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密度梯度分离纯化/免疫荧光技术检测饮用水中“两虫” 被引量:17
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作者 张冬青 李红岩 +3 位作者 李栋 于建伟 刘志斌 杨敏 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期78-80,83,共4页
采用膜溶解、密度梯度分离纯化结合免疫荧光染色法对饮用水中的"两虫"(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)进行定性与定量检测,以大幅降低检测成本,简化操作。结果表明,使用Percoll-蔗糖介质可取得良好的分离纯化效果,其卵囊和孢囊初始回... 采用膜溶解、密度梯度分离纯化结合免疫荧光染色法对饮用水中的"两虫"(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)进行定性与定量检测,以大幅降低检测成本,简化操作。结果表明,使用Percoll-蔗糖介质可取得良好的分离纯化效果,其卵囊和孢囊初始回收率分别为56%和35%,远高于EPA1623方法的要求。利用该方法对河网型水源水及水厂滤后水进行了检测,发现10L水源水中有1~3个隐孢子虫和0~2个贾第鞭毛虫,但在50L滤后水中均未检出"两虫"。 展开更多
关键词 隐孢子虫 贾第鞭毛虫 密度梯度分离 免疫荧光检测 饮用水
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OptiPrep密度梯度分离液分离培养小鼠原代肝星状细胞的实验研究 被引量:1
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作者 黄会芳 邓志华 +2 位作者 严微 黄卓 姚佳心 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2022年第10期1160-1165,共6页
目的寻找分离培养小鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的有效方法。方法采用OptiPrep密度梯度分离液对BALB/c雄性小鼠HSC进行原位手工灌注分离培养。倒置荧光显微镜观察HSC自发荧光、油红O染色,α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth... 目的寻找分离培养小鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的有效方法。方法采用OptiPrep密度梯度分离液对BALB/c雄性小鼠HSC进行原位手工灌注分离培养。倒置荧光显微镜观察HSC自发荧光、油红O染色,α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及结蛋白(Desmin)免疫细胞化学染色鉴定原代细胞及传代培养的细胞。结果我们分离出高得率和高纯度的原代HSC,在倒置显微镜下328 nm波长的紫外光激发下自发蓝绿色荧光,油红O染色胞浆中脂滴呈红色,细胞核呈蓝色;在传2代培养的HSC中,α-SMA、Desmin染色阳性细胞胞浆为棕色颗粒,达100%阳性,全部活化。结论OptiPrep密度梯度分离液分离培养出高纯度、高得率的原代HSC。 展开更多
关键词 原代肝星状细胞 OptiPrep密度梯度分离 分离培养
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应用Percoll密度梯度分离法观察悬浮红细胞的保存效果
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作者 梁文景 王越洪 +1 位作者 黄耀熊 王迪 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期217-219,222,共4页
目的:应用Percoll密度梯度分离法观察悬浮红细胞的保存效果,为临床安全用血,提高临床输血疗效提供依据。方法:应用Percoll密度梯度分离法对枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA)保存液,对保存4、7、14、21 d的悬浮红细胞进行密度(胞龄)... 目的:应用Percoll密度梯度分离法观察悬浮红细胞的保存效果,为临床安全用血,提高临床输血疗效提供依据。方法:应用Percoll密度梯度分离法对枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA)保存液,对保存4、7、14、21 d的悬浮红细胞进行密度(胞龄)分离并对各种胞龄的细胞计数。结果:保存4、7和14 d的悬浮红细胞在Percoll法下可以分成4种胞龄的红细胞,红细胞数目中龄1(M1)>中龄2(M2)>青龄(Y)>老龄(O)。保存21 d的红细胞只能分成3层,没有青龄红细胞。结论:悬浮红细胞在保存14 d后其青龄的红细胞逐渐减少,剩下中、老龄的红细胞。 展开更多
关键词 悬浮红细胞 密度梯度分离 细胞老化 血液保存 输血疗效
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血细胞的Percoll不连续密度梯度分离法 被引量:3
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作者 顾庆礼 张菁 张健 《苏州医学院学报》 1991年第1期50-52,85-86,共3页
以Percoll作为分离介质,采用60%SIP、50%SIP2种浓度,经2次离心,成功地分离了12名健康供血者周周血的单核、淋巴和粒细胞,纯度分别为83%、85%和98%;得率分别为48%、49%和47%。常规涂片、瑞氏染色后形态学观察示细胞形态完整,台盼蓝拒染... 以Percoll作为分离介质,采用60%SIP、50%SIP2种浓度,经2次离心,成功地分离了12名健康供血者周周血的单核、淋巴和粒细胞,纯度分别为83%、85%和98%;得率分别为48%、49%和47%。常规涂片、瑞氏染色后形态学观察示细胞形态完整,台盼蓝拒染实验示细胞活力良好(拒染率>95%). 展开更多
关键词 血细胞分离 PERCOLL 密度梯度分离
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非连续密度梯度离心法分离红细胞的影响因素分析 被引量:1
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作者 周武 王淑英 汪德清 《临床输血与检验》 CAS 2011年第2期111-113,共3页
