核转染对成体骨髓源性干细胞的影响 被引量：1

1

作者 李震 沈晓涛 +4 位作者 曹亮 毛颖玉 陈斯韵 郑馨 蔡冬青 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-6,共6页

背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化... 背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响。方法:应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3μmol/L5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定。使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况。结果与结论:经核转染24h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长。MTT检测结果显示:核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线。核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28h;核转染后分别为9.42,10.42h,各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551,P=0.774)。RT-PCR检测结果显示:核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显。体内实验结果:心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞。提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因。 展开更多

关键词 成体骨髓呈克隆样干细胞 核转染 增殖 分化 示踪

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核转染技术转染人外周血淋巴细胞效率的初步研究 被引量：1

2

作者 张文峰 邵红伟 +1 位作者 区裕升 黄树林 《肿瘤药学》 CAS 2012年第1期28-30,共3页

目的探索核转染技术转染人外周血淋巴细胞的转染效率。方法利用核转染方法将携带增强型绿色荧光蛋白基因的质粒转染人外周血淋巴细胞,24小时后经流式细胞仪检测绿色荧光蛋白EGFP表达水平,确定转染效率。结果未经任何刺激的外周血淋巴细... 目的探索核转染技术转染人外周血淋巴细胞的转染效率。方法利用核转染方法将携带增强型绿色荧光蛋白基因的质粒转染人外周血淋巴细胞,24小时后经流式细胞仪检测绿色荧光蛋白EGFP表达水平,确定转染效率。结果未经任何刺激的外周血淋巴细胞转染效率为8.7%,经抗CD3抗体OKT3和抗CD28抗体共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为10.5%,经抗CD3抗体OKT3和IL-2共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为9.9%。结论核转染方法是一种转染人外周血淋巴细胞的有效方法,转染前细胞是否受到刺激激活,对转染的效率影响不大。 展开更多

关键词 外周血淋巴细胞 核转染 转染效率

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小鼠B淋巴瘤细胞系A20核转染的影响因素分析 被引量：1

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作者 阳诚 宋远 +1 位作者 袁小涵 王惠明 《疑难病杂志》 CAS 2018年第6期627-629,共3页

目的分析影响小鼠B淋巴瘤细胞系A20的核转染效率的因素,以提高转染效率。方法2017年1-6月在武汉大学人民医院中心实验室和肾病实验实进行实验。以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,使用Nucleofector核酸转染方法分别转染4种外源基因即CD40... 目的分析影响小鼠B淋巴瘤细胞系A20的核转染效率的因素,以提高转染效率。方法2017年1-6月在武汉大学人民医院中心实验室和肾病实验实进行实验。以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,使用Nucleofector核酸转染方法分别转染4种外源基因即CD40、ARNO、C-ABL JLP进入A20细胞,用流式细胞术和荧光显微镜分别检测转染效率,研究细胞转染时间和外源质粒大小对核转染效率的影响。结果质粒大小在8 kb以下时转染效率均很高,质粒超过8 kb时转染效率较低,其中,ARNO组(目的基因长度为1 366 bp)转染效率最高,JLP组(目的基因长度为3 976 bp)转染效率最低,转染后4 h检测转染效率最高,48 h时最低。结论核转染方法非常适合于悬浮细胞的转染。且相对于传统的脂质体转染等方式,核转染的方法能有效缩短转染时间。外源基因过大会导致转染效率低,控制外源基因的大小能有效提高转染效率。 展开更多

关键词 B淋巴瘤细胞 A20 核转染 质粒

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Amaxa Nucleofector^(TM)核转染仪转染白血病细胞株L1210

4

作者 杨阿碰 马洁娴 +2 位作者 秦文明 谢彦晖 金由辛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期1604-1608,共5页

慢性淋巴细胞白血病细胞株L1210是广泛运用于白血病发病机制以及化疗药物研究的细胞模型,但该细胞株与其它悬浮细胞株一样,存在着转染效率低的难题。本研究旨在探讨如何提高L1210细胞株的转染效率。应用报告基因pEGFP并通过Amaxa Nucleo... 慢性淋巴细胞白血病细胞株L1210是广泛运用于白血病发病机制以及化疗药物研究的细胞模型,但该细胞株与其它悬浮细胞株一样,存在着转染效率低的难题。本研究旨在探讨如何提高L1210细胞株的转染效率。应用报告基因pEGFP并通过Amaxa NucleofectorTM核转染仪的几种转染预设模式转染悬浮L1210细胞,与脂质体Lipofectamine 2000转染进行对比,在荧光倒置显微镜下观察、使用流式细胞术检测转染效率,用台盼蓝排斥实验比较存活率。结果表明:使用核转染仪进行转染在L1210细胞中获得了很高的转染效率,且在一样细胞密度(2×106/ml)和质粒量(10μg)条件下,在24小时后进行比较,核转染仪预设模式A-20转染效率达(61.6%),明显高于其它模式(S-18、T-20),存活率可达50.5%;脂质体转染24小时细胞存活率为88%,但转染效率极低(<1%)。结论:核转染仪转染L1210的效率明显高于脂质体转染方案,其转染效率最高可达61.6%,存活率可达50.5%,此结果可满足科研工作需求。 展开更多

