理及使用,以快速精确地设置仪器分选的参数,顺利高效完成分选,提高分选效率,为教学和科研有序开展提供更优质的技术支持。 展开更多
关键词 流式细胞分选仪 质量控制 使用优化 维护
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基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法
14
作者 李艳伟 王佳佳 +4 位作者 邢月婷 郭春 黄莹莹 宋兴辉 黄琼 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1084-1089,共6页
利用流式细胞法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、实时细胞功能分析(RTCA)法分别检测分选前后细胞的活性,综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示,流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为(3.85±0.008)%,分选前细胞凋亡率为(14.... 利用流式细胞法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、实时细胞功能分析(RTCA)法分别检测分选前后细胞的活性,综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示,流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为(3.85±0.008)%,分选前细胞凋亡率为(14.09±0.021)%,分选后细胞凋亡率低于分选前,具有统计学差异(P<0.05);分选前后的活细胞比例显示,分选后活细胞比例高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001)。CCK-8法测得的分选后细胞活性高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001);RTCA法测得的分选后细胞连续增殖活性明显高于分选前,具有极显著性统计学差异(P<0.0001)。结果显示,相较于CCK-8法和流式细胞法,RTCA法的细胞用量少、可回收,操作简便,无需标记,检测灵敏度高,可获得实时动态的细胞生长曲线,适合研究分选后细胞长效动态的活性变化,可为基础和临床分选后活细胞的功能研究提供检测手段。 展开更多
关键词 实时细胞功能分析 流式细胞分析 流式细胞分选 CCK-8 细胞活性
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流式分选仪在医学院校教学科研中的应用和共享
15
作者 户乃丽 《医学教育管理》 2022年第S01期174-176,共3页
目前流式细胞分选技术广泛应用于生物学研究的各领域,本文以首都医科大学中心实验室分选型流式细胞仪BD FACSAriaⅢ为对象,对其近5年来在教学和科研中的应用现状进行了统计分析和总结,并探讨了今后仪器维护和技术培训方面的工作模式,为... 目前流式细胞分选技术广泛应用于生物学研究的各领域,本文以首都医科大学中心实验室分选型流式细胞仪BD FACSAriaⅢ为对象,对其近5年来在教学和科研中的应用现状进行了统计分析和总结,并探讨了今后仪器维护和技术培训方面的工作模式,为仪器的深度开放共享和科学管理提出建议。 展开更多
关键词 流式分选仪 开放共享 使用现状
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MOFLO EQ超速流式分选仪的常规维护与常见故障分析
16
作者 曾彩辉 黄燎卢 《医疗装备》 2022年第1期141-142,共2页
流式细胞分选技术是现阶段最热门的细胞分离纯化技术,被广泛应用于生物医学领域中。通过利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光标记的目标细胞或微粒,检测和分析其发射的荧光强度,可对细胞或微粒进行定性或定量检测^... 流式细胞分选技术是现阶段最热门的细胞分离纯化技术,被广泛应用于生物医学领域中。通过利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光标记的目标细胞或微粒,检测和分析其发射的荧光强度,可对细胞或微粒进行定性或定量检测^([1-2])。MOFLO EQ超速流式分选仪是一款于空气中激发的六路分选系统,采用了增强的双前向角散射光检测技术,可同时对直径为200 nm~30μm的微粒执行检测和分选任务^([3])。现总结MOFLO EQ超速流式分选仪的常规维护措施及常见故障分析6例,以供同行参考。 展开更多
关键词 超速流式分选仪 常规维护 故障分析
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采用流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞
17
作者 周锦涛 俞仲望 曹莉 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期448-453,共6页
目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓... 目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓组织进行Percoll密度梯度离心,得到单核细胞悬液。采用CD45、CD11b和淋巴细胞抗原6家族成员C(Ly6C)抗体进行流式分选,获得小胶质细胞(CD11b^(+)CD45^(low)Ly6C^(-)细胞)和浸润巨噬细胞(CD11b^(+)CD45^(high)Ly6C^(+)细胞),并验证PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式获得的处理效果。结果通过CD45、CD11b和Ly6C抗体可以有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞。与对照组比较,PLX5622处理后小胶质细胞数量减少(P=0.001),而氯膦酸盐脂质体处理后浸润巨噬细胞数量减少(P<0.001)。结论所建立的流式细胞分选方法可有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞,PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式可分别选择性清除中枢神经系统内的小胶质细胞和浸润巨噬细胞。 展开更多