目的分析非连续密度梯度分离法分离红细胞效果的影响因素,探讨各因素对分离结果的影响程度。方法采用正交设计比较不同分离条件(离心力、离心时间、离心温度)的分离效果,应用多元线性回归统计方法分析不同个体参数(红细胞平均体积、细... 目的分析非连续密度梯度分离法分离红细胞效果的影响因素,探讨各因素对分离结果的影响程度。方法采用正交设计比较不同分离条件(离心力、离心时间、离心温度)的分离效果,应用多元线性回归统计方法分析不同个体参数(红细胞平均体积、细胞浓度、个体年龄)对分离效果的影响。结果离心力、离心时间、标本红细胞平均体积、红细胞浓度、个体年龄都对分离结果有影响,其中红细胞平均体积起主导作用。结论不同分离条件以及同一分离条件下不同标本,其分离效果均有差异,通过对影响因素的人为控制,可以得到相对稳定的分离效果。 展开更多
关键词 非连续密度梯度分离 红细胞
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密度梯度分离/免疫荧光技术检测再生水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫 被引量:7
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作者 陈智敏 张昱 +4 位作者 杨敏 肖淑敏 张冬青 李红岩 郭瑞光 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期982-986,共5页
采用乙酸乙酯漂浮方法和酸溶解法分别解决了再生水进水中有机杂质以及再生水中剩余絮凝剂干扰隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的关键问题,在此基础上,建立了成本远低于EPA 1623法的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测方法的密度梯度分离/免疫荧光技术... 采用乙酸乙酯漂浮方法和酸溶解法分别解决了再生水进水中有机杂质以及再生水中剩余絮凝剂干扰隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的关键问题,在此基础上,建立了成本远低于EPA 1623法的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测方法的密度梯度分离/免疫荧光技术。利用该方法对我国北方2个城市的污水再生处理系统进行了检测,再生水进出水的回收率分别为18%~31%卵囊和24%~95%包囊,能够满足检测要求。结果表明,在5个再生水系统的9个进水样品中,隐孢子虫的阳性率为89%,平均浓度为26个/10 L;贾第鞭毛虫的阳性率为100%,平均浓度为138个/10 L。再生水出水中也有两虫检出。 展开更多
关键词 再生水 隐孢子虫 贾第鞭毛虫 密度梯度分离
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颗粒物对滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的影响 被引量:4
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作者 张艳芬 李红岩 +1 位作者 刘明洋 郑蓓 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1458-1464,共7页
滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法因具有成本低廉和性能稳定的特点,目前已列入《城镇供水水质标准检验方法》(CJ/T 141-2018)用于水源水和城镇供水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称两虫)的检测。针对实际生产中,水中颗粒物会影响该方法回收... 滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法因具有成本低廉和性能稳定的特点,目前已列入《城镇供水水质标准检验方法》(CJ/T 141-2018)用于水源水和城镇供水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称两虫)的检测。针对实际生产中,水中颗粒物会影响该方法回收率和稳定性的情况,在前期研究的基础上,结合颗粒物大小,进一步探索了浑浊度对滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法检测水中两虫的影响。结果表明,颗粒物大小仅对隐孢子虫回收率有影响,对贾第鞭毛虫无显著影响。其中,隐孢子虫在5μm为主要颗粒物的水中获得最高回收率。浑浊度是影响两虫回收率的主要因素,20 NTU以下浑浊度水样适合采用滤膜浓缩法富集浓缩其中的两虫,尤其是3~5 NTU;20 NTU及其以上浑浊度的水样可采用沉淀浓缩法,在30~50 NTU时有最佳回收率。 展开更多
关键词 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 浑浊度 颗粒物直径 密度梯度分离荧光抗体法
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Percoll及Ficoll分离纯化肝癌移植瘤肿瘤浸润淋巴细胞比较 被引量:1
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作者 孙盼 樊晓晖 +6 位作者 张彬 张磊 蔡双启 梁莹 赖振屏 高灵茜 宋德志 《中国社区医师》 2016年第13期7-8,10,共3页
目的:比较Percoll和Ficoll两种淋巴细胞分离液对肿瘤浸润淋巴细胞纯度及细胞增殖的影响。方法:用Percoll及Ficoll两种淋巴细胞分离液分离H22肝癌小鼠皮下移植瘤内淋巴细胞,对细胞首先行锥虫蓝染色后在显微镜下计算细胞总数和存活率,最... 目的:比较Percoll和Ficoll两种淋巴细胞分离液对肿瘤浸润淋巴细胞纯度及细胞增殖的影响。方法:用Percoll及Ficoll两种淋巴细胞分离液分离H22肝癌小鼠皮下移植瘤内淋巴细胞,对细胞首先行锥虫蓝染色后在显微镜下计算细胞总数和存活率,最后用流式细胞仪分析淋巴细胞纯度及分裂、增殖能力。结果:Percoll及Ficoll分离所得TIL总数分别为(3.28±0.78)×107和(2.02±0.76)×107;Percoll分离所得第3、5、7天的TIL增殖率分别为(22.8±2.31)%、(39.1±1.94)%、(69.85±1.68)%;Ficoll分离所得第3、5、7天的TIL增殖率分别为(13.25±1.68)%、(23.7±5.31)%、(41.5±1.56)%。Percoll分离所得TIL中CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞分别为(73.2±6.8)%、(49.1±10.2)%、(22.0±1.4)%;Ficoll分离所得TIL中CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞分别为(47.9±5.0)%、(29.1±8.4)%、(19.7±5.0)%。结论:与Ficoll相比,Percoll分离所得H22肝癌小鼠皮下移植瘤TIL的细胞得率和纯度更高、增殖力较强,将更有利于后续研究。 展开更多
关键词 肿瘤浸润淋巴细胞 淋巴细胞分离 密度梯度分离 肝癌移植瘤
