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呼吸道合胞病毒对大鼠原代气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素的影响 被引量：6
1
作者 乔建瓯 王健 周龙女 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第21期3865-3868,共4页
目的:探讨分离和培养大鼠原代气道上皮细胞(primary rat airway epithelial cell,PRAEC)的方法,研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对PRAEC表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymicstromal lymphopoietin,TSLP)的影响。方... 目的:探讨分离和培养大鼠原代气道上皮细胞(primary rat airway epithelial cell,PRAEC)的方法,研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对PRAEC表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymicstromal lymphopoietin,TSLP)的影响。方法:采用改良的酶消化法分离PRAEC,并在专用的支气管上皮培养基中培养。在培养成功的原代细胞中加入RSV以感染PRAEC。应用Real-time PCR检测正常的和受到RSV感染的PRAEC中TSLP基因表达。结果:获得纯度较高(约为97%)的PRAEC,细胞成活率为90%,获得细胞量为(1.02±0.33)×106个细胞/鼠,且存活时间较长。正常PRAEC表达少量的TSLP,但是在受到RSV感染后其TSLP表达出现增高,且TSLP的表达在一定范围内与RSV的滴度成正相关。结论:本实验成功地分离并培养了PRAEC,在此基础上进行的实验证实了RSV感染确实能够促进气道上皮细胞表达TSLP,为进一步研究RSV感染在哮喘发病中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 胸腺基质淋巴细胞生成素 大鼠原代气道上皮细胞
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基于上皮细胞-间充质转化的搜风愈喘方调控哮喘大鼠气道重塑的机制研究 被引量：2
2
作者 李艳丽 张宇婧 闫永彬 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期208-215,共8页
目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA... 目的探讨搜风愈喘方通过调控上皮细胞-间充质转化(EMT)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组及搜风愈喘方高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用卵清白蛋白(OVA)注射和雾化复制哮喘大鼠模型。各组大鼠给予相应药物灌胃21 d后处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色,观察肺组织病理形态学变化;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞超微结构情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织匀浆中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显升高(P<0.01),肺组织中TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);HE染色显示气道壁及肺泡壁增厚,视野内可见大量炎症细胞浸润,炎症评分明显升高(P<0.01);透射电镜显示肺组织中上皮细胞水肿程度严重,胞内基质局部溶解、变淡,细胞器肿胀明显。与模型对照组比较,地塞米松组和搜风愈喘方各剂量组大鼠血清中TGF-β1、IL-17含量明显降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、α-SMA和N-cadherin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);肺组织炎症细胞浸润减轻,支气管壁及肺泡壁增厚程度减轻,地塞米松组和搜风愈喘方高剂量组炎症评分降低(P<0.05);超微结构显示上皮细胞水肿程度明显减轻,细胞膜完整,胞内基质均匀,细胞器大多轻微肿胀。结论搜风愈喘方可降低TGF-β1水平,从而改善肺组织EMT,达到防治哮喘气道重塑的目的。 展开更多
关键词 搜风愈喘方 哮喘 气道上皮细胞 上皮细胞-间充质转化 气道重塑 大鼠
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水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响 被引量：3
3
作者 沈瑶 白春学 陈智鸿 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期225-230,共6页
目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建... 目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。 展开更多
关键词 水通道蛋白5(AQP5) 黏蛋白 卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA) 原代小鼠气道上皮细胞
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糖尿病肾病大鼠原代肾小管上皮细胞的提取及体外培养
4
作者 王慧玲 黄国东 +3 位作者 陈宇 刘少芳 王龙龙 范氏泰和 《广西医学》 CAS 2024年第4期535-542,共8页
