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对虾白斑综合症病毒LAMP-TaqMan检测方法的建立及应用
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作者 刘昱 柳梦思 +3 位作者 董振国 焦义然 时国强 石磊 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期63-68,共6页
为提高环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法的特异性,本研究建立一种LAMP-TaqMan检测方法,进行对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测。本研究以WSSV基因组中保守序列构建测试质粒并设计筛选LAMP引物组,以荧光淬灭集团修饰的环引物作为TaqMan... 为提高环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法的特异性,本研究建立一种LAMP-TaqMan检测方法,进行对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测。本研究以WSSV基因组中保守序列构建测试质粒并设计筛选LAMP引物组,以荧光淬灭集团修饰的环引物作为TaqMan探针,建立LAMP-TaqMan检测方法。结果显示:LAMP-TaqMan法在WSSV检测中,具备良好的特异性,最适检测温度为63℃,测试质粒线性相关性系数R^(2)为0.990,最低检出限为0.76×10^(1)copies/μL,重复性检测结果的变异系数CV值均小于3%,稳定性良好;以市售检测试剂盒为对照,对60份对虾样品进行平行测试,LAMP-TaqMan检测准确率为96.67%,敏感性为100.00%。建立的LAMP-TaqMan恒温核酸检测方法具备精准快速,检出限低,有效避免LAMP非特异性扩增造成的“假阳性”等优势,在水产疫病精准快速检测中具有广泛的市场应用前景。 展开更多
关键词 LAMP TAQMAN探针 对虾白斑综合症病毒 核酸检测
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抗对虾白斑综合症病毒(WSSV)中草药的筛选及番石榴叶水提取物对WSSV致病性的影响 被引量:11
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作者 郭志勋 李卓佳 +2 位作者 管淑玉 冯娟 文国樑 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期129-131,共3页
通过人工感染试验,比较了11种中草药水提取物对对虾白斑综合症病毒(WSSV)致病性的影响,在此基础上,研究了番石榴叶水提取物的浓度和处理时间对WSSV的消毒效果。结果表明,在11种中草药提取液中,仅有番石榴叶水提取物对WSSV有显著的杀灭作... 通过人工感染试验,比较了11种中草药水提取物对对虾白斑综合症病毒(WSSV)致病性的影响,在此基础上,研究了番石榴叶水提取物的浓度和处理时间对WSSV的消毒效果。结果表明,在11种中草药提取液中,仅有番石榴叶水提取物对WSSV有显著的杀灭作用,处理时间超过12 h可使WSSV失活,消毒效果与药物和病毒的相对浓度相关。 展开更多
关键词 番石榴 水提取物 对虾白斑综合症病毒 致病性
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对虾白斑综合症病毒结构蛋白VP28的原核表达和性质研究 被引量:8
3
作者 赵新颜 魏聪 +2 位作者 戴玲芬 高宏 戴和平 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期234-239,共6页
VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus ,WSSV)的一个重要的囊膜蛋白。为了便于研究VP2 8在和宿主细胞相互作用过程中扮演的角色 ,将VP2 8基因克隆到一个原核表达系统 ,对原核表达的VP2 8的特性进行了研究 ,并制备了抗VP2 ... VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus ,WSSV)的一个重要的囊膜蛋白。为了便于研究VP2 8在和宿主细胞相互作用过程中扮演的角色 ,将VP2 8基因克隆到一个原核表达系统 ,对原核表达的VP2 8的特性进行了研究 ,并制备了抗VP2 8的多克隆抗体和单链抗体 ,对原核表达的和天然病毒的VP2 8蛋白免疫原性进行了比较。结果表示 ,原核表达的VP2 8与天然蛋白具有相似的免疫原性。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 结构蛋白 VP28 原核表达 噬菌体抗体 免疫原性
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养殖水体环境与对虾白斑综合症关系的研究进展 被引量:8