关键词 小胶质细胞 浸润巨噬细胞 流式细胞分选术 双侧颈总动脉狭窄 PLX5622 氯膦酸盐脂质体
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不同流式抗体分选小鼠原位肝癌模型中髓系来源抑制性细胞的比较 被引量：4
18
作者 赵文秀 张正奇 +3 位作者 许雅苹 吴端 尹震宇 王效民 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第4期42-46,I0002,共6页
目的比较不同的流式抗体分选小鼠原位肝癌模型骨髓中的髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)。方法建立BALB/c小鼠原位肝癌移植模型,10d后分离荷瘤小鼠骨髓细胞,分别进行CD11b、Gr-1单色标记及CD11b和Gr-1双色... 目的比较不同的流式抗体分选小鼠原位肝癌模型骨髓中的髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)。方法建立BALB/c小鼠原位肝癌移植模型,10d后分离荷瘤小鼠骨髓细胞,分别进行CD11b、Gr-1单色标记及CD11b和Gr-1双色标记后,进行流式分选。比较这三种方式分选的MDSCs纯度、活力,并检测分选的细胞精氨酸代谢酶1(arginase-1,Arg-1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达,并通过活性氧检测试剂盒检测MDSCs活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达。结果三种方法分选到的细胞活力和纯度都大于90%。CD11b标记进行分选操作最为方便,易于统一,但纯度略差;Gr-1标记进行分选时,细胞群不好确定,但纯度高;双色标记进行分选纯度最高。分选的细胞高表达Arg-1、iNOS和ROS。结论三种抗体标记方法均能从小鼠原位肝癌模型骨髓中的分选到纯度高、活力好的MDSCs,而用CD11b单色标记操作方便,易于统一,可作为首选方法。MDSCs的成功分选,对于后续开展MDSCs的生物学和免疫学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 髓系来源抑制性细胞 肝癌 荧光激活细胞分选 流式分选 抗体 骨髓 小鼠
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应用流式细胞分选技术分离人外周血原代单核细胞 被引量：5
19
作者 陈媛 巩伟丽 +4 位作者 湛小燕 卓海龙 张飒 戴倩倩 李涛 《科学技术与工程》 北大核心 2012年第24期5985-5988,共4页
巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,具有免疫调节、抗感染和抗肿瘤等重要功能。快速、有效地分离得到高纯度的人外周血单核细胞,是研究巨噬细胞功能的前提。利用细胞大小及胞内颗粒度属性对单核细胞与其他白细胞组分进行区分。通过流式细胞... 巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,具有免疫调节、抗感染和抗肿瘤等重要功能。快速、有效地分离得到高纯度的人外周血单核细胞,是研究巨噬细胞功能的前提。利用细胞大小及胞内颗粒度属性对单核细胞与其他白细胞组分进行区分。通过流式细胞分选,获得了较高纯度单核细胞。单核细胞表面标志物CD14染色分析显示,该方法对单核细胞的分选效率达85%以上。进一步实验证明,分选得到的单核细胞能够在体外正常分化为巨噬细胞。 展开更多
关键词 人外周血 原代单核细胞 流式分选
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逆转录病毒感染结合流式细胞分选方法构建稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系 被引量：4
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作者 陈媛 巩伟丽 +2 位作者 韩秋影 张飒 李涛 《科学技术与工程》 北大核心 2012年第24期6148-6151,6162,共5页
CUEDC2(CUE domain containing protein 2)是本实验室发现的功能未知蛋白质。已有研究证明CUEDC2通过抑制孕激素受体PR影响乳腺癌细胞的生长,同时CUEDC2的高表达能够降解雌激素受体ER而导致乳腺癌内分泌治疗耐药。为了深入研究CUEDC2在... CUEDC2(CUE domain containing protein 2)是本实验室发现的功能未知蛋白质。已有研究证明CUEDC2通过抑制孕激素受体PR影响乳腺癌细胞的生长,同时CUEDC2的高表达能够降解雌激素受体ER而导致乳腺癌内分泌治疗耐药。为了深入研究CUEDC2在乳腺癌中的功能,构建了稳定过表达CUEDC2的MCF-10A细胞系。利用逆转录病毒将非融合形式的绿色荧光蛋白质GFP和CUEDC2基因稳定整合至靶细胞的基因组中,经过流式分选获得GFP阳性细胞,即为稳定表达CUEDC2的细胞株。上述方法高效快捷,极大提高了稳定细胞株的构建效率。同时该稳定细胞株的建立为CUEDC2的功能研究提供了必要的工具。 展开更多
关键词 CUEDC2 逆转录病毒感染 流式分选 稳定细胞系
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