关键词 L1210 EGFP 核转染 脂质体转染

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采用核转染技术建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G_1的真核细胞系

5

作者 曾梦华 房崇芸 +6 位作者 王树森 朱珉 谢林 王璐 李荣 吴雄文 陈实 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1130-1133,共4页

目的建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G1(solublehumanleucocyteantigenG1,sHLA-G1)的真核细胞系。方法采用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入不表达HLA-类分子的LCL721.221细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞,通过RT-PCR及Dot-ELISA... 目的建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G1(solublehumanleucocyteantigenG1,sHLA-G1)的真核细胞系。方法采用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入不表达HLA-类分子的LCL721.221细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞,通过RT-PCR及Dot-ELISA在基因和蛋白水平鉴定目的基因的表达。结果采用核转染法LCL721.221细胞转染效率可以达到约14%。RT-PCR检测发现了sHLA-G1基因特异性条带;采用Dot-ELISA方法利用sHLA-G1特异性抗体MEM-G/9检测,存在sHLA-G1蛋白。结论通过核转染方法成功建立了稳定表达sHLA-G1的真核细胞系。 展开更多

关键词 可溶性人类白细胞抗原G1 核转染 真核细胞系

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Axl-siRNA核转染对髓源性DC前体细胞分化的影响

6

作者 李幸 王浩 +4 位作者 戴晓敏 马俊磊 汪晶 姜汉英 宫念樵 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期511-514,546,共5页

目的 将Axl（Anexelekto）-siRNA（small interfering RNA）序列核转染于髓源性树突状细胞（dendritic cells,DC）前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况.方法 构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱... 目的 将Axl（Anexelekto）-siRNA（small interfering RNA）序列核转染于髓源性树突状细胞（dendritic cells,DC）前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况.方法 构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱导向DC分化;根据是否转染Axl-siRNA,将实验分为空白对照组和Axl-siRNA核转染组;转染后荧光显微镜观察细胞荧光水平以评估转染效率;通过锥虫蓝染色观察细胞的存活情况;观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况,绘制生长曲线;转染后第8天流式细胞术检测DC的表面标志CD11c＋.结果 转染后1～3 d荧光表达率分别为（70.5±6.3）%、（72.6±7.3）%、（68.8±6.5）%,而后荧光逐渐减弱并淬灭;核转染后细胞的死亡率为（21.2±5.4）%;空白对照组细胞在培养的前3d内的生长曲线呈对数增长,第4至6天,细胞数稳定在（2.38～2.47）×10^6/孔,培养后第7、8天细胞数略有下降,为（2.23～2.31）×10^6/孔;Axl-siRNA核转染组细胞生长曲线也呈现相同的趋势,但与空白对照组相比每阶段的细胞计数略有减少;细胞培养8 d后,空白对照组和Axl-siRNA核转染组CD11c＋的细胞百分比分别为（70.28±6.13）%和（67.53±7.45）%.结论 Axl-siRNA核转染法对髓源性DC前体细胞具有较高的转染效率,不影响DC的生长和分化;Axl-siRNA核转染法是研究DC功能的一种有效手段. 展开更多

关键词 核转染 Axl-siRNA 树突状细胞 树突状细胞前体细胞

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pDsRed1-N1基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究 被引量：1

7

作者 陈镇洲 徐如祥 +2 位作者 姜晓丹 滕晓华 周虎田 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期881-883,共3页

目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pDsRed1-N1(DsRed组... 目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pDsRed1-N1(DsRed组) ,以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后48h成功发现DsRed的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。DsRed的表达逐渐增强,至第10天达到最高峰(54·2 %) ,观察1个月未发现表达减弱。结论pDsRed1-N1基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响; DsRed可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记; NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。 展开更多