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P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用 被引量:2
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作者 吴昌归 廖建军 +1 位作者 毛宝龄 孙滨 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第13期1166-1169,共4页
目的 探讨 P物质 (SP)在嗜酸粒细胞 (Eos)活化中的作用及机制 .方法 以非连续性 Percoll密度梯度分离法分离哮喘患者外周血 Eos,了解 SP对 Eos过氧化物酶 (EPO)活性和脱颗粒的调节作用 ,并以苔盼蓝拒染法评价 SP对 Eos存活时间的影响 ... 目的 探讨 P物质 (SP)在嗜酸粒细胞 (Eos)活化中的作用及机制 .方法 以非连续性 Percoll密度梯度分离法分离哮喘患者外周血 Eos,了解 SP对 Eos过氧化物酶 (EPO)活性和脱颗粒的调节作用 ,并以苔盼蓝拒染法评价 SP对 Eos存活时间的影响 .用改良 Boyden法 ,测定 SP对 Eos的趋化活性 ,并观察血小板激活因子 (PAF)对 SP预处理 Eos的趋化作用 .结果  SP能显著增强 EPO活性 ,刺激 Eos脱颗粒 ,且与 PAF有协同性 ,但不能延长 Eos的存活时间 .神经激肽 - 1(NK1)受体拮抗剂 GR712 5 1和磷酯酶 C(PL C)抑制剂新霉素能阻断 SP的上述作用 .SP对 Eos有显著趋化作用 ,其 EC5 0为 1× 10 - 1 4~ 1× 10 - 1 2 m ol· L- 1 ,最大趋化浓度为 1× 10 - 1 0mol· L- 1 ,此后随浓度的增加 ,其趋化作用降低 . PAF对 Eos的趋化作用因 SP预处理 Eos而显著强化 (P<0 .0 1) ,NK1受体拮抗剂 GR712 5 1对 SP的预处理作用有显著的阻断效应 .结论  SP作用于 Eos胞膜上的 NK1受体 ,经百日咳杆菌毒素 (PTX)敏感型 G蛋白 ,活化磷酯酶 C从而激活 Eos.同时SP还是一种 Eos的趋化介质 ,与 PAF有协同作用 。 展开更多
关键词 非连续性Percoll密度梯度分离 嗜酸粒细胞 P物质 哮喘 发病机制
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ISOLATION OF HEPATIC OVAL CELLS FROM DIFFERENT MODEL RATS INCLUDING DIABETIC RATS 被引量:1
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作者 陆颖理 叶婷婷 +3 位作者 夏芳珍 王宁荐 杨华 陈奕 《Journal of Shanghai Second Medical University(Foreign Language Edition)》 2009年第1期7-11,共5页
Objective To acquire oval cells (progenitor stem cells ) from adult rat liver of different models including diabetic rats. Methods Thirty Sprague-Dawley ( SD ) rats were divided into 5 groups randomly: control, 2... Objective To acquire oval cells (progenitor stem cells ) from adult rat liver of different models including diabetic rats. Methods Thirty Sprague-Dawley ( SD ) rats were divided into 5 groups randomly: control, 2-acetylaminofluorene ( 2-AAF ), 2-AAF + partial hepatectomy ( PH ), 2-AAF + carbon tetrachloride ( CCl4 ), and diabetic groups. As two-step collagenase perfusion protocol of Seglen, oval cells were isolated by Percoll density gradient centrifugation. Thy1. 1 positive cells were sorted by flow cytometry, and then cultured in Dulbecco's minimum Eagle's medium (DMEM). Immunofluorescence staining was applied to labelling Thyl. 1. Results Different rates of Thy1.1 positive oval cells were found in different rat model groups : 0. 5 % in 2-AAF, 0. 3% in 2-AAF + PH, 0. 2% in 2-AAF + CCl4, 0. 1% in diabetic, and 0. 0% in control. Isolated cells adhered to plate with fusiform or polygon as epithelial cells. Conclusion Progenitor stem cells exist in injured liver tissue including those from diabetic rats. 展开更多
关键词 diabetes mellitus hepatic oval cells stem cells cell sorting
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Bone Marrow Mononuclear Cell Extraction. Does the Operator Performance Affect Processing Efficacy?
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作者 Jakobsons Eriks Cakstina Inese +9 位作者 Erglis Kristaps Erglis Martins Pirtniece Liene Elina Krumina NarbuteInga Briede Ieva Jegere Sanda Smolova Rita Muiznieks Indrikis Erglis Andrejs 《Journal of Pharmacy and Pharmacology》 2016年第5期192-198,共7页