目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)的提取及体外培养方法。方法取SD雄性大鼠25只,随机分为正常组(n=5)和模型组(n=20)。对模型组大鼠构建DN大鼠模型,不给予正常组任何处理。获取两组大鼠双肾组织,一部分组织用于HE... 目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)的提取及体外培养方法。方法取SD雄性大鼠25只,随机分为正常组(n=5)和模型组(n=20)。对模型组大鼠构建DN大鼠模型,不给予正常组任何处理。获取两组大鼠双肾组织,一部分组织用于HE染色及Masson染色以观察肾组织结构,另一部分用于RTECs的提取及培养。RTECs的提取、培养方法:将肾皮质组织在80目筛网上研磨,经100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min后,使用含10%胎牛血清、1%胰岛素⁃转铁蛋白⁃硒⁃乙醇胺添加剂和1%青链霉素双抗溶液的DMEM/F-12完全培养基培养细胞。用免疫荧光染色法检测细胞角蛋白18的表达情况以鉴定所获得的细胞。结果(1)建模后模型组大鼠出现多饮、多食、多尿、体重下降、血糖升高等特征,尿蛋白定性呈阳性,肾组织病理检测提示肾小球结构不完整且出现明显缺损,RTECs明显肿胀、变性,肾小管管腔萎缩,肾小管间质纤维化严重。(2)培养72 h后,两组RTECs均已经贴壁并呈岛屿状聚集生长,培养5~8 d后细胞呈多边鹅卵石样。模型组RTECs高表达细胞角蛋白18,阳性率>95%。结论采用在80目筛网上研磨、100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min的方法可以得到数量较多、活性良好、纯度较高的DN大鼠模型RTECs,且在形态与贴壁情况方面与正常大鼠RTECs无明显差异。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 原代细胞 细胞提取 细胞鉴定 大鼠
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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养 被引量：9
5
作者 付红敏 许峰 +4 位作者 黄波 杨鸣 符跃强 方芳 匡凤梧 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期586-589,共4页
目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速... 目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AECⅡ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant proteinc,SPC)的表达。结果:每3～5只胎鼠可获得AECⅡ(36±5)×106,活力98%±2%。镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形。透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上。结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AECⅡ,能满足体外进一步实验的需要。 展开更多
关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 分离
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SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养和鉴定 被引量：7
6
作者 何锦园 曾国华 +3 位作者 吴文起 钟文 桂志明 麦赞林 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2010年第4期395-399,共5页
目的:探讨大鼠肾小管上皮细胞的体外培养及鉴定方法,为肾结石病的研究提供实验平台。方法:采用机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在含10%胎牛血清和1%上皮细胞生长因子的上皮细胞培养基中培养,0.25%胰蛋白酶消化后传代培养,... 目的:探讨大鼠肾小管上皮细胞的体外培养及鉴定方法,为肾结石病的研究提供实验平台。方法:采用机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在含10%胎牛血清和1%上皮细胞生长因子的上皮细胞培养基中培养,0.25%胰蛋白酶消化后传代培养,并用原代和传1代细胞做免疫细胞化学染色鉴定。结果:细胞培养至第3天完全贴壁,4～7d处于对数生长期,为多边鹅卵石样;免疫细胞化学染色显示cytokeratin18表达阳性。结论:机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法结合使用上皮细胞培养基可以培养得到较纯的肾小管,是大鼠肾小管上皮细胞原代培养的理想方法,为进一步研究泌尿系结石病因和机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 原代培养 CK18 大鼠
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大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养和鉴定 被引量：5
7
作者 王光兰 陈爽 +5 位作者 张丽红 范颖 石英爱 孙华君 刘晓会 吴珊 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期334-336,共3页
