套式RT-PCR检测牛呼吸道合胞体病毒的研究 被引量：13

1

作者 史鸿飞 朱远茂 +4 位作者 高欲燃 任宪刚 冯军科 于作 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期238-240,共3页

为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV... 为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV阳性样品的F基因扩增产物进行了序列测定与分析。用该套式RT-PCR对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒等进行了检测,结果无交叉反应,表明该检测方法具有良好的特异性。本研究首次用套式RT-PCR技术证实了我国部分省的牛群中存在BRSV感染。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 套式rt-pcr 牛鼻腔拭子

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套式RT-PCR检测猪繁殖和呼吸综合征病毒的研究 被引量：6

2

作者 赵耘 张广州 +2 位作者 秦玉明 宁宜宝 王琴 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期77-80,共4页

参照ATCC VR-2332株及LV株保守区段设计了3条引物,以此建立了检测猪繁殖和呼吸综合征病毒的套式RT-PCR方法。利用其分别对ATCC VR-2332株、LV株及B13株进行套式RT-PCR,结果从3个不同地区分离的毒株中均能特异性的扩增出相应的片段,大小... 参照ATCC VR-2332株及LV株保守区段设计了3条引物,以此建立了检测猪繁殖和呼吸综合征病毒的套式RT-PCR方法。利用其分别对ATCC VR-2332株、LV株及B13株进行套式RT-PCR,结果从3个不同地区分离的毒株中均能特异性的扩增出相应的片段,大小分别约为430bp(预期片段为430bp)、410bp(预期片段为413bp)及410bp(预期片段为413bP),而3个非PRRSV的病毒(猪瘟病毒、细小病毒及伪狂犬病毒)均未扩增出相应的片段。其敏感性可达到10^(-2)TCID_(50),比一步法RT-PCR方法敏感性提高了10000倍。本方法的建立使猪繁殖和呼吸综合征病毒的检测更为敏感、快捷及准确。 展开更多

关键词 套式rt-pcr 特异性 敏感性 一步法rt-pcr

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单管半套式RT-PCR法检测贝类中轮状病毒的研究 被引量：6

3

作者 寇晓霞 吴清平 +1 位作者 张菊梅 范宏英 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期401-404,共4页

轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT_PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低。在实验室模拟自然环... 轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT_PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低。在实验室模拟自然环境,以人工播毒的方式使贝类富集轮状病毒,运用单管半套式RT_PCR法进行检测,并将单管半套式RT_PCR与ELISA、RT_PCR的检测灵敏度做了比较,表明单管半套式RT_PCR比ELISA的灵敏度高10 0 0倍,是传统RT_PCR的10倍,有时甚至10 0倍。另外,单管半套式RT_PCR法降低了实验过程中的内源性和外源性污染,使检测所需时间从6h缩短至4 5h ,大大改进和完善了食源性病毒检测方法。并同时以整只贝和仅以贝的消化道为样检测表明,以消化道为样时的病毒检出率和检测灵敏度较高。 展开更多

关键词 贝类 轮状病毒 半套式rt-pcr 食源性 检测

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用套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA 被引量：5

4

作者 肖一红 尹训南 +2 位作者 仇华吉 李娜 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期389-393,共5页

利用套式反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对实验性感染猪瘟病毒猪的福尔马林固定石蜡包埋组织标本中的病毒RNA进行检测,将所扩增产物点样于尼龙膜上进行Dot-blotting鉴定,扩增结果与各器官的病理组织学变化进行了比较。从攻毒对照组... 利用套式反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对实验性感染猪瘟病毒猪的福尔马林固定石蜡包埋组织标本中的病毒RNA进行检测,将所扩增产物点样于尼龙膜上进行Dot-blotting鉴定,扩增结果与各器官的病理组织学变化进行了比较。从攻毒对照组猪的肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结和扁桃体中检出了猪瘟病毒RNA,未从免疫攻毒猪只的脏器中检出猪瘟病毒RNA;所有扩增产物经Dot-blotting鉴定均得到了阳性信号;病毒基因的检出率与猪瘟病毒导致的病理组织学变化程度相一致。本试验成功建立了套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA方法,为猪瘟病毒的诊断和回顾性分析提供了技术手段。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 石蜡包埋组织 病理变化 套式rt-pcr Dot-blotting

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应用半套式RT-PCR技术诊断番鸭呼肠孤病毒病 被引量：6

