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套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫 被引量:9
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作者 王权 周金林 +5 位作者 钱应娟 陈永军 张惠英 周勇志 王永康 徐新红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期582-584,共3页
为了检测样品中的微量隐孢子虫 ,从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中 ,直接提取DNA用作初始PCR(Initial PCR)模板 ,以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR(Nested PCR) ,用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物 ,扩增大小分... 为了检测样品中的微量隐孢子虫 ,从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中 ,直接提取DNA用作初始PCR(Initial PCR)模板 ,以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR(Nested PCR) ,用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物 ,扩增大小分别为 540pb、2 58pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定 ,可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段 ,而阴性对照不能扩增目的片段 ;初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊1 0 0、5个 /g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为 1 6 4%。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高 1 0 0倍 。 展开更多
关键词 套式pcr检测 奶牛 粪便 隐孢子虫
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应用套式PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的试验 被引量:14
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作者 沈海娥 郭福生 +3 位作者 龚振华 孙淑芳 裘孝良 郝勤宗 《中国动物检疫》 CAS 2003年第7期21-23,共3页
根据猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的S基因核苷酸序列 ,设计合成了2对引物 ,以猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒细胞培养物为模板 ,进行PCR特异性片段扩增 ,猪传染性胃肠炎病毒扩增片段大小为886bp,猪呼吸道冠状病毒扩增... 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的S基因核苷酸序列 ,设计合成了2对引物 ,以猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒细胞培养物为模板 ,进行PCR特异性片段扩增 ,猪传染性胃肠炎病毒扩增片段大小为886bp,猪呼吸道冠状病毒扩增片段大小为214bp。建立的套式PCR经过特异性、敏感性试验及对临床送检样品检测 ,证明本法具有快速、特异和高度敏感的特点。 展开更多
关键词 应用 套式pcr检测 传染性胃肠炎病毒 呼吸道冠状病毒 试验
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套式PCR检测试剂盒用于普查疟疾带虫率的评价(英文) 被引量:2
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作者 李国铭 周耀芳 +7 位作者 邓常生 杨雪芹 罗晓莉 陈颖婷 杨瑞仪 曾庆平 李国桥 冯丽玲 《广州中医药大学学报》 CAS 北大核心 2013年第6期839-842,848,共5页
【目的】评价套式PCR检测试剂盒在疟疾现场监测中的效果。【方法】对疟疾从高度流行区转入低度流行区的非洲科摩罗Moheli岛居民,采集其指血2 098人份,同时制作厚血片和抗凝血样,用自制的套式PCR检测试剂盒检测所采集血样中的疟原虫,并... 【目的】评价套式PCR检测试剂盒在疟疾现场监测中的效果。【方法】对疟疾从高度流行区转入低度流行区的非洲科摩罗Moheli岛居民,采集其指血2 098人份,同时制作厚血片和抗凝血样,用自制的套式PCR检测试剂盒检测所采集血样中的疟原虫,并与镜检法进行比较。为了避免假阳性,试验中设置了阴性对照组和阳性对照组。【结果】2 098份血样中,套式PCR技术阳性数140人,阳性率为6.67%;镜检阳性数63人,阳性率为3.00%。【结论】套式PCR检测试剂盒检测疟疾感染具高度敏感性,在疟疾控制转入清除阶段,采用此法普查可发现低密度疟原虫携带者,对快速清除传染源将有重要价值。 展开更多
关键词 套式pcr检测试剂盒 科摩罗 监测 清除疟疾
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套式PCR检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)方法应用 被引量:4
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作者 邢进 肖镜 +1 位作者 王吉 贺争鸣 《实验动物科学》 2008年第5期53-55,共3页
