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兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究
1
作者 杨慧 刘吉山 +5 位作者 李书光 王艳 于新友 于雪 沈志强 肖跃强 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第8期27-32,共6页
试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点... 试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点,构建Trx-His tag融合原核表达载体,PCR与序列测定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定分析表达产物活性。测序结果显示,所扩增VP12基因ORF(开放阅读框)为354 bp,编码117个氨基酸,IPTG诱导后目的基因获得表达,融合载体Trx-His tag的重组VP12蛋白分子量为31 ku,与预期一致,且表达蛋白存在可溶性与包涵体两种形式;Western blot结果显示,可溶性表达蛋白与兔瘟肝组织灭活疫苗免疫后攻毒制备的RHDV阳性抗体能发生良好的抗原抗体杂交反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。研究结果为开展RHDV VP12蛋白生物学与免疫学特性研究、开发诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 次要衣壳蛋白 原核表达 活性研究 抗体
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基于人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2的广谱疫苗研究进展 被引量：1
2
作者 池鑫 宋硕 +3 位作者 黄诗雯 陈婷婷 夏宁邵 李少伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期300-306,共7页
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2具有广谱中和表位,被认为具有成为新一代广谱预防性疫苗的潜力。目前上市的HPV疫苗均是基于主要衣壳蛋白L1,但都被证明只对疫苗保护型别有效,仍无法覆盖所有高危型别的HPV,且成本... 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2具有广谱中和表位,被认为具有成为新一代广谱预防性疫苗的潜力。目前上市的HPV疫苗均是基于主要衣壳蛋白L1,但都被证明只对疫苗保护型别有效,仍无法覆盖所有高危型别的HPV,且成本较高不利于在发展中国家推广,因此急需开发低成本高覆盖的预防性疫苗。本文综述了基于L2疫苗的相关研究策略,对HPV广谱预防性疫苗的研究具有参考意义。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒(HPV) 次要衣壳蛋白L2 广谱疫苗 RG‐1表位
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HPV L2肽段宫颈癌疫苗的研究进展 被引量：3
3
作者 徐海燕 辛晓燕 蔡国青 《中国妇幼健康研究》 2008年第5期489-491,共3页
在全世界范围内,宫颈癌是女性的高发肿瘤,死亡率极高,人乳头瘤病毒是其主要的致病因子。关于宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗研究为宫颈癌的防治带来了曙光。目前已上市的人乳头瘤病毒疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存在着许多不足,其中,... 在全世界范围内,宫颈癌是女性的高发肿瘤,死亡率极高,人乳头瘤病毒是其主要的致病因子。关于宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗研究为宫颈癌的防治带来了曙光。目前已上市的人乳头瘤病毒疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存在着许多不足,其中,仅能抑制少数高危型人乳头瘤病毒感染是最主要的缺陷之一。人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2与宫颈癌的关系密切,同时L2肽段在所有人乳头瘤病毒型别均有表达,虽然免疫原性较弱,但具有很强的序列保守性,可交叉免疫多种型别的人乳头瘤病毒感染。由其构建的以人乳头瘤病毒L2肽段为基础的集预防与治疗为一体的疫苗有着极大的优越性和潜力,但也存在着不足之处,目前该方面的相关研究已在国内外逐渐展开起来,并取得了一定的进展。该文就人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2与宫颈癌的关系及其构建人乳头瘤病毒疫苗的研究进展作以系统的回顾。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白L2 疫苗
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人乳头瘤病毒6/11型L2片段的高效表达及免疫效果评价
4
作者 任皎 张忠献 +4 位作者 赵莉 郝明强 田厚文 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2016年第1期12-16,共5页
目的：原核表达人乳头瘤病毒（HPV）6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法：用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5＇端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al（OH）3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用E... 目的：原核表达人乳头瘤病毒（HPV）6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法：用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5＇端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al（OH）3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体,以基于假病毒的体外中和试验评价中和抗体水平。结果：ELISA结果显示,3种融合蛋白均能产生针对同型别L2蛋白的高滴度特异性Ig G抗体,滴度为1∶10 000～1∶200 000;体外中和试验显示,3种融合蛋白均能诱发中和抗体和交叉中和抗体,针对同型别的滴度最高可达1∶3200,对于高危型能产生一定水平的交叉中和抗体,滴度为1∶50～1∶800。结论：HPV6/11 L2融合蛋白能够诱发较强的体液免疫反应,产生较高的中和抗体及交叉中和抗体,为HPV L2新型预防性疫苗的研究提供了初步的实验基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 融合蛋白 预防性疫苗 中和抗体 次要衣壳蛋白L2
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HPV16 L2肽段疫苗的构建及免疫学功能研究
5
作者 徐海燕 李英辉 +3 位作者 蔡国青 龚照 鲁瑶 辛晓燕 《中国妇幼健康研究》 2009年第3期256-258,共3页
目的探讨基于人乳头瘤病毒16次要衣壳蛋白L2抗原优势表位多倍复制重组多肽疫苗的构建与诱导免疫应答之间的关系。方法采用芴甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成多肽，用高效液相色谱分析多肽的纯度，对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定。... 目的探讨基于人乳头瘤病毒16次要衣壳蛋白L2抗原优势表位多倍复制重组多肽疫苗的构建与诱导免疫应答之间的关系。方法采用芴甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成多肽，用高效液相色谱分析多肽的纯度，对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定。通过淋巴细胞增殖试验、细胞毒性杀伤试验及酶联免疫吸附试验方法研究该疫苗激发的细胞免疫及反应强度。结果合成的多肽经纯化后纯度均达到95％以上，经质谱分析，各肽的分子量测定值与理论值相符。所设计的多肽疫苗免疫小鼠后，小鼠淋巴细胞体外培养增殖明显，并可特异性地在体外杀伤小鼠肺上皮细胞，小鼠血清体外可诱导较高的干扰素-γ。结论在多肽疫苗的设计中，多倍复制重组人乳头瘤病毒次要衣壳蛋白L2肽段优势表位可增强疫苗的免疫原性，为进一步研制开发宫颈癌疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 子宫颈癌 人乳头瘤病毒16 次要衣壳蛋白L2 优势表位 多肽疫苗
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人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究
6
作者 李玲玲 赵朋云 +4 位作者 王佳 周珠哈 朱珊丽 薛向阳 张丽芳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期848-852,共5页
目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈... 目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白 同源性 交叉反应
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HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究
7
作者 李玲玲 刘建晓 +3 位作者 朱珊丽 薛向阳 陈俊 张丽芳 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期435-440,共6页
目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4... 目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱（Nj-NTA Agarose）纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义（H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01）,而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值（0.825和0.808）差异无统计学意义（H=0,P＞0.05）.结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白 交叉反应
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