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果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的初步应用
1
作者 李礼 姜旭淦 +3 位作者 吴亮 鞠爱萍 沈进 陈盛霞 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期83-86,共4页
目的原核表达果糖氨基酸氧化酶(FAOX),建立检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的酶法并作初步评价。方法构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方... 目的原核表达果糖氨基酸氧化酶(FAOX),建立检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的酶法并作初步评价。方法构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方法学评价。结果重组FAOX在Rosetta(DE3)中高效表达,SDS-PAGE电泳分析显示其相对分子质量(Mr)约65 000;酶比活性为22 U/mg;建立的检测HbA1c酶法的批内、批间、日间CV均<5%;低值(5.1%)和高值(15.8%)HbA1c的回收率分别为98.1%和98.9%;总胆红素(<220μmol/L)、三酰甘油(<10.8 mmol/L)和维生素C(<500 mg/L)对酶法检测HbA1c无影响;与HPLC法和HA-8160型全自动糖化血红蛋白仪测定结果进行比较,相关系数分别为0.977和0.993。结论 FAOX可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中高效表达,用其建立的检测HbA1c的酶法可满足临床对HbA1c测定的要求。 展开更多
关键词 果糖氨基酸氧化酶 原核表达 糖化血红蛋白
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以DA-64为色原酶法测定糖化血清蛋白
2
作者 陈益川 连国军 +1 位作者 张德亭 曹建明 《江西医学检验》 2007年第4期295-298,共4页
目的研制、评价以N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-二(甲基氨基)-联苯胺[DA-64]为色原酶法测定糖化血清蛋白试剂盒,以用于血清中糖化血清蛋白的测定。方法糖化血清蛋白被蛋白酶消化产生果糖氨基酸,果糖氨基酸氧化酶作用于果糖氨基酸产生H2O2,H2O... 目的研制、评价以N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-二(甲基氨基)-联苯胺[DA-64]为色原酶法测定糖化血清蛋白试剂盒,以用于血清中糖化血清蛋白的测定。方法糖化血清蛋白被蛋白酶消化产生果糖氨基酸,果糖氨基酸氧化酶作用于果糖氨基酸产生H2O2,H2O2在过氧化物酶的催化下与色原DA-64反应,使DA-64转变为一种绿色的产物,此产物含量与样本中糖化血清蛋白含量成正比。结果该法线性范围为6-1800μmol/L,平均回收率为100.9%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.025、0.041,与Diazyme Laboratores酶法测定试剂比较具有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.994X+3.88,r=0.9790,P>0.05。76例健康人糖化血清蛋白为195.80-295.52μmol/L(x±2s)。配制的果糖氨基酸氧化酶法液体试剂在2-8℃保存至少稳定6个月。结论用以DA-64为色原果糖氨基酸氧化酶法试剂盒测定糖化血清蛋白方法简便、灵敏可靠,适合临床应用。 展开更多
关键词 糖化血清蛋白 果糖氨基酸氧化酶 试剂盒
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