Different cell populations from bone marrow are used in various clinical trials for cardiac diseases during last decade. Four clinical studies are on going in our institution and enrol patients with cardiac diseases, ... Different cell populations from bone marrow are used in various clinical trials for cardiac diseases during last decade. Four clinical studies are on going in our institution and enrol patients with cardiac diseases, coronary disease and type 2 diabetes, patients with osteoarthritis. Density gradient is used to separate bone marrow mononuclear cells. Cell processing looses are significant. To find out critical control points we analysed processing process and differences in cell yields between operators performing cell extraction. Bone marrow mononuclear cells were isolated using Ficoll density gradient centrifugation. Cells were counted using flow cytometry for mononuclear cell total counts, CD34+ population count and viability analysis. The patients who underwent bone marrow aspiration followed by cell isolation received cell suspension for transplantation. Two cells processing for separate patients were performed at once. Same standard operation procedures were applied. Processing looses between operators performing cell extraction were analysed. Bone marrow samples from eight patients were processed. Mononuclear cells were extracted. Operator performances were compared. Operator A average bone marrow mononuclear cell yield in starting material was 9,97 ± 9,98 %, CD34+ population yield 75,46±79,67%. Operator B average bone marrow mononuclear cell yield in starting material was 24,68 ± 14,8 %, CD34+ population yield 70,42 ±44.84%. Operator A average cell viability in starting material was 45,24 ± 9,55%, after cell processing 42,96 ± 23,66 %. Operator B average cell viability in starting material was 49,85 ± 5,48%, after cell processing 69,52 ± 6,65 %. 展开更多
关键词 Bone marrow mononuclear cells cell yield cell extraction cell count
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Tunable Separation of Single-Walled Carbon Nanotubes by Dual-Surfactant Density Gradient Ultracentrifugation 被引量:2
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作者 Pei Zhao Erik Einarsson +3 位作者 Georgia Lagoudas Junichiro Shiomi Shohei Chiashi Shigeo Maruyama 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第7期623-634,共12页
We present a systematic study of the effects of surfactants in the separation of single-walled carbon nanotubes (SWNTs) by density gradient ultracentrifugation (DGU). Through analysis of the buoyant densities, lay... We present a systematic study of the effects of surfactants in the separation of single-walled carbon nanotubes (SWNTs) by density gradient ultracentrifugation (DGU). Through analysis of the buoyant densities, layer positions, and optical absorbance spectra of SWNT separations using the bile salt sodium deoxycholate (DOC) and the anionic salt sodium dodecyl sulfate (SDS), we clarify the roles and interactions of these two surfactants in yielding different DGU outcomes. The separation mechanism described here can also help in designing new DGU experiments by qualitatively predicting outcomes of different starting recipes, improving the efficacy of DGU and simplifying post-DGU fractionation. 展开更多