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作者 李奕雯 曹煜成 +2 位作者 李卓佳 杨莺莺 文国樑 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期532-538,共7页
针对养殖对虾病害频发的现状,就养殖水环境中理化因子、微藻、细菌与对虾白斑综合症(WSS)的相关关系,对前人的研究进行了综述与分析。分析表明养殖水体理化因子的变化将引起养殖对虾WSS的爆发,微藻、细菌的种类和数量变化也与养殖对虾WS... 针对养殖对虾病害频发的现状,就养殖水环境中理化因子、微藻、细菌与对虾白斑综合症(WSS)的相关关系,对前人的研究进行了综述与分析。分析表明养殖水体理化因子的变化将引起养殖对虾WSS的爆发,微藻、细菌的种类和数量变化也与养殖对虾WSS发生有一定关联,提出通过观测水质和藻相可以预警养殖对虾WSS的爆发,构建良好的藻-菌关系和调控良好水质对养殖对虾WSS的预防控制有关键作用。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒(WSSV) 水质 微藻 细菌
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虾池中桡足类及其休眠卵携带对虾白斑综合症病毒的初步调查研究 被引量:5
5
作者 张家松 董双林 +3 位作者 董云伟 闫冬春 田相利 刘相义 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期405-408,412,共5页
探讨对虾白斑综合症(White Spot Syndrome WSS)与虾池中桡足类之间的关系,于2003年5~10月份,在暴发过对虾白斑综合症的池塘中采集桡足类样品共128个,并从冬季底泥样品分离出桡足类休眠卵样品20个,以及此种休眠卵孵化得来的桡足... 探讨对虾白斑综合症(White Spot Syndrome WSS)与虾池中桡足类之间的关系,于2003年5~10月份,在暴发过对虾白斑综合症的池塘中采集桡足类样品共128个,并从冬季底泥样品分离出桡足类休眠卵样品20个,以及此种休眠卵孵化得来的桡足类幼体样品5个。利用PCR斑点杂交法以及巢式PCR法检测样品中对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus WSSV)携带情况。结果表明,5~10月份桡足类样品中均能检测到阳性样品,总的阳性率为56.3%;其中,5月份样品阳性率为37.5%,6,8,9,10月份各取样1次,每次样品中的阳性率均在60%以上。在20例桡足类休眠卵样品中有1例为阳性,阳性率为5%;并且实验室中孵化此种休眠卵得来的桡足类幼体样品中检测到阳性,阳性率为40%。本研究初步表明,桡足类是WSSV的携带者或传播媒介之一,且冬季池塘底泥中携带WSSV的桡足类休眠卵可萌发出带病毒的桡足类。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 桡足类 休眠卵 PCR斑点杂交法
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温度影响对虾白斑综合症病毒增殖机制的研究 被引量:9
6
作者 李侃 罗淑娅 徐丽美 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2013年第1期61-66,共6页
已有文献报道温度是影响虾类感染对虾白斑综合症病毒(WSSV)的重要因素但并不清楚其机制.在本实验中我们通过定量检测病毒拷贝数后发现环境温度与病毒增殖速度有相关性.当温度在21~30℃之间时病毒增殖速度最快,病虾于感染后6~8 d全部... 已有文献报道温度是影响虾类感染对虾白斑综合症病毒(WSSV)的重要因素但并不清楚其机制.在本实验中我们通过定量检测病毒拷贝数后发现环境温度与病毒增殖速度有相关性.当温度在21~30℃之间时病毒增殖速度最快,病虾于感染后6~8 d全部死亡而高温(33℃)及较低温度(15~18℃)对病毒的增殖均具有一定的抑制作用,虾存活时间超过了14 d;当温度降至12℃或8℃时病毒增殖受到明显抑制,虾存活时间长达40 d.通过激光共聚焦显微镜观察进一步发现病毒进入宿主细胞的能力与温度密切相关,高温(33℃)和低温(12℃)下病毒进入细胞的数量明显比27℃时少;而通过对病毒ie1和vp28基因的转录分析发现与27℃相比,高温(33℃)和低温(12℃)明显改变了病毒基因的转录.本实验结果表明温度影响WSSV基因组的复制、转录及病毒入侵细胞的能力从而导致了病虾死亡时间上的差异. 展开更多
关键词 海洋生物学 对虾白斑综合症病毒 温度 ie1 VP28
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对虾白斑综合症病毒VP28基因在家蚕体内的表达 被引量:3