目的检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况。方法采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较。结果从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在... 目的检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况。方法采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较。结果从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在,检出率2/148;ELISA检出率5/148。结论PCR与ELISA检测方法相结合,准确率高,证明目前小鼠中存在LCMV的感染。 展开更多
关键词 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 套式pcr检测
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎的逆转录套式PCR检测
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作者 黄成斌 潘玲 +1 位作者 毛火云 黄显明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第4期143-145,共3页
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 套式pcr检测 鸭病毒性肝炎 逆转录 CDNA文库 诊断方法 VIRUS HRP标记
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半套式PCR检测石蜡包埋组织中猪圆环病毒2型方法的探讨 被引量:3
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作者 聂立欣 孔小明 +2 位作者 罗满林 亓文宝 崔建鑫 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期80-82,共3页
半套式 PCR是采用一对半特异性引物对目的基因进行扩增的一种方法 ,该方法较常规 PCR的更敏感和更特异。本试验即采用该种方法 ,从石蜡包埋组织中提取圆环病毒 DNA进行 PCR扩增 ,来检测猪圆环病毒。结果表明组织石蜡切片经二甲苯脱蜡 ,... 半套式 PCR是采用一对半特异性引物对目的基因进行扩增的一种方法 ,该方法较常规 PCR的更敏感和更特异。本试验即采用该种方法 ,从石蜡包埋组织中提取圆环病毒 DNA进行 PCR扩增 ,来检测猪圆环病毒。结果表明组织石蜡切片经二甲苯脱蜡 ,蛋白酶 K消化 ,利用半套式 PCR方法 ,得到 43 2 bp的特异性扩增产物 ,从而建立了一种新的检测圆环病毒的方法 。 展开更多
关键词 套式pcr检测 石蜡 包埋组织 猪圆环病毒 多系统衰竭综合征 临床症状
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用套式PCR检测牛疱疹病毒1和5型
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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1999年第6期6-6,共1页
美国研究人员研制了一种敏感的套式PCR法,可以同时检测和区分牛疱疹病毒1和5型(BHV—1和BHV—5)。本法用源于gC顺序的型通用引物扩增后,用型特异的套式引物扩增产生与相应型特异的不同大小的带和印迹杂交证实病毒型。本法可以常规检出... 美国研究人员研制了一种敏感的套式PCR法,可以同时检测和区分牛疱疹病毒1和5型(BHV—1和BHV—5)。本法用源于gC顺序的型通用引物扩增后,用型特异的套式引物扩增产生与相应型特异的不同大小的带和印迹杂交证实病毒型。本法可以常规检出每种病毒不足0. 展开更多
关键词 套式pcr检测 牛疱疹病毒 pcr 引物扩增 同时检测 印迹杂交 三叉神经节 病毒分离 病毒型 同大小
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用套式PCR检测蓝舌病病毒
8
作者 邱昌庆 《畜牧兽医科技信息》 1998年第19期6-6,共1页
美国I.E.Aradaib等从BTV17型(BTV—17)的非结构蛋白1基因中选择了2对寡核苷酸引物对(BTV<sub>1</sub>、BTV<sub>4</sub>和BTV<sub>2</sub>、BTV<sub>3</sub>),用于套式多聚酶链反... 美国I.E.Aradaib等从BTV17型(BTV—17)的非结构蛋白1基因中选择了2对寡核苷酸引物对(BTV<sub>1</sub>、BTV<sub>4</sub>和BTV<sub>2</sub>、BTV<sub>3</sub>),用于套式多聚酶链反应(PCR)试验中的两步扩增。第一步,使用外引物对BTV<sub>1</sub>和BTV<sub>4</sub>进行扩增,获得一个有826个碱基对(bp)的产品;第二步,用套式或内引物对BTV<sub>2</sub>和BTV<sub>3</sub>进行扩增,产生一种有517bp的PCR产品。应用这种套式PCR测定法,可以检测出在细胞培养物中繁殖的北美原型血清型2、10、11、13和17BTV的RNA。使用套式引物对BTV<sub>2</sub> 展开更多
关键词 套式pcr检测 蓝舌病病毒 多聚酶链反应 非结构蛋白1 流行性出血热病毒 血清型 细胞培养物 两步扩增 家畜流行病学 病毒分离
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套式PCR检测唾液中变形链球菌及远缘链球菌 被引量:1
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作者 谭海平 边专 +2 位作者 樊明文 陈智 范兵 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期223-226,共4页