目的建立较好的大鼠近端肾小管上皮细胞原代培养模型。方法无菌取Wistar大鼠肾脏,取皮质剪碎,经Ⅰ型胶原酶消化和45%Percoll连续密度梯度离心进行纯化,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基原代培养并传代,观察细胞形态并以免疫细胞化学染... 目的建立较好的大鼠近端肾小管上皮细胞原代培养模型。方法无菌取Wistar大鼠肾脏,取皮质剪碎,经Ⅰ型胶原酶消化和45%Percoll连续密度梯度离心进行纯化,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基原代培养并传代,观察细胞形态并以免疫细胞化学染色及酶化学染色鉴定。结果培养4～5d细胞融合成单层,呈典型的鹅卵石样,细胞角蛋白18及碱性磷酸酶染色均呈阳性,细胞可传2～3代。结论此法可在短期获得数量较多、重复性好的近端肾小管上皮细胞,为体外研究肾小管细胞的病变提供了实验平台。 展开更多
关键词 近端肾小管上皮细胞 原代培养 大鼠
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哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞凋亡及布地奈德的干预作用 被引量：7
8
作者 郑仰明 李昌崇 +1 位作者 张维溪 管小俊 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2006年第2期106-112,共7页
目的①研究哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞的凋亡情况;②观察布地奈德对气道上皮细胞的凋亡和气道重塑的干预作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为哮喘重塑组(A组)、布地奈德治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组 10只,A、B组均给予鸡卵清白... 目的①研究哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞的凋亡情况;②观察布地奈德对气道上皮细胞的凋亡和气道重塑的干预作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为哮喘重塑组(A组)、布地奈德治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组 10只,A、B组均给予鸡卵清白蛋白和氢氧化铝致敏并激发12周,建立大鼠气道重塑模型;B组激发前30 min,雾化吸入布地奈德1 mg;C组给予生理盐水,致敏和激发时间点同A、B组。肺组织行苏木精-伊红染色、Masson三色染色和过碘酸希夫染色,观察气道周围炎症细胞浸润和气道结构改变。结果①光镜下发现A组明显的气道重塑的病理改变,B组较A组有所减轻;②透射电镜观察均发现A组明显胶原沉积,B组较A组有所减轻;③图像分析结果(Image-Pro Plus 5．0):支气管壁厚度比较,A组[(110．0±13．8)μm]明显高于C组[(77．2±7．6)μm](P<0．01),B组[(92．8±15．2)μm]明显低于 A组(P<0．05),但高于C组(P<0．05);平滑肌厚度比较,A组[(45．4±7．5)μm]明显高于C组[(25．7±4．0)μm](P< 0．01),B组[(36．5±4．7)μm]明显低于A组(P<0．05),但高于C组(P<0．01);各组大鼠肺组织胶原百分比比较:A组 [(12．8±3．8)％]明显高于C组[(3．2±0．9)％](P<0．01),B组[(9．1±1．5)％]明显低于A组(P<0．05),但B组仍明显高于C组(P<0．01);④图像分析免疫组化结果(Image-Pro Plus 5．0软件测阳性细胞数):1 mm单位长度基底膜上气道上皮平均cleaved caspase-3阳性细胞数的比较,A组大气道和中小气道上皮阳性细胞数分别为(10．5±2．8)和(9．6± 1．9)．明显高于C组(2．9±1．2)和(2．4±1．0)(P均<0．01),B组分别为[(10．6±2．561)和(10．6±2．4),与A组差异无统计学意义(P均>0．05),但明显高于C组(P均<0．01)。结论①哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞表达cleaved caspase-3显著增加,表明气道上皮凋亡在气道重塑组中明显增加;②布地奈德不能抑制哮喘大鼠气道上皮细胞发生凋亡; ③布地奈德能部分抑制气道重塑。 展开更多
关键词 哮喘 大鼠 气道重塑 上皮细胞 凋亡 布地奈德
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SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定 被引量：4
9
作者 周治彦 梁培育 +1 位作者 欧善际 李浩勇 《海南医学院学报》 CAS 2010年第5期540-544,共5页
目的：建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法：选用4周龄SD幼鼠的肾皮质进行细胞培养,采用机械研磨、胰酶消化、过滤,Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代... 目的：建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法：选用4周龄SD幼鼠的肾皮质进行细胞培养,采用机械研磨、胰酶消化、过滤,Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代培养及传代。制作细胞爬片,用免疫细胞化学（Cytokeratin 18表达阳性）进行鉴定。结果：肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周生长,4-5 d后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。结合形态学及免疫细胞化学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肾小管上皮细胞。结论：采用此方法分离培养的肾小管上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性操作良好。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 原代培养 PERCOLL 密度梯度离心法 大鼠