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作者 许雅香 许梓荣 +2 位作者 沈卫德 吴小锋 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第4期365-368,共4页
VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)的囊膜蛋白。在克隆了VP2 8基因的基础上 ,成功构建了重组转移载体pBlueBacHisC vp2 8和重组杆状病毒HyNPV VP2 8。用重组病毒的细胞培养液注射接种 5龄饷食后的家蚕 ,剪... VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)的囊膜蛋白。在克隆了VP2 8基因的基础上 ,成功构建了重组转移载体pBlueBacHisC vp2 8和重组杆状病毒HyNPV VP2 8。用重组病毒的细胞培养液注射接种 5龄饷食后的家蚕 ,剪病蚕腹足采血淋巴 ,进行SDS PAGE和Westernblotting分析 ,结果表明 ,WSSV VP2 8基因在家蚕体内得到了表达 ,特异性条带大小约为 31kD。研究结果为探讨WSSV感染对虾的分子机制打下了基础。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 VP28 WSSV 囊膜蛋白 克隆 基因 重组转移栽体 家蚕 表达 分子机制
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对虾白斑综合症病毒重组cDNA克隆的构建与分析 被引量:7
8
作者 宋晓玲 黄倢 +2 位作者 Kathy F.LTang 杨冰 Donald V.Lightner 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期444-451,共8页
取经人工注射感染了对虾白斑综合症病毒 40— 45h的凡纳对虾鳃组织 ,分离mRNA ,以mRNA为模板合成双链cDNA ,并克隆于PUC质粒的NotI/SalI位点 ,构建了 1 0 0 0余株对虾感染后期鳃细胞的重组cDNA克隆。重组质粒经PCR鉴定插入片段 ,DNA斑... 取经人工注射感染了对虾白斑综合症病毒 40— 45h的凡纳对虾鳃组织 ,分离mRNA ,以mRNA为模板合成双链cDNA ,并克隆于PUC质粒的NotI/SalI位点 ,构建了 1 0 0 0余株对虾感染后期鳃细胞的重组cDNA克隆。重组质粒经PCR鉴定插入片段 ,DNA斑点杂交分析目的片段 ,测定了 2 0株对虾白斑综合症病毒的重组cDNA克隆的末端DNA序列 ,并对其进行了包含存在的开放阅读框架、启动区上游序列、编码产物的特性等分析。结果显示 :PCR产物在0 3— 1 6kb之间 ;大于 1kb的克隆中有 31 8%的克隆为白斑综合症病毒的重组cDNA克隆。已测序的不包含同源序列的 1 3株克隆中含有 1 4个开放阅读框 ,其中 1 1个上游可检出启动子基序 ,4个可检出启动子调制元件。ORF转译产物的特性基序分析显示 :有 2个ORFs可检出锌指基序 ,3个ORFs可检出亮氨酸拉链基序 ,2个ORFs可检出NTP结合基序 ,未检出核定位信号基序。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症 病毒 重组cDNA克隆 构建 分析
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对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用 被引量:13
9
作者 贾启军 孟小林 +2 位作者 徐进平 王健 鲁伟 《中国病毒学》 CSCD 2006年第6期585-588,共4页
根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导... 根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-VP19以可溶性的形式得到表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测显示其分子量与预期的大小相符合。目的蛋白经Ni2+柱纯化并定量后分别直接注射鳌虾和包被饲料投喂鳌虾。实验结果表明注射Trx-VP19可以提高鳌虾个体抗WSSV感染力的作用。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒(WSSV) VP19 抗WSSV感染
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对虾白斑综合症病毒与虾鳃细胞膜特异性结合关系的确立 被引量:8
10
作者 易志刚 黄倢 +2 位作者 解飞霞 贾佩侨 李筠 《中国病毒学》 CSCD 2003年第3期295-297,共3页
对虾白斑综合症病素养(White spot syndrome virus,WSSV)是养殖对虾的一个主要病原,也是目前发现的基因组最大的动物病素养(基因组约290kDa,双链环状).