关键词 红色荧光蛋白 骨髓基质细胞 核转染 兔

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抗原特异TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCRV β13-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究 被引量：5

8

作者 尹青松 李扬秋 +5 位作者 陈少华 杨力建 周羽竝 吴秀丽 李萡 张学利 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,11,共6页

目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增... 目的构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2-EGFP和TCR Vβ-pIRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞。方法前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增殖T细胞受体(TCR)Vα6和Vβ13亚家族T细胞,在此基础上利用RT-PCR扩增TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列后,分别将其定向克隆入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP,酶切和核酸序列测定分析方法鉴定重组质粒TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP的正确性;利用核转染技术(nucleofector)将其分别或共同转染Raji细胞和Jurkat细胞,24 h后利用激光共聚焦显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,48 h后利用实时定量PCR检测TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达情况,Western blot检测EGFP蛋白的表达情况。结果获得来自DLBL患者的TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列,酶切分析和核酸序列测定证实TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染24 h后,激光共聚焦显微镜下可观察到EGFP的表达,40%以上细胞发出绿色荧光,单独转染和共转染组荧光产生情况相似;实时定量PCR在单独转染和共转染组均可检测到TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达,共转染组2基因的表达水平稍低于单独转染组;Western blot检测在单独转染和共转染组均显示EGFP蛋白的表达,2组的蛋白杂交带强度相似。结论成功构建了DLBL特异性的TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP真核表达质粒,两者可同时转染到细胞中,并实现了体外共表达。 展开更多

关键词 DLBL TCR Vα/Vβ基因 CTL 核转染 EGFP

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核转染增强型绿荧光蛋白对兔原代骨髓基质细胞向神经细胞方向分化的影响 被引量：1

9

作者 陈镇洲 徐如祥 +3 位作者 姜晓丹 杜谋选 黄涛 蔡颖谦 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2007年第4期305-308,共4页

目的研究以最近发展起来的核转染技术转染增强型绿荧光蛋白（EGFP）质粒进行基因修饰对兔原代骨髓基质细胞向神经细胞方向分化的影响。方法从兔股骨抽取骨髓，密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以Nucleofector^TM技术转染pEGFP—C2... 目的研究以最近发展起来的核转染技术转染增强型绿荧光蛋白（EGFP）质粒进行基因修饰对兔原代骨髓基质细胞向神经细胞方向分化的影响。方法从兔股骨抽取骨髓，密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以Nucleofector^TM技术转染pEGFP—C2（EGFP组），以同期培养未转染的细胞作为对照组（control组）。以“CYTOKINE·神经干细胞培养基”＋10％胎牛血清诱导BMSCs向神经细胞方向分化。流式细胞仪检测转染效率。比较两组细胞的生长增殖以及Nestin、NSE、GFAP抗原的表达情况。结果在转染后24h成功发现EGFP的表达。两组细胞具有相似的形态学变化以及生长曲线。诱导18d，两组细胞NSE、GFAP的表达比例无统计学意义。结论Nucleofector^TM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法；EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记；核转染pEGFP-C2对兔原代骨髓基质细胞体外增殖及向神经细胞方向分化无明显影响。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 核转染 骨髓基质细胞 分化 兔

原文传递

核转染技术转染水牛细胞的初步研究

10

作者 罗婵 阮秋燕 +4 位作者 雷钏 徐永茹 陆凤花 蒋建荣 石德顺 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1092-1097,共6页

本研究旨在获得一种高效转染水牛细胞的方法。本研究首先以水牛胎儿成纤维细胞(BFF)为研究对象,建立、优化核转染法;随后,比较核转染法、脂质体法、电穿孔法转染BFF的效率;最后选用较优的方法,探讨转染水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚... 本研究旨在获得一种高效转染水牛细胞的方法。本研究首先以水牛胎儿成纤维细胞(BFF)为研究对象,建立、优化核转染法;随后,比较核转染法、脂质体法、电穿孔法转染BFF的效率;最后选用较优的方法,探讨转染水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞的可行性。结果发现随电压的增加,核转染BFF的效率升高;核转染电压为225V,脉冲时间为10ms时,细胞EGFP阳性率为(83.1±1.4)%,转染效率显著高于脂质体法((11.7±1.2)%)和电穿孔法((35.5±2.0)%)。运用优化的核转染条件可以成功将外源基因导入水牛原代骨髓间充质干细胞和类胚胎干细胞,且不影响其细胞生物学特性。本研究为以多能干细胞介导的水牛转基因克隆胚胎的生产奠定了基础。 展开更多