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热处理光滑念珠菌对大鼠气道上皮细胞Dectin-1、IL-6和TNF-α表达的影响 被引量：2
10
作者 张雪 骆雪萍 +3 位作者 白剑 王玉春 吴呈霖 赵莹 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第7期865-868,共4页
目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Wester... 目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Western blot法检测Dectin-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测IL-6和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测上清液IL-6和TNF-α的分泌。结果随着孵育时间的延长,RTE细胞破坏逐渐加重及Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达呈进行性增高。孵育2h组与对照组比较、孵育4h组与孵育2h组比较、孵育6h组与孵育4h组比较,Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RTE细胞具有天然免疫功能,其Dectin-1参与了对热处理光滑念珠菌的识别,并激活IL-6和TNF-α的分泌,介导炎性反应。IL-6起负性调节作用。 展开更多
关键词 热处理光滑念珠菌 Dectin-1受体 大鼠气道上皮细胞 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素6
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桑苏饮对哮喘模型大鼠气道重塑及肺组织上皮细胞ICAM-1表达的影响 被引量：18
11
作者 苏奎国 姜良铎 +1 位作者 郭勇英 张波 《山东中医药大学学报》 2010年第4期354-356,共3页
目的:探讨桑苏饮对哮喘发作期大鼠的疗效及作用机制。方法:雄性Wistar大鼠90只按随机数字表法分为6组:空白组,桑苏饮高剂量组、中剂量组、低剂量组,定喘汤组,模型组,每组15只。哮喘模型参照文献方法复制,观察治疗前后大鼠一般生活状态... 目的:探讨桑苏饮对哮喘发作期大鼠的疗效及作用机制。方法:雄性Wistar大鼠90只按随机数字表法分为6组:空白组,桑苏饮高剂量组、中剂量组、低剂量组,定喘汤组,模型组,每组15只。哮喘模型参照文献方法复制,观察治疗前后大鼠一般生活状态、肺组织形态学变化,免疫组化法测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)。结果:治疗后大鼠一般生活状态、肺组织形态学变化各治疗组较模型组皆有显著性差异,尤以桑苏饮低剂量组及定喘汤组疗效较好。桑苏饮不同剂量组间比较,低剂量组较高、中剂量组肺组织上皮细胞ICAM-1表达明显下调,有非常显著性差异(P<0.01)。结论:低剂量桑苏饮能减轻嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润,下调哮喘模型大鼠肺组织上皮细胞ICAM-1的表达,从而有效控制气道炎症,改善气道重塑。 展开更多
关键词 桑苏饮 支气管哮喘 气道重塑 肺组织上皮细胞ICAM-1 大鼠 实验研究
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胚胎鼠胃粘膜上皮细胞的原代培养 被引量：1
12
作者 周京军 朱运龙 +6 位作者 梅琦 胡玉珍 陈健康 韦耿泽 高瞻 王高峰 张庆红 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期191-192,共2页
采用胰酶冷消化法对胚胎鼠胃粘膜上皮细胞进行了培养，细胞培养于含２０％的胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养液中，种植２４ｈ后开始生长，３ｄ长成片状，相差显微镜下观察９０％的细胞具有上皮细胞特征。免疫细胞化学显示：（ａ）９... 采用胰酶冷消化法对胚胎鼠胃粘膜上皮细胞进行了培养，细胞培养于含２０％的胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养液中，种植２４ｈ后开始生长，３ｄ长成片状，相差显微镜下观察９０％的细胞具有上皮细胞特征。免疫细胞化学显示：（ａ）９０％的细胞上皮角蛋白染色阳性；（ｂ）９０％的上皮细胞ＰＡＳ染色阳性；（ｃ）２０％的上皮细胞琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）染色阳性。透射电镜可见微绒毛、连接复合物（紧密连接，桥粒）、丰富的糖原、线粒体。放射自显影结果表明：上皮细胞具有合成ＤＮＡ的能力，而且在培养２ｄ时增殖能力最强。本实验为研究胃粘膜的功能提供了较好的方法。 展开更多
关键词 胚胎鼠 胃粘膜 上皮细胞 原代培养 方法技术
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大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养与鉴定 被引量：1
13
作者 黄省利 师蔚 +1 位作者 姚璐 贺西京 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期176-179,189,共5页
目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形... 目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形态学观察并摄片。在培养第9天左右,采用电子显微镜及Hematoxylin&Eosin(HE)染色进行形态学观察,免疫细胞化学染色法鉴定并计算脉络丛上皮细胞的纯度。结果培养的脉络丛上皮细胞呈梭形或多角形,电子显微镜下有微绒毛,细胞纯度在95%以上。结论利用机械分散法分离新生大鼠脉络丛上皮细胞,进行原代培养可获得高纯度的脉络丛上皮细胞,该方法简便实用。 展开更多