关键词 对虾白斑综合症病毒 虾鳃 细胞膜 特异性结合
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对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立 被引量:4
11
作者 郑晓聪 刘荭 +4 位作者 张朋 何俊强 史秀杰 贾鹏 兰文升 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期41-43,共3页
用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了2株(2G9,3E5)可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔,按常规方法制备... 用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了2株(2G9,3E5)可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔,按常规方法制备多抗。选用单抗(3E5)包被ELISA板,用兔多抗作为捕获抗体,建立了对虾白斑综合症病毒的双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有良好的特异性和敏感性,为对虾白斑综合症病毒的检测提供了有效工具。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 VP28蛋白 单克隆抗体 ELISA
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对虾白斑综合症病毒的诊断和检测 被引量:6
12
作者 郑天伦 王国良 《海洋湖沼通报》 CSCD 2002年第3期65-70,共6页
关键词 对虾白斑综合症病毒 诊断 检测 目视观察法 电子显微技术 生化检验法 免疫学方法
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对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP24的定位研究 被引量:6
13
作者 谢希贤 杨丰 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期415-418,共4页
对虾白斑综合症病毒是一种新型的DNA病毒.VP24蛋白质是该病毒粒子的一个主要的结构蛋白质.当纯化的病毒粒子经去污剂处理后,VP24蛋白质被发现完全存在于囊膜部分,Western杂交实验也证实该结果,以上实验结果表明VP24蛋白质是病毒的一个... 对虾白斑综合症病毒是一种新型的DNA病毒.VP24蛋白质是该病毒粒子的一个主要的结构蛋白质.当纯化的病毒粒子经去污剂处理后,VP24蛋白质被发现完全存在于囊膜部分,Western杂交实验也证实该结果,以上实验结果表明VP24蛋白质是病毒的一个囊膜蛋白质.利用免疫胶体金定位技术对该蛋白质的进一步研究中发现,核衣壳上未见标记的金颗粒,完整的病毒粒子上标记的金颗粒也很少,而囊膜部分破损的病毒粒子上却可观察到大量的金颗粒.我们认为VP24蛋白质是一个囊膜蛋白质,但是它的主体可能存在于病毒的囊膜和核衣壳之间.VP24蛋白质的定位研究将加速阐明病毒感染和包装的机制,并将有助于病毒的诊断和控制. 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 VP24蛋白质 囊膜蛋白质
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对虾白斑综合症病毒基因组同源重复区结合蛋白的筛选 被引量:4
14
作者 朱艳冰 杨丰 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期318-323,共6页
对对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组序列分析发现,基因组3%的区域均匀分布有与昆虫杆状病毒类似的9个同源重复区,很可能具有昆虫杆状病毒同源重复区参与病毒复制起始或转录调控的功能.以WSSV基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的... 对对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组序列分析发现,基因组3%的区域均匀分布有与昆虫杆状病毒类似的9个同源重复区,很可能具有昆虫杆状病毒同源重复区参与病毒复制起始或转录调控的功能.以WSSV基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA(210bp)作为配体,利用WSSV基因组噬菌体展示库,经过5轮淘选出一个可与DNA特异结合的重组噬菌体克隆,包含的外源DNA片断长度为306bp.通过与WSSV基因组序列对比,发现该序列为WSSV的ORFs中wsv021的5′端部分.推测wsv021是一个可能与病毒复制或调控相关的重要功能基因. 展开更多