关键词 核转染 转染效率 水牛胎儿成纤维细胞 骨髓间充质干细胞 类胚胎干细胞

原文传递

pEGFP-C2基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究(英文)

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作者 陈镇洲 徐如祥 +2 位作者 姜晓丹 黄涛 杜谋选 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期226-229,共4页

目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pEGFP-C2(EGFP组)... 目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pEGFP-C2(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后24h成功发现EGFP的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。EGFP的表达逐渐增强,至第6天达到最高峰(47.8%),观察一个月未发现表达减弱。结论pEGFP-C2基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响;EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记;NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 骨髓基质细胞 核转染 兔

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核转染技术转染大鼠胚胎干细胞的初步研究

12

作者 吴兆强 赵丽华 +6 位作者 张曼玲 金永 聂晓伟 侯道荣 杨宁 陈袁 李荣凤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第3期370-377,共8页

大鼠胚胎干细胞(rat embryonic stem cells,r ESCs)的基因转染研究仍处于探索阶段。该文利用不同的核转染条件,将红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)表达载体p EF1alphaDs Red-Express2导入大鼠胚胎干细胞中,比较不同转染条件... 大鼠胚胎干细胞(rat embryonic stem cells,r ESCs)的基因转染研究仍处于探索阶段。该文利用不同的核转染条件,将红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)表达载体p EF1alphaDs Red-Express2导入大鼠胚胎干细胞中,比较不同转染条件下大鼠胚胎干细胞的红荧光蛋白表达效率和死亡率,确定最佳核转染条件。在采用最佳核转染条件转染大鼠胚胎干细胞后,利用碱性磷酸酶染色、RT-PCR、免疫荧光染色等方法,比较核转染前后大鼠胚胎干细胞的干细胞特性,探讨核转染过程对大鼠胚胎干细胞的干细胞特性的影响。实验结果显示,转染条件为A-13时,可获得最好的大鼠胚胎干细胞转染效率(39.63±1.75)%。核转染后,表达红色荧光蛋白的大鼠胚胎干细胞的碱性磷酸酶染色结果仍为阳性。另外,RT-PCR和免疫荧光染色结果表明,核转染前后大鼠胚胎干细胞的干细胞多能性标志基因的表达情况未出现明显差异。研究表明,核转染条件A-13可以在不改变大鼠胚胎干细胞特性的条件下有效地对其进行基因转染,即核转染技术适用于大鼠胚胎干细胞的基因转染。 展开更多

关键词 大鼠胚胎干细胞 红色荧光蛋白 核转染 干细胞多能性标志基因

原文传递

人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体转染椎间盘正常髓核细胞 被引量：1

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作者 吴劲风 叶冬平 +1 位作者 戴丽冰 梁伟国 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期259-263,共5页

背景:椎间盘髓核细胞分离培养困难,老化较快,迫切需要一种标准细胞株用于实验研究。目的:探讨人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体的构建及其转染正常髓核细胞构建永生化细胞的可行性研究。方法:通过目的基因克隆、真核表达质粒中目... 背景:椎间盘髓核细胞分离培养困难,老化较快,迫切需要一种标准细胞株用于实验研究。目的:探讨人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体的构建及其转染正常髓核细胞构建永生化细胞的可行性研究。方法:通过目的基因克隆、真核表达质粒中目的基因序列测定、目的基因真核表达质粒的构建、转染人端粒酶反转录酶表达检测等步骤进行实验。结果与结论:构建出人端粒酶反转录酶重组绿色荧光表达载体,成功转染正常髓核细胞并在细胞中稳定表达。结果表明运用人端粒酶反转录酶转染椎间盘髓核细胞构建永生化细胞是一种可行的方法。 展开更多

关键词 组织构建 脊柱组织构建 髓核细胞 人端粒酶反转录酶基因 DH5α感受态大肠肝菌 转染 永生化 目的基因 髓核细胞转染退行性椎间盘病 省级基金 组织构建图片文章

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阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染

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作者 黄吴键 袁进 +1 位作者 安靓 李进 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第6期35-38,I0005,共5页

目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复... 目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复合物在细胞的分布情况。结果与对照组单纯使用PEI转染相比较,联合使用组虽然精子活力和活率有一定程度的下降,但是无论胞质还是胞核荧光物质的携带量都有很大程度的提高,实现了对精子的核内转染。结论本实验为我们以后开展大动物精子载体法的研究提供了一个成功的模式。 展开更多