关键词 脉络丛上皮细胞 原代培养 大鼠 免疫细胞化学 电子显微镜
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大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究 被引量：1
14
作者 黄桂君 农江 +3 位作者 马壮 钱桂生 李淑萍 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期73-75,共3页
目的　构建重组大鼠γ 干扰素真核表达载体 ,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞 (AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法　采用RT PCR技术克隆了大鼠γ 干扰素 ,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ,构成真核表达重组载体。将重组载... 目的　构建重组大鼠γ 干扰素真核表达载体 ,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞 (AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法　采用RT PCR技术克隆了大鼠γ 干扰素 ,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ,构成真核表达重组载体。将重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞。用PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA中。并检测细胞培养上清中γ 干扰素浓度和活性。结果　DNA测序证明 ,构建的重组载体中γ 干扰素的基因方向正确 ,DNA序列与GeneBank中大鼠的γ 干扰素cDNA序列相同。转染后AM和气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的重组载体DNA片段条带。pLXSN IFN载体组的AM和气道上皮细胞培养上清中大鼠γ 干扰素浓度和活性显著高于pLXSN空载体组 (P <0 .0 1)。结论　本研究构建的大鼠γ 干扰素重组表达载体可成功地转染大鼠AM和气道上皮细胞 ,整合入基因组DNA ,并分泌有活性的γ 干扰素 。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 基因转染 肺泡巨噬细胞 气道上皮细胞 大鼠
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大鼠颌下腺上皮细胞原代培养转染实验 被引量：1
15
作者 汤晓飞 高文涛 +3 位作者 孙宏晨 张泽兵 徐辉 欧阳喈 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第2期149-152,共4页
目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫... 目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫组化及软琼脂培养检测所筛选阳性细胞的性质。结果 :经质粒pSV2neo、pSV3neo转染分离的大鼠颌下腺上皮细胞仍保留上皮细胞的形态 ,生存期延长。经pSV3neo转染的上皮细胞 ,Southern印迹杂交证明整合有SV4 0T抗原 (LT) ;免疫组化和透射电镜观察显示存在有大量的肌上皮细胞和少量的腺泡细胞 ;软琼脂培养无克隆形成。结论 展开更多
关键词 大鼠 颌下腺 肌上皮细胞 原代培养 胶原酶消化法 透射电镜 免疫组织化学
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三种脂质体法转染试剂转染原代大鼠气道平滑肌细胞效果的比较 被引量：1
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作者 徐玉东 王宇 +2 位作者 魏颖 尹磊淼 杨永清 《中国医药生物技术》 2013年第5期384-387,共4页
气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）是呼吸道的重要组成部分之一，受气道内各类免疫细胞所释放的细胞因子和炎性介质的调节产生相应的收缩，其自身也能够分泌细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子和基质金属蛋白... 气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）是呼吸道的重要组成部分之一，受气道内各类免疫细胞所释放的细胞因子和炎性介质的调节产生相应的收缩，其自身也能够分泌细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子和基质金属蛋白酶等，参与气道炎症、气道高反应性与气道重塑的发生发展，是研究哮喘、COPD等气道呼吸性疾病细胞分子机制的重要载体。国内外研究中使用的ASMCs大多从活组织（比如动物气管、支气管和活检样品等）中分离并原代培养获得，这比细胞系更能准确地模拟来源组织在体内环境的特异性特征。 展开更多
关键词 气道平滑肌细胞 转染试剂 原代大鼠 脂质体法 分泌细胞因子 基质金属蛋白酶 气道高反应性 细胞分子机制
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大鼠宫颈上皮细胞的原代培养 被引量：1
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作者 马丽 刘正君 +3 位作者 姚东风 胡宗苗 邓颖颖 张恩户 《中国医学工程》 2018年第8期19-21,共3页