目的 探索一种快速、简便地从人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌的方法。方法 分别以变形链球菌 gtfI和远缘链球菌 gtfB基因设计两组成套引物 ,首先用套式PCR(二次PCR)检测变形链球菌和远缘链球菌标准株和临床株 ,然后用套式... 目的 探索一种快速、简便地从人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌的方法。方法 分别以变形链球菌 gtfI和远缘链球菌 gtfB基因设计两组成套引物 ,首先用套式PCR(二次PCR)检测变形链球菌和远缘链球菌标准株和临床株 ,然后用套式PCR直接从唾液中检测这两种细菌。结果 变链菌 (血清型c,e ,f)的标准株及临床株第 1次PCR扩增产物为 5 17bp ,第 2次扩增产物为 4 6 8bp ;远缘链球菌 (血清型d ,g)及道勒链球菌 (血清型h)的标准株及临床株第 1次PCR扩增产物为 712bp ,第 2次扩增产物为 6 6 3bp ;其他异种菌均不能扩增出产物 ,因此该PCR检测具有高度的特异性。细菌纯培养物及唾液PCR检测的敏感性分别是 :第 1次PCR为 10 5CFU ,第 2次PCR为10 3 CFU。结论 套式PCR能快速在人类唾液中同时检测变形链球菌和远缘链球菌。该检测方法有望运用于临床检测 。 展开更多
关键词 套式pcr检测 唾液 变形链球菌 远缘链球菌 龋病
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免疫套式PCR鉴定HBV标志物阴性肝炎中的乙型肝炎病毒感染 被引量:2
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作者 陈国致 聂青和 +1 位作者 李玉华 王忠碧 《实用肝脏病杂志》 CAS 1997年第4期216-216,共1页
采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测血清HBV DNA,一般都用常规法,即血清标本不经任何处理,就直接加裂解液裂解,扩增时也只用一对引物。该法虽然比分子杂交法敏感,但我们在日常工作中也常发现。
关键词 套式pcr检测 HBV标志物 肝炎病毒DNA 免疫聚合酶链反应 常规pcr 乙型 血清标志物 分子杂交法 重庆市 常规法
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逆转录套式PCR检测丙型肝炎病毒感染者HCV RNA
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作者 柳青 冯桂湘 林裕龙 《中国检验医学与临床》 2002年第4期159-160,共2页
目的 探讨人血清和外周血单个核细胞(PBMC)中丙型肝炎病毒(HCV)RNA与血清IgG和IgM抗体联合检测对丙型肝炎的诊断价值。方法对以ELISA方法检测所得的46例HCV—IgG阳性的标本用逆转录套式聚合酶锭反应... 目的 探讨人血清和外周血单个核细胞(PBMC)中丙型肝炎病毒(HCV)RNA与血清IgG和IgM抗体联合检测对丙型肝炎的诊断价值。方法对以ELISA方法检测所得的46例HCV—IgG阳性的标本用逆转录套式聚合酶锭反应(RT—NestedPCR)检测血清和PBMC中HCVRNA,同时用ELISA方法检测血清中HCV—IgM。结果血清中有17例HCV RNA阳性和6例HCV—IgM阳性,而PBMC中有19例HCVRNA阳性。结论血清中HCV—IgM可作为丙型肝炎的初筛诊断,HCV—IgM可作为HCV近期感染的指标,但二者均不能准确反映病毒在体内的存在情况,而套式PCR方法检测HCVRNA可直接反映HCV在体内的活动情况,其中PBMC中检测HCVRNA的阳性率高于血清,提示HCV可能在PBMC中潜伏乃至复制。 展开更多
关键词 逆转录套式pcr检测 丙型肝炎病毒 感染 HCV RNA
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大豆及腐竹中转基因成分的多重PCR分析 被引量:16
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作者 邵碧英 陈文炳 +1 位作者 江树勋 李寿崧 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第1期117-121,共5页
采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重... 采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重PCR分析,筛选到7个含转基因成分的样品.半嵌套式PCR检测结果表明阳性样品中的外源目的基因为来自根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因.最后成功进行了扩增内源LECTIN基因、CaMV35S启动子和NOS终止子的三重PCR分析,以及内源LECTIN基因和EPSPS基因的二重PCR分析,得到预期结果.多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在植物产品的转基因成分检测上具有重要的应用价值. 展开更多
关键词 大豆 多重pcr分析 根癌农杆菌 终止子 套式pcr检测 外源 转基因成分 NOS 阳性 MV
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小麦印度腥黑穗病菌的分子检测 被引量:10
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作者 张竞宇 张正光 +1 位作者 王源超 郑小波 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第1期31-36,共6页
