目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺...目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺损伤(ALI)体外模型.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测HPAEpiC细胞中MALAT1、miR-194-5p的表达水平,构建MALAT1敲降载体、miR-194-5p抑制剂及FOXA1抑制剂转染HPAEpiC,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、LPS+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂组、LPS+MALAT1抑制剂+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂+miR-194-5p抑制剂组和LPS+FOXA1抑制剂组.采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒、流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测MALAT1或其敲降后对LPS诱导的HPAEpiC增殖及凋亡和FOXA1表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA-MALAT1、miR-194-5p及FOXA1的靶向调控关系.结果与空白对照组比较,LPS可上调HPAEpiC-MALAT1的表达,促进HPAEpiC凋亡并抑制其增殖〔MALAT1(2^(-ΔΔCt)):0.83±0.09比0.15±0.02,HPAEpiC凋亡率:(21.31±2.31)%比(5.41±0.42)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.42±0.03比0.54±0.02,均P<0.05〕;与LPS+生理盐水组比较,敲降MALAT1可抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔细胞凋亡率:(6.40±0.40)%比(21.38±2.31)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.53±0.03比0.40±0.02,均P<0.05〕,降低MALAT1的表达(2-ΔΔCt:0.20±0.03比1.02±0.09,P<0.05).双荧光素酶报告基因及Western Blot证实,敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p从而抑制FOXA1在LPS诱导的HPAEpiC中的表达〔miR-194-5p(2^(-ΔΔCt)):5.27±0.15比1.21±0.09,FOXA1蛋白表达(灰度值):0.36±0.05比1.00±0.07,均P<0.05〕,miR-194-5p抑制剂能逆转MALAT1敲降在LPS诱导的HPAEpiC中对FOXA1的作用〔FOXA1蛋白表达(灰度值):2.76±0.20比1.00±0.07,P<0.05〕,抑制FOXA1表达能减轻LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔FOXA1蛋白表达(灰度值):0.28±0.03比1.00±0.03,HPAEpiC凋亡率:(6.78±0.38)%比(19.21±0.70)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.59±0.20比0.41±0.02,均P<0.05〕.结论敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p抑制FOXA1的表达,进而抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡,为脓毒症ALI的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点.展开更多
目的研究microRNA-194(miR-194)缓解高脂环境下肝细胞脂质代谢及炎症反应的分子机制。方法以低脂饲料(low-fat diet,LFD)及高脂饲料(high-fat diet,HFD)喂养构建对照组及脂肪肝小鼠模型,HE染色、油红染色观察建模情况。qPCR检测二组小...目的研究microRNA-194(miR-194)缓解高脂环境下肝细胞脂质代谢及炎症反应的分子机制。方法以低脂饲料(low-fat diet,LFD)及高脂饲料(high-fat diet,HFD)喂养构建对照组及脂肪肝小鼠模型,HE染色、油红染色观察建模情况。qPCR检测二组小鼠肝组织中miR-194、促脂质合成因子SCD1、ACC、促炎因子TNF-α、IL-6表达水平。棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激肝细胞株LO2,过表达miR-194后qPCR检测人肝细胞系LO2细胞内SCD1、ACC、TNF-α、IL-6表达水平,油红染色检测LO2细胞内脂质沉积情况,免疫荧光检测LO2细胞内TNF-α变化。结果脂肪肝小鼠模型构建成功。与LFD组小鼠相比,HFD组小鼠miR-194表达明显降低[LFD:1.000±0.147 vs HFD:0.634±0.116,(t=3.478,P=0.025)]。SCD1、ACC1表达明显升高[SCD1 LFD:1.000±0.287 vs HFD:1.658±0.216,(t=4.802,P=0.009);ACC LFD:1.000±0.252 vs HFD:1.851±0.245,(t=4.194,P=0.015)],TNF-α、IL-6表达明显升高[TNF-αLFD:1.000±0.172 vs HFD:1.952±0.147,(t=7.288,P=0.002);IL-6 LFD:1.000±0.207 vs HFD:1.452±0.108,(t=3.242,P=0.029)]。在高脂环境下,过表达miR-194后,qPCR结果显示LO2细胞内SCD1、ACC表达明显下降[SCD1 miR-NC:1.000±0.149 vs miR-194:0.625±0.112,(t=3.340,P=0.029);ACC miR-NC:1.000±0.204 vs miR-194:0.572±0.124,(t=3.105,P=0.038)],TNF-α、IL-6表达明显减少[TNF-αmiR-NC:1.000±0.149 vs miR-194:0.563±0.059,(t=4.723,P=0.009);IL-6 miR-NC:1.000±0.156 vs miR-194:0.685±0.112,(t=2.853,P=0.048)]。油红染色显示LO2细胞内脂质沉积明显减少,免疫荧光结果显示细胞内TNF-α表达明显下[miR-NC:1.000±0.124 vs miR-194:0.655±0.152,(t=3.020,P=0.039)],炎症反应明显减轻。结论miR-194可以延缓肝细胞内脂质沉积,减轻高脂处理诱导的炎症反应,延缓脂肪肝的进展,这可能成为治疗非酒精性脂肪性肝病的新靶点。展开更多