目的探索大鼠宫颈上皮细胞的培养方法。方法分离大鼠宫颈上皮细胞,采用上皮细胞培养无血清培养基,添加牛脑提取物和表皮生长因子(EGF)进行培养。结果大鼠宫颈上皮细胞培养8 d后,可以在显微镜下观察到宫颈上皮细胞从组织碎片中移出,大片... 目的探索大鼠宫颈上皮细胞的培养方法。方法分离大鼠宫颈上皮细胞,采用上皮细胞培养无血清培养基,添加牛脑提取物和表皮生长因子(EGF)进行培养。结果大鼠宫颈上皮细胞培养8 d后,可以在显微镜下观察到宫颈上皮细胞从组织碎片中移出,大片贴在培养瓶壁上,成集落状生长。结论使用上皮细胞无血清培养基添加EGF、牛脑提取物可以实现大鼠宫颈上皮细胞的原代培养。 展开更多
关键词 大鼠 宫颈上皮细胞 原代培养
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小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养及鉴定
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作者 陈坤 邓世雄 +2 位作者 刘芳君 李虹 蒋朴 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期62-65,共4页
目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化... 目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化肺泡Ⅱ型上皮,进行原代培养.用改良巴氏染色法和透射电镜观察对所分离的细胞进行鉴定.结果:每只胎鼠可获得(5±2)×106的细胞产量,细胞活力为95%±2%,纯度达到92%±2%,改良巴氏法镜下观察可见胞质内含较多深色颗粒,透射电镜观察到特征性的嗜锇小体即板层小体和细胞膜上有明显的微绒毛.结论:该方法能成功分离出小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,且产量大、纯度高,能满足体外研究的需要. 展开更多
关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 鉴定
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大鼠肾小管上皮细胞分离及其体外原代培养 被引量：1
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作者 张元元 郭艳 王光明 《现代医药卫生》 2012年第24期3742-3744,共3页
目的探讨大鼠肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法在原有肾小管细胞培养方法的基础上进行改良,采用机械研磨过筛、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在DMEM/F12[含5%胎牛血清(FBS)和胰岛素-转铁蛋白-硒]培养基中培养,并进行ZO-1免疫荧... 目的探讨大鼠肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法在原有肾小管细胞培养方法的基础上进行改良,采用机械研磨过筛、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在DMEM/F12[含5%胎牛血清(FBS)和胰岛素-转铁蛋白-硒]培养基中培养,并进行ZO-1免疫荧光染色鉴定。结果细胞培养至第3天完全贴壁,为多边鹅卵石样;免疫荧光染色显示90%以上的细胞为ZO-1表达阳性。结论采用机械研磨过筛、Ⅰ型胶原酶消化、DMEM/F12(含5%FBS和胰岛素-转铁蛋白-硒)培养基中培养的方法可以获得纯度达90%以上的肾小管上皮细胞,可满足对肾小管上皮细胞的研究。 展开更多
关键词 肾小管 细胞学 上皮细胞 细胞学 细胞 培养的 原代培养 大鼠
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小剂量茶碱对大鼠气道上皮细胞NF-κB活性的影响
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作者 黄毅 杨炯 胡克 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2003年第3期239-242,共4页
目的 :观察小剂量茶碱是否对体外培养的哮喘模型大鼠气道上皮细胞中NF κB的活性存在影响。以进一步阐明茶碱类药物抗炎作用和免疫调节作用的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为 2组 ,对照组 (5只 ) ,哮喘模型组 (15只 ) ;模型组以卵... 目的 :观察小剂量茶碱是否对体外培养的哮喘模型大鼠气道上皮细胞中NF κB的活性存在影响。以进一步阐明茶碱类药物抗炎作用和免疫调节作用的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为 2组 ,对照组 (5只 ) ,哮喘模型组 (15只 ) ;模型组以卵清蛋白致敏和激发 ,建立哮喘模型。体外培养哮喘模型组和对照组大鼠的气道上皮细胞。分别观察加入脂多糖 (LPS)刺激前后NF κB活性的变化 ;在哮喘模型组大鼠的气道上皮细胞中加入不同浓度的氨茶碱与LPS(1μg·ml- 1 )共同培养 4h后 ,以及加入同一浓度氨茶碱和LPS(1μg·ml- 1 )共同培养不同时间后NF κB活性的变化。NF κB活性采用免疫组织化学方法检测 ,以细胞核染色作为阳性标准 ,以细胞核阳性的百分比表示NF κB的活性。结果 :经LPS刺激前 ,对照组和哮喘组大鼠气道上皮细胞胞浆NF κB均有一定程度的表达。细胞核表达的细胞 ,哮喘组为 (6 .4 %± 1.2 ) % ,而对照组为 (4 .7%± 1.7) % ,二者相比较 ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。经 1μg·ml- 1 脂多糖刺激 2h后 ,两组细胞胞核NF κB表达均明显上升 ,哮喘组为 (82 .5± 5 .2 ) % ,对照组为(79.3± 3.4 ) % ,两者相比 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 )。在哮喘组大鼠上皮细胞中加入 1μg·ml- 1 展开更多
关键词 小剂量 茶碱 大鼠 气道上皮细胞 NF-KB 活性 影响
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