根据GenBank中登录Tilletia属的20个种的核糖体转录间隔区(ITS)序列差异设计1对引物T1/T2,可以特异地从T.indica和T.wallceri菌株中扩增到一条450bp左右的条带,而从其他供试菌株中不能扩增出条带,表明该对引物可以将这二个种与Tille... 根据GenBank中登录Tilletia属的20个种的核糖体转录间隔区(ITS)序列差异设计1对引物T1/T2,可以特异地从T.indica和T.wallceri菌株中扩增到一条450bp左右的条带,而从其他供试菌株中不能扩增出条带,表明该对引物可以将这二个种与Tilletia其他种区分开。进一步根据T.indica和T.walked的线粒体DNA序列的差异设计一对引物M1/M2,只能特异地从T.indica DNA中扩增到一条250bp左右的条带,表明该对引物可以将T.indica与T.walked区分开。利用上述2对引物分别与ITS区通用引物ITS1/ITS4.和线粒体引物Ti-1/Ti4组合建立套式PCR检测体系,能够直接将T.indica与其他相似或相关种区分开,且灵敏度可达1个冬孢子。此外,还观察到在反应体系中加入适量的(NH4)2SO4对PCR反应具有增效作用,可以提高检测灵敏度。上述结果提示建立的套式PCR反应体系可望能应用于口岸对T.indica的检疫。 展开更多
关键词 小麦 分子检测 套式pcr检测体系 T.indica 印度腥黑穗病菌
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静脉注射毒品者血清中HCV及HGV RNA的检测
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作者 顾士民 蒋伟伦 孙亚洲 《上海预防医学》 CAS 1997年第4期174-175,共2页
关键词 静脉注射毒品者 HGVRNA 丙型肝炎病毒(HCV) 庚型肝炎病毒(HGV) 检出率 传染病医院 单股正链RNA病毒 静脉注射吸毒 5’端非编码区 套式pcr检测
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鱼类神经坏死病毒的分离及其部分衣壳蛋白基因的核苷酸序列分析 被引量:1
15
作者 李冬 Xylouri-Frangiadaki E 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期108-111,共4页
将海水鲈鱼和淡水鲟鱼的病鱼脑组织浸出液分别接种SSN-1细胞系,传2~3代后,收获细胞分离物;参考鱼类神经坏死病毒的全基因序列设计了2对引物,用套式PCR检测细胞分离物均为阳性,并获得了2个病毒衣壳蛋白部分基因片段,长度分别为718 bp(鲈... 将海水鲈鱼和淡水鲟鱼的病鱼脑组织浸出液分别接种SSN-1细胞系,传2~3代后,收获细胞分离物;参考鱼类神经坏死病毒的全基因序列设计了2对引物,用套式PCR检测细胞分离物均为阳性,并获得了2个病毒衣壳蛋白部分基因片段,长度分别为718 bp(鲈鱼)和263 bp(鲟鱼).核苷酸序列分析表明,这2株不同来源的病毒均属于RGNNV基因型,说明不仅在海水养殖环境下而且在淡水鱼中也有鱼类神经坏死病毒存在. 展开更多
关键词 神经坏死病毒 鱼类 鲟鱼 核苷酸序列分析 套式pcr检测 鲈鱼 收获 细胞分离 衣壳蛋白 基因
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Nested polymerase chain reaction in detection of Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes 被引量:1
16
作者 李凤舞 牛春 叶炳辉 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第6期94-97,111,共5页
Objective To detect malaria DNA in mosquitoes.Methods A nested polymerase chain reaction (nested PCR) procedure which amplifies a 121 bp DNA of a SSUrRNA gene specific to Plasmodium vivax was used.Results In labora... Objective To detect malaria DNA in mosquitoes.Methods A nested polymerase chain reaction (nested PCR) procedure which amplifies a 121 bp DNA of a SSUrRNA gene specific to Plasmodium vivax was used.Results In laboratory-infected mosquitoes, nested PCR could detect as few as 3 sporozoites or 1 infected mosquito mixed in a group of 99 normal ones. Furthermore, no specific 121?bp band was seen with DNA templates from other malaria parasites or negative mosquitoes.Conclusion Sensitivity and specificity obtained indicated an advantage of the nested PCR over DNA probes or direct PCR for the detection of Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes with low-grade parasitic infections. 展开更多
关键词 Plasmodium vivax · mosquito · nested polymerase chain reaction · detection
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