文摘目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺损伤(ALI)体外模型.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测HPAEpiC细胞中MALAT1、miR-194-5p的表达水平,构建MALAT1敲降载体、miR-194-5p抑制剂及FOXA1抑制剂转染HPAEpiC,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、LPS+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂组、LPS+MALAT1抑制剂+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂+miR-194-5p抑制剂组和LPS+FOXA1抑制剂组.采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒、流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测MALAT1或其敲降后对LPS诱导的HPAEpiC增殖及凋亡和FOXA1表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA-MALAT1、miR-194-5p及FOXA1的靶向调控关系.结果与空白对照组比较,LPS可上调HPAEpiC-MALAT1的表达,促进HPAEpiC凋亡并抑制其增殖〔MALAT1(2^(-ΔΔCt)):0.83±0.09比0.15±0.02,HPAEpiC凋亡率:(21.31±2.31)%比(5.41±0.42)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.42±0.03比0.54±0.02,均P<0.05〕;与LPS+生理盐水组比较,敲降MALAT1可抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔细胞凋亡率:(6.40±0.40)%比(21.38±2.31)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.53±0.03比0.40±0.02,均P<0.05〕,降低MALAT1的表达(2-ΔΔCt:0.20±0.03比1.02±0.09,P<0.05).双荧光素酶报告基因及Western Blot证实,敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p从而抑制FOXA1在LPS诱导的HPAEpiC中的表达〔miR-194-5p(2^(-ΔΔCt)):5.27±0.15比1.21±0.09,FOXA1蛋白表达(灰度值):0.36±0.05比1.00±0.07,均P<0.05〕,miR-194-5p抑制剂能逆转MALAT1敲降在LPS诱导的HPAEpiC中对FOXA1的作用〔FOXA1蛋白表达(灰度值):2.76±0.20比1.00±0.07,P<0.05〕,抑制FOXA1表达能减轻LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔FOXA1蛋白表达(灰度值):0.28±0.03比1.00±0.03,HPAEpiC凋亡率:(6.78±0.38)%比(19.21±0.70)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.59±0.20比0.41±0.02,均P<0.05〕.结论敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p抑制FOXA1的表达,进而抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡,为脓毒症ALI的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点.
文摘目的研究microRNA-194(miR-194)缓解高脂环境下肝细胞脂质代谢及炎症反应的分子机制。方法以低脂饲料(low-fat diet,LFD)及高脂饲料(high-fat diet,HFD)喂养构建对照组及脂肪肝小鼠模型,HE染色、油红染色观察建模情况。qPCR检测二组小鼠肝组织中miR-194、促脂质合成因子SCD1、ACC、促炎因子TNF-α、IL-6表达水平。棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激肝细胞株LO2,过表达miR-194后qPCR检测人肝细胞系LO2细胞内SCD1、ACC、TNF-α、IL-6表达水平,油红染色检测LO2细胞内脂质沉积情况,免疫荧光检测LO2细胞内TNF-α变化。结果脂肪肝小鼠模型构建成功。与LFD组小鼠相比,HFD组小鼠miR-194表达明显降低[LFD:1.000±0.147 vs HFD:0.634±0.116,(t=3.478,P=0.025)]。SCD1、ACC1表达明显升高[SCD1 LFD:1.000±0.287 vs HFD:1.658±0.216,(t=4.802,P=0.009);ACC LFD:1.000±0.252 vs HFD:1.851±0.245,(t=4.194,P=0.015)],TNF-α、IL-6表达明显升高[TNF-αLFD:1.000±0.172 vs HFD:1.952±0.147,(t=7.288,P=0.002);IL-6 LFD:1.000±0.207 vs HFD:1.452±0.108,(t=3.242,P=0.029)]。在高脂环境下,过表达miR-194后,qPCR结果显示LO2细胞内SCD1、ACC表达明显下降[SCD1 miR-NC:1.000±0.149 vs miR-194:0.625±0.112,(t=3.340,P=0.029);ACC miR-NC:1.000±0.204 vs miR-194:0.572±0.124,(t=3.105,P=0.038)],TNF-α、IL-6表达明显减少[TNF-αmiR-NC:1.000±0.149 vs miR-194:0.563±0.059,(t=4.723,P=0.009);IL-6 miR-NC:1.000±0.156 vs miR-194:0.685±0.112,(t=2.853,P=0.048)]。油红染色显示LO2细胞内脂质沉积明显减少,免疫荧光结果显示细胞内TNF-α表达明显下[miR-NC:1.000±0.124 vs miR-194:0.655±0.152,(t=3.020,P=0.039)],炎症反应明显减轻。结论miR-194可以延缓肝细胞内脂质沉积,减轻高脂处理诱导的炎症反应,延缓脂肪肝的进展,这可能成为治疗非酒精性脂肪性肝病的新靶点。