关键词 分子生物学 对虾白斑综合症病毒 基因组噬菌体展示库 同源重复区 wsv 021基因
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对虾白斑综合症病毒类锌指蛋白基因(wsv063、wsv069和wsv477)的表达和纯化 被引量:4
15
作者 朱艳冰 杨丰 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期697-700,共4页
从对虾白斑综合症病毒基因组的预测开放阅读框中选取3个编码类锌指蛋白的基因wsv063、wsv069和wsv477,将它们克隆到pET-GST表达载体,以E.coliBL21(DE3)为宿主菌,成功表达了GST融合的目的蛋白.表达的GST-WSV063和GST-WSV477在菌体里主要... 从对虾白斑综合症病毒基因组的预测开放阅读框中选取3个编码类锌指蛋白的基因wsv063、wsv069和wsv477,将它们克隆到pET-GST表达载体,以E.coliBL21(DE3)为宿主菌,成功表达了GST融合的目的蛋白.表达的GST-WSV063和GST-WSV477在菌体里主要以包涵体形式存在,GST-WSV069在菌体里可溶性形式和包涵体形式几乎等量存在.采用glutathione sepharose 4B或Ni-NTA agarose亲和层析对目的蛋白进行了纯化.以上3种病毒蛋白的表达和纯化为进一步研究它们的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒wsv63 wsv69和wsv477基因 类锌指蛋白 表达和纯化
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利用宿主范围扩大的杂交病毒HyNPV在家蚕中表达对虾白斑综合症病毒VP19基因 被引量:1
16
作者 许雅香 吴小锋 +2 位作者 朱玉芳 许梓荣 沈卫德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期837-839,共3页
对虾白斑综合症其病原是对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)。VP19是WSSV的一个囊膜蛋白,HyNPV(HybridofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV)是BmNPV和AcNPV通过基因重组后得到的一个具有BmNPV和AcNPV双重优点的新型杂交病毒,... 对虾白斑综合症其病原是对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)。VP19是WSSV的一个囊膜蛋白,HyNPV(HybridofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV)是BmNPV和AcNPV通过基因重组后得到的一个具有BmNPV和AcNPV双重优点的新型杂交病毒,在克隆了VP19基因的基础上,成功构建了重组转移载体pBlueBicHisCvp19和重组杆状病毒HyNPVVP19。用重组病毒注射接种5龄起蚕,经SDSPAGE和Westernblotting分析,结果表明,WSSVVP19基因在家蚕体内得到了表达,特异性条带大小与预计的基本一致,约为21kD。 展开更多
关键词 HyNPV 对虾白斑综合症病毒 VP19基因 家蚕
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)囊膜表面蛋白的研究 被引量:2
17
作者 秦崇涛 胡向明 +1 位作者 杨丰 潘大仁 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第29期72-75,共4页
利用生物素标记转移技术对牛血清白蛋白(BSA)和凡纳滨对虾的鳃细胞膜蛋白进行标记,研究其与对虾白斑综合症病毒(WSSV)之间的相互作用。发现分子量在50~56kD之间的两种蛋白质位于WSSV的表面,并且与鳃细胞膜蛋白具有特异性的相互作用。... 利用生物素标记转移技术对牛血清白蛋白(BSA)和凡纳滨对虾的鳃细胞膜蛋白进行标记,研究其与对虾白斑综合症病毒(WSSV)之间的相互作用。发现分子量在50~56kD之间的两种蛋白质位于WSSV的表面,并且与鳃细胞膜蛋白具有特异性的相互作用。根据分子量推测可能是病毒的两种膜蛋白,VP52A和VP56。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒 生物素标记转移 囊膜表面蛋白
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对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白WSV308的鉴定 被引量:3