关键词 电穿孔 JetPEI-FluoF 小鼠精子 核内转染 精子载体法

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一种高效转染西藏小型猪胚胎成纤维细胞的方法 被引量：1

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作者 刘薇 陈燕 +4 位作者 岳敏 袁进 邱添武 肖东 顾为望 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第3期64-66,I0011,共4页

目的应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相... 目的应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比研究,比较两种方法的转染效率。结果转染5 h后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80%,远远高于脂质体转染的方法。结论用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。 展开更多

关键词 西藏小型猪 胚胎成纤维细胞 转染 核转染 脂质体转染

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淋巴细胞不同转染方法比较 被引量：2

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作者 刘燕 彭聿平 +2 位作者 黄彦 黄慧伟 邱一华 《交通医学》 2010年第6期608-611,共4页

目的：用病毒转染和非病毒转染方法将质粒载体转染进淋巴细胞,比较各种方法转染淋巴细胞的效率,确定适合淋巴细胞最佳转染方法。方法：分别用脂质体转染法,电穿孔转染法,慢病毒感染法,核转染法将构建好的酪氨酸羟化酶（TH）基因干扰质... 目的：用病毒转染和非病毒转染方法将质粒载体转染进淋巴细胞,比较各种方法转染淋巴细胞的效率,确定适合淋巴细胞最佳转染方法。方法：分别用脂质体转染法,电穿孔转染法,慢病毒感染法,核转染法将构建好的酪氨酸羟化酶（TH）基因干扰质粒转染小鼠淋巴细胞,24小时后经荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达水平,确定转染率。结果：核转染法转染TH基因干扰质粒进入淋巴细胞的效率明显高于其他转染和感染方法,24小时后通过观察EGFP的表达确定转染效率可达50%-60%。结论：核转染方法是转染免疫细胞的有效手段,是体外分子生物学方法研究免疫功能的理想手段。 展开更多

关键词 淋巴细胞 转染 慢病毒 核转染

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Nucleofection转染过程对Jurkat细胞BCL11b水平的影响

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作者 李扬秋 杨力建 +1 位作者 陈少华 陈青山 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2006年第1期1-3,共3页

目的了解核转染(Nucleofection)过程对Jurkat细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用实时定量PCR方法检测分析经不同程序Nucleofection过程和不同时间培养的Jurkat细胞的BCL11b基因的表达水平。结果经Nucleofector的C-16、S-18和... 目的了解核转染(Nucleofection)过程对Jurkat细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用实时定量PCR方法检测分析经不同程序Nucleofection过程和不同时间培养的Jurkat细胞的BCL11b基因的表达水平。结果经Nucleofector的C-16、S-18和G-10+siRNA程序处理后,C-16与S-18组细胞培养2h的BCL11b水平明显升高(p<0.05),C-16、S-18和G-10+siRNA三组细胞培养10h后BCL11b水平均高于对照组(p<0.05)。对照组、C-16和S-18组细胞随着培养时间延长(在2～24h之间),BCL11b水平降低(p<0.05),而在G-10+siRNA处理组,直到培养48hBCL11b水平才有所下降。结论Nucleofection处理过程对Jurkat细胞BCL11b表达有一定的影响,但有一定的时效性。 展开更多

关键词 BCL11b基因 核转染(Nucleofaction) 实时定量PCR

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转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析 被引量：1

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作者 罗婵 屈春凤 +5 位作者 李辉 雷钏 周宇 刘庆友 蒋建荣 石德顺 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期882-887,共6页

【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体... 【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析。【结果】电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1%。使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体p BCN-IFN-CMVEGFP-neo和p BCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的m RNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-2b基因的转录与翻译。【结论】建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(p BCN-IFN-CMV-EGFP-neo和p BCN-IFN-CMVEGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备。 展开更多

关键词 水牛 人干扰素 核转染 细胞株 表达分析

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转染核因子κB decoy寡核苷酸在肝癌耐药细胞株的定位及对其活性的影响 被引量：1

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作者 严斌 陈孝平 +1 位作者 兰明银 张万广 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期184-185,共2页

关键词 转染核因子κB DECOY寡核苷酸 肝癌 耐药细胞 阿霉素

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应用CRISPR/Cas9系统敲除PD-1基因对人T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的影响 被引量：2

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作者 龚福生 许扬梅 +2 位作者 刘施佳 黄丽洁 郑秋红 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期656-661,共6页

目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的... 目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P<0.05],PD-1基因敲除不影响T细胞的增殖活力和细胞表型(P>0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9系统 T淋巴细胞 核转染 PD-1 基因敲除 IFN-Γ

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