目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规...目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规猪免疫程序进行2次基础免疫及1次加强免疫,获得免疫猪血浆,用E玫瑰花环形成抑制试验和淋巴细胞毒试验进行效价检测。结果3批免疫猪血浆的E玫瑰花环形成抑制试验结果均达到1∶1000(花环形成率均小于对照组平均花环形成率的75%),淋巴细胞毒试验结果均达到1∶500(淋巴细胞死亡率均大于20%),效价均达到《中华人民共和国药典》2015版(三部)中生产用免疫猪血浆的效价标准。结论传代人淋巴细胞可作为人T淋巴细胞的替代免疫原进行猪的免疫,获得了效价合格的免疫猪血浆,用于P-ATG的制备。展开更多
目的建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名:Grafalon)作为待...目的建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名:Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10^(6)个/mL);细胞传代密度为2×10^(5)个/mL传代培养72 h或3×10^(5)个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为ALG效价测定提供了一种客观、准确的评价手段。展开更多
文摘目的用传代人淋巴细胞替代人T淋巴细胞进行猪的免疫,用于试制抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,P-ATG)免疫猪血浆,并评价其免疫效果。方法大量培养传代人淋巴细胞至免疫所需浓度及数量,采用常规猪免疫程序进行2次基础免疫及1次加强免疫,获得免疫猪血浆,用E玫瑰花环形成抑制试验和淋巴细胞毒试验进行效价检测。结果3批免疫猪血浆的E玫瑰花环形成抑制试验结果均达到1∶1000(花环形成率均小于对照组平均花环形成率的75%),淋巴细胞毒试验结果均达到1∶500(淋巴细胞死亡率均大于20%),效价均达到《中华人民共和国药典》2015版(三部)中生产用免疫猪血浆的效价标准。结论传代人淋巴细胞可作为人T淋巴细胞的替代免疫原进行猪的免疫,获得了效价合格的免疫猪血浆,用于P-ATG的制备。