5

作者 林锋强 胡奇林 +4 位作者 陈少莺 欧阳岁东 陈仕龙 朱小丽 程晓霞 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期107-109,共3页

参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚... 参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和番鸭胚成纤维细胞(MDEF)培养物进行扩增.结果仅能从MDRV中扩增出300 bp特异片段,而不能从ARV、MPV、GPV、CEF和MDEF细胞培养物中扩增出特异片段;该方法检测灵敏度为1 fg核酸,重复性好.对人工感染和临床疑似病例用病毒分离和半套式RT-PCR进行检测,2种方法符合率为100%.因此,该半套式RT-PCR可以用于番鸭呼肠孤病毒病的临床快速检测. 展开更多

关键词 半套式rt-pcr 诊断 番鸭呼肠孤病毒

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应用套式RT-PCR快速检测鸭坦布苏病毒 被引量：52

6

作者 颜丕熙 李国新 +3 位作者 吴晓刚 闫丽萍 滕巧泱 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第3期34-37,共4页

鸭坦布苏病毒是新发现的一种可引起鸭产蛋下降、生长迟缓和死亡的黄病毒。目前尚无可靠的快速诊断方法用于该病毒的检测。本研究根据鸭坦布苏病毒E基因序列,设计了2对重叠引物P1、P2和P3、P4,建立了检测鸭坦布苏病毒的套式RT-PCR方法,... 鸭坦布苏病毒是新发现的一种可引起鸭产蛋下降、生长迟缓和死亡的黄病毒。目前尚无可靠的快速诊断方法用于该病毒的检测。本研究根据鸭坦布苏病毒E基因序列,设计了2对重叠引物P1、P2和P3、P4,建立了检测鸭坦布苏病毒的套式RT-PCR方法,该套式RT-PCR比一般PCR敏感性高10倍。采用该方法对安徽省、河北省、山东省、浙江省、上海市等地发病鸭场的63份样品进行了检测,阳性检出率为48/63(76.2%),而病毒分离率仅为13/63(20.6%)。由此表明,与其他方法相比较,本试验所建立的套式RT-PCR方法具有快速、敏感、特异优点,可用于鸭坦布苏病毒的流行病学调查及病毒的检测。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 套式rt-pcr 鉴定

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日本脑炎病毒套式RT-PCR方法的建立与初步应用 被引量：6

7

作者 李茂宁 赵武 +8 位作者 陈云霞 梁家幸 肖爱欢 李斌 刘芳 何颖 梁保忠 甘书钻 黄伟坚 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期5-8,共4页

根据GenBank上登录的日本脑炎病毒(JEV)E基因序列,设计内外2对引物。以JEV疫苗株为模板,建立了检测猪JEV的套式RT-PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为228bp的目的片段;检出JEV-RNA的灵敏度约为0.3pg... 根据GenBank上登录的日本脑炎病毒(JEV)E基因序列,设计内外2对引物。以JEV疫苗株为模板,建立了检测猪JEV的套式RT-PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为228bp的目的片段;检出JEV-RNA的灵敏度约为0.3pg。表明所建立的套式RT-PCR方法对JEV的检测敏感性高、特异性强。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 套式rt-pcr 检测

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生物制品中牛病毒性腹泻病毒RT-PCR及套式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：6

8

作者 顾蓓蓓 王妍鳕 +2 位作者 李双洁 卢劲晔 苗晋锋 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第8期30-32,共3页

为建立生物制品中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的检测方法,根据Gen Bank公布的BVDV序列,分别设计了普通PCR和套式PCR的特异性引物,建立了检测BVDV的普通PCR和套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以快速检测出生物制品中的BVDV污染,为生... 为建立生物制品中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的检测方法,根据Gen Bank公布的BVDV序列,分别设计了普通PCR和套式PCR的特异性引物,建立了检测BVDV的普通PCR和套式PCR检测方法。结果表明,该方法可以快速检测出生物制品中的BVDV污染,为生物制品中BVDV的快速、低含量检测提供了简单快速的检测方法。 展开更多

关键词 牛血清 疫苗 牛病毒性腹泻病毒 套式rt-pcr

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多重套式RT-PCR检测患者凝血块中登革病毒RNA(英文) 被引量：3

9

作者 张拥军 黄萌 +2 位作者 翁育伟 郑友限 王金章 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期832-836,共5页