关键词 Single-walled carbon nanotubes density gradient ultracentrifugation sodium deoxycholate sodium dodecyl sulfate
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Separation of Gold Nanorods Using Density Gradient Ultracentrifugation 被引量:1
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作者 Shuai Li Zheng Chang Junfeng Liu Lu Bai Liang Luo Xiaoming Sun 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第8期723-728,共6页
High quality gold nanorods (NRs) with a monodisperse size and aspect ratio are essential for many applications. Here, we describe how nearly monodisperse gold NRs can be separated from polydisperse samples using den... High quality gold nanorods (NRs) with a monodisperse size and aspect ratio are essential for many applications. Here, we describe how nearly monodisperse gold NRs can be separated from polydisperse samples using density gradient ultracentrifugation. Size and dimension analysis by transmission electron microscopy (TEM) and absorption spectroscopy revealed that the Au NRs were separated mainly as a function of their aspect ratio The surface-enhanced Raman scattering (SERS) activity of Au NRs with lower aspect ratio is notably stronger than that of NRs with higher aspect ratio under 633 nm laser excitation, due to the size-dependent absorption of the longitudinal plasmon band. The separation approach provides a method to improve the quality of NRs produced by large scale synthetic methods. 展开更多
关键词 Au nanorods aspect ratio density gradient SEPARATION surface-enhanced Raman scattering (SERS)
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Nanoseparation-lnspired Manipulation of the Synthesis of CdS Nanorods 被引量:2
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作者 Xiaoming Sun Xiuju Ma +6 位作者 Lu Bai Junfeng Liu Zheng Chang David G. Evans Xue Duan Jiaou Wang Joseph F. Chiang 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2011年第2期226-232,共7页
CdS nanorods have been sorted by length using a density gradient ultracentrifuge rate separation method. The fractions containing longer rods showed relatively stronger oxygen-related surface trap emission, while the ... CdS nanorods have been sorted by length using a density gradient ultracentrifuge rate separation method. The fractions containing longer rods showed relatively stronger oxygen-related surface trap emission, while the shorter ones had dominant band-edge emission. These results suggest that the final length distribution of CdS nanorods is not a result of random nucleation and growth, but is related to the local synthesis conditions. Inspired by these findings, different synthesis environments (N2, air, and 02) have been employed in order to tailor the length distribution. In addition to the rod length, the photoluminescence properties of CdS nanorods can also be manipulated. Increasing the oxygen partial pressure significantly changed the growth behavior of CdS nanorods by improving the anisotropic growth. 展开更多
关键词 Nanoseparation quantum rods CDS PHOTOLUMINESCENCE controlled synthesis
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