18
作者 吴成林 杨丰 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期53-60,共8页
结合SDS-PAGE电泳和质谱分析,发现了一分子量为51kDa的蛋白,它是对虾白斑综合症病毒基因ORFwsv308的表达产物.将wsv308克隆到pET-His表达载体,以E.coliBL21为宿主菌,成功表达并纯化目的蛋白后制备抗体.Western blot实验中蛋白特异抗体... 结合SDS-PAGE电泳和质谱分析,发现了一分子量为51kDa的蛋白,它是对虾白斑综合症病毒基因ORFwsv308的表达产物.将wsv308克隆到pET-His表达载体,以E.coliBL21为宿主菌,成功表达并纯化目的蛋白后制备抗体.Western blot实验中蛋白特异抗体只与完整的病毒和核衣壳裂解蛋白中的WSV308反应,而不和膜蛋白反应,证明wsv308所编码的蛋白在完整病毒颗粒上定位于核衣壳.免疫电镜定位中金颗粒只特异地标记在核衣壳表面上,不存在于完整病毒表面上. 展开更多
关键词 分子生物学 对虾白斑综合症病毒 wsv308基因 WESTERN BLOT 免疫电镜定位 核衣壳蛋白
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对虾白斑综合症病毒极早期基因启动子筛选文库的构建 被引量:1
19
作者 林梵宇 徐丽美 杨丰 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期184-188,共5页
对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是危害对虾养殖业的主要病原,而WSSV极早期基因对病毒功能基因的转录翻译和调控起着至关重要的作用.本研究将WSSV基因组以超声法随机断裂至400~900bp DNA片段,并插入启动子缺失且... 对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是危害对虾养殖业的主要病原,而WSSV极早期基因对病毒功能基因的转录翻译和调控起着至关重要的作用.本研究将WSSV基因组以超声法随机断裂至400~900bp DNA片段,并插入启动子缺失且多克隆位点下游具有报告基因的载体来构建文库,转染昆虫细胞Hi5.倒置荧光显微镜观察发现部分转染后的细胞有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,表明这部分细胞中的DNA片段可能具有极早期启动子活性.流式细胞仪分析显示,这部分荧光细胞占总细胞的比例为0.35%.由于转染效率为50%,可认为占比0.7%的WSSV基因组随机片段能在Hi5细胞中激发下游报告基因的转录翻译,可能具有极早期基因启动子活性.这对于进一步筛选和鉴定WSSV极早期基因及开展极早期启动子研究具有重要的意义. 展开更多
关键词 海洋生物学 对虾白斑综合症病毒 极早期基因 启动子 筛选文库 增强型绿色荧光蛋白
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对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP41A的功能研究 被引量:1
20
作者 周娟 熊生良 杨丰 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期512-516,共5页
对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾养殖的主要病害之一,在虾养殖业中造成了严重的损失.本研究从WSSV基因组中克隆到vp41a基因,大小约为900 bp,发现该基因编码蛋白VP41A.通过构建重组质粒pET-His-vp41a表达了重组蛋白VP41A,大小约为43 kDa... 对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾养殖的主要病害之一,在虾养殖业中造成了严重的损失.本研究从WSSV基因组中克隆到vp41a基因,大小约为900 bp,发现该基因编码蛋白VP41A.通过构建重组质粒pET-His-vp41a表达了重组蛋白VP41A,大小约为43 kDa.并通过Ni-琼脂糖珠交联下拉实验,在虾血细胞中找到一个能与VP41A相互作用蛋白,质谱分析发现该蛋白为细胞粘连蛋白,说明在WSSV感染宿主细胞的过程中蛋白VP41A可能发挥重要作用.本研究结果推动了WSSV与宿主对虾相互作用的研究,有利于探索病毒复制或转录的关键蛋白,为最终的病毒防治及快速诊断提供科学依据. 展开更多
关键词 海洋生物学 对虾白斑综合症病毒(WSSV) 膜蛋白VP41A 蛋白相互作用
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