目的建立简便、灵敏、适合于全部血清型登革病毒核酸检测的多重套式RT-PCR体系,检测临床样品中登革病毒RNA,作为实验室辅助诊断的依据。方法利用登革病毒标准株核酸,建立多重RT-PCR检测方法。提取患者凝血块总RNA,分别用一步法RT-PCR及... 目的建立简便、灵敏、适合于全部血清型登革病毒核酸检测的多重套式RT-PCR体系,检测临床样品中登革病毒RNA,作为实验室辅助诊断的依据。方法利用登革病毒标准株核酸,建立多重RT-PCR检测方法。提取患者凝血块总RNA,分别用一步法RT-PCR及多重套式RT-PCR检测。结果通过对检测体系进行优化,多重RT-PCR能够同时检测4种血清型登革病毒核酸。采用多重套式RT-PCR方法,从8例登革热患者凝血块中有4例检测到病毒RNA,而其它核酸检测方法仅检出1例阳性。结论多重套式RT-PCR的方法能够从临床凝血块样品中检测到登革病毒核酸,并同时进行血清学分型,简化了登革病毒核酸检测步骤,有利于对临床样品开展病毒核酸检测。 展开更多

关键词 登革病毒 多重套式rt-pcr 核酸检测

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禽呼肠病毒套式RT-PCR检测方法的建立 被引量：6

10

作者 毕研丽 王金良 +5 位作者 郭广君 杨慧 吕素芳 宋峰 苗立中 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第8期21-24,共4页

根据GenBank中登录的禽呼肠病毒(ARV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为247 bp,建立了适合ARV快速检测的套式RT-PCR方法(RT-nested-PCR)。采用该方法对REV毒株进行了检测,均能扩增... 根据GenBank中登录的禽呼肠病毒(ARV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为247 bp,建立了适合ARV快速检测的套式RT-PCR方法(RT-nested-PCR)。采用该方法对REV毒株进行了检测,均能扩增到247 bp的条带,而禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性腔上囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生病病毒、马立克病病毒和鸭瘟病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。该检测方法表明,所建立的逆转录套式RT-PCR方法比普通RT-PCR方法敏感性高,具有重复性好、特异性强、敏感性高等优点,可用于禽呼肠病毒的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 逆转录套式rt-pcr 检测

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西尼罗病毒套式RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

11

作者 宋捷 唐泰山 +7 位作者 田玲玲 张常印 雷治海 孙旭辉 陈国强 赵建 王凯民 姜焱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1411-1414,1418,共5页

从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测... 从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测方法,经各反应条件的优化后,发现2套nest-PCR引物能分别扩增出85个拷贝和62个拷贝的双链DNA,对乙型脑炎病毒、黄热病毒等11种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立套式RT-PCR具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸WNV的检测和监测。 展开更多

关键词 西尼罗病毒 套式rt-pcr 特异性 灵敏度

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应用多重套式RT-PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的融合基因 被引量：1

12

作者 何军 陈子兴 +4 位作者 薛永权 李建琴 何海龙 黄益萍 朱伶俐 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期91-94,共4页

目的　研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法　采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果　64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 1... 目的　研究染色体结构易位所致的融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的表达。方法　采用多重套式RT PCR结合染色体R带或G带核型分析、流式细胞仪细胞免疫表型检测对 64例儿童ALL进行分析。结果　64例ALL患儿中 23例(36. 0% )具有 13种染色体畸变产生的融合基因,包括E2A/PBX1,E2A/HLF,TEL/AML1,TLS/ERG,MLL/AF4,MLL/AF9,MLL/AF10,MLL/AFX,MLL/AF6,MLL/ELL,dupMLL,TAL1D,HOX11。ALL患儿融合基因和染色体总畸变率为 67. 2%(43 /64)。结论　多重套式RT PCR结合染色体核型、免疫表型是儿童ALL临床诊断、治疗和预后判断的重要依据。 展开更多

关键词 融合基因 儿童急性淋巴细胞白血病 套式rt-pcr 治疗 RT—PCR 患儿 细胞免疫表型 染色体 畸变率 核型分析

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用套式RT-PCR检测兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物中的RSV和HPIV-3 被引量：2

13

作者 白慕群 安红 +1 位作者 包红 周旭 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期40-42,共3页

为了调查兰州地区肺炎患儿中RSV和HPIV-3的感染状况,分别在RSV的G蛋白基因的保守序列和HPIV-3的HN基因的保守序列处,设计了套式引物,采用套式RT-PCR的方法检测了60份兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物样本,结果显示,60份样本中RSV阳性为14... 为了调查兰州地区肺炎患儿中RSV和HPIV-3的感染状况,分别在RSV的G蛋白基因的保守序列和HPIV-3的HN基因的保守序列处,设计了套式引物,采用套式RT-PCR的方法检测了60份兰州地区肺炎患儿下呼吸道分泌物样本,结果显示,60份样本中RSV阳性为14例(23%),HPIV-3阳性为12例(20%)。并分别随机对其中的5份样本的扩增产物进行了基因序列测定,结果5份RSV阳性样本与参考株序列的同源性均大于97%,5份HPIV-3阳性样本与参考株序列的同源性大于97%。表明兰州地区下呼吸道感染患儿中,RSV和HPIV-3是常见的感染病原体。 展开更多

关键词 套式rt-pcr 呼吸道合胞病毒 副流感病毒3型 检测

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应用套式RT-PCR检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒 被引量：1

14

作者 王效义 戴二黑 +15 位作者 杜宗敏 刘海洪 韩延平 庞昕 翟俊辉 江凌晓 陈泽良 邱茂峰 王津 王宏霞 郭兆彪 杨瑞馥 吴清发 李京湘 杨玲 汪建 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期471-473,共3页

建立了套式RT-PCR方法检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒的方法,并检测血液样品257份。同时将RT-PCR与ELISA检测IgG、IgM的方法进行了比较。结果RT-PCR方法的总检出率为72%,IgG总检出率为68%,IgM总检出率为43%。

关键词 检出率 SARS冠状病毒 SARS患者 套式rt-pcr 血液样品 rt-pcr方法 ELISA检测 应用

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检测SARS冠状病毒的套式RT-PCR方法的建立与初步应用

15

作者 赵卫 晏辉钧 +5 位作者 张文炳 方丹云 周经姣 朱利 江丽芳 龙北国 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第3期455-456,459,共3页

[目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)组织培养上清中提取RNA,利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物,进行逆转录及套式PCR... [目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)组织培养上清中提取RNA,利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物,进行逆转录及套式PCR扩增。扩增出的阳性片段连接入pGEM-T载体中,测序后比较其与其他已知SARS冠状病毒的同源性。[结果]从SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及SARS冠状病毒组织培养上清中均可扩增出阳性片段,经测序后证实是SARS冠状病毒特有序列。[结论]针对SARS冠状病毒多聚酶基因所建立的套式RT-PCR方法适用于临床标本及组织培养标本中SARS冠状病毒的检测。 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 套式rt-pcr 检测

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半套式RT-PCR检测动物狂犬病病毒的研究

16

作者 袁颖烁 赵敬慧 +4 位作者 宋菲菲 刘晔 张守峰 张乐萃 扈荣良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期13-16,共4页

基于我国流行的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)均属基因I型,本研究根据GenBank公布的31株RV N基因全序列,选取保守区域设计2对引物,建立了一种检测RV的半套式聚合酶链式反应(Semi-nested RT-PCR),并对引物的灵敏性、敏感性和特异性进行检... 基于我国流行的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)均属基因I型,本研究根据GenBank公布的31株RV N基因全序列,选取保守区域设计2对引物,建立了一种检测RV的半套式聚合酶链式反应(Semi-nested RT-PCR),并对引物的灵敏性、敏感性和特异性进行检测。将该方法检测的36份新鲜脑组织样品,与荧光抗体染色法(FAT)进行比较,并将PCR结果为阳性的新鲜样品室温下放置腐败后进行检测。结果显示,该方法灵敏度检测可达到0.01TCID50/mL。对检测呈阳性的病料进行序列分析,全部为狂犬病病毒;检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬腺病病毒(CAV)、伪狂犬病病毒(PRV)等非狂犬病病毒,结果均为阴性,表明该引物特异性较高。该方法与FAT检测结果完全一致,并能从腐败样品中检出RV,更适用于腐败样品的检测,具有快速、准确的特点,可广泛应用于广大基层狂犬病的诊断及试验研究。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 半套式rt-pcr 诊断

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西部马脑炎病毒基因组序列的半套式RT-PCR检测

17

作者 赵月峨 于曼 +4 位作者 邓永强 杨保安 吕富双 祝庆余 秦鄂德 《微生物学免疫学进展》 2003年第1期7-10,共4页

为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进... 为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR ;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化 ,以进一步提高扩增的特异性。结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度 ,其半套式扩增出特定大小的DNA产物 ;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性。扩增产物约为 190bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致。结果表明采用半套式RT PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高 10 展开更多

关键词 西部马脑炎病毒 半套式rt-pcr 基因组序列

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应用套式RT-PCR对山东省近年流行的汉坦病毒基因分型的初步研究

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作者 孟祥芝 梁玉玲 +5 位作者 陈现彬 李德新 马伟 李文欢 金朝杭 党锡连 《济宁医学院学报》 2001年第1期14-17,共4页

目的　研究山东省近年流行的汉坦病毒的基因型别 ,为山东省汉坦病毒的防治提供依据。方法　使用McAb -IFA ,HI分型 ,RT -PCR分型技术及核苷酸序列测定技术 ,对来源于山东省各主要HFRS疫区的 98份病人血清进行基因分型 ,对部分标本PCR产... 目的　研究山东省近年流行的汉坦病毒的基因型别 ,为山东省汉坦病毒的防治提供依据。方法　使用McAb -IFA ,HI分型 ,RT -PCR分型技术及核苷酸序列测定技术 ,对来源于山东省各主要HFRS疫区的 98份病人血清进行基因分型 ,对部分标本PCR产物纯化 ,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定 ,最后用DNASTAR对核苷酸序列进行分析比较。结果　 2 6份恢复期血清中McAb -IFA分型 2 2份为SEO型 ,HI分型 2 4份SEO型 ;72份急性期病人血清标本中 65例RT -PCR分型为SEO型 ,获得了来自不同地市汉坦病毒 5个样品M片段 ( 134 3～ 1630nt)序列 ;序列比较分析发现 ,山东省内流行的SEO型汉坦病毒核苷酸的同源性较高 ,型间差异一般不超过 7% ,从种系发生树看这些病毒分布在一个分支上 ,表现出明显的地理聚集现象。结论　近年流行的汉坦病毒仍以SEO型为主 ,且病毒间同源性较高 。 展开更多

关键词 汉坦病毒 套式rt-pcr 基因分型 序列分析 山东

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H4亚型禽流感病毒套式RT-PCR检测方法的建立 被引量：3

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作者 吴嫒琼 谢芝勋 +7 位作者 胡庭俊 谢丽基 罗思思 邓显文 谢志勤 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2015年第2期11-15,共5页

旨在建立一种快速、准确检测H4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对H4亚型AIV HA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了H4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出H4亚型AIV,对其他常... 旨在建立一种快速、准确检测H4亚型禽流感病毒(AIV)的方法,针对H4亚型AIV HA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了H4亚型AIV套式RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该法可特异性检测出H4亚型AIV,对其他常见禽病病原体无交叉;敏感性试验结果显示,该法对H4亚型AIV检测下限为360fg/μL;用该法对106份临床样品进行检测,临床样品检测结果与病毒分离结果一致。本研究建立的套式RT-PCR方法为H4亚型AIV的早期诊断及有效防控提供了快速、特异和敏感的检测方法。 展开更多

关键词 H4亚型 禽流感病毒 套式rt-pcr 检测

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番鸭呼肠孤病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

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作者 李启强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期83-86,共4页

根据GenBank上发表的鸭呼肠孤病毒基因组序列,利用生物学软件设计合成内外2对引物,建立了检测番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的套式RT-PCR检测方法,并运用建立的检测方法对分离病毒与其他禽病病毒进行检测。结果显示,该方... 根据GenBank上发表的鸭呼肠孤病毒基因组序列,利用生物学软件设计合成内外2对引物,建立了检测番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的套式RT-PCR检测方法,并运用建立的检测方法对分离病毒与其他禽病病毒进行检测。结果显示,该方法能从MDRV中扩增到与预期大小相符的特异性目的片段,检测灵敏度达到0.1pg病毒RNA,对禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)、鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)、鸭病毒性肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)等病毒样品的扩增结果均为阴性。因此,本研究为番鸭呼肠孤病毒病的快速检测及诊断研究提供参考。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 套式rt-pcr 检测

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