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羊布氏杆菌3型外膜蛋白Omp22基因的克隆及生物信息分析
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作者 贺容 张生珍 +3 位作者 马丽 杨旭欣 徐立青 李增魁 《贵州农业科学》 CAS 2015年第8期185-188,共4页
为大量制备重组布氏杆菌外膜蛋白Omp22及其免疫原性和相关功能研究奠定基础,同时为布氏杆菌病的诊断、防治药物及疫苗研究提供参考,以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县分离株为研究对象,对其外膜蛋白Omp22基因进行克隆,并利用相关软件系统... 为大量制备重组布氏杆菌外膜蛋白Omp22及其免疫原性和相关功能研究奠定基础,同时为布氏杆菌病的诊断、防治药物及疫苗研究提供参考,以羊种布氏杆菌3型青海省海晏县分离株为研究对象,对其外膜蛋白Omp22基因进行克隆,并利用相关软件系统对外膜蛋白Omp22的生物信息学进行分析。结果表明:在布氏杆菌Omp22基因两端加上BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,通过PCR方法获得海晏县分离羊种布氏杆菌3型菌株的Omp22基因,成功克隆入pMD19-T载体上。羊种布氏杆菌3型Omp22分子一级结构的氨基酸序列中存在4段可能的抗原表位区段,其中28~40aa、109~121aa和141~154aa的抗原指数和B细胞表位较高,成为抗原决定簇的可能性很大。 展开更多
关键词 羊种布氏杆菌3型 外膜蛋白omp22基因 克隆 生物信息学
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布鲁菌外膜蛋白Omp22基因的原核表达与生物信息学分析 被引量:1
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作者 朱华培 赵天靖 +10 位作者 徐开莲 贾晓晓 郭莳雨 史巧芸 庞峰 荣辉 张珈宁 成鹰 焦寒伟 杜丽 王凤阳 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期9-12,共4页
克隆布鲁菌Omp22基因,原核表达后进行生物学信息分析。根据GenBank中羊种布鲁菌M5-90株基因组PCR扩增出639bp的目的基因片段,构建克隆重组质粒pMD-20T-Omp22,转化入E.coli DH5α。测序正确后构建表达重组质粒pET-28a-Omp22,转化入E.coli... 克隆布鲁菌Omp22基因,原核表达后进行生物学信息分析。根据GenBank中羊种布鲁菌M5-90株基因组PCR扩增出639bp的目的基因片段,构建克隆重组质粒pMD-20T-Omp22,转化入E.coli DH5α。测序正确后构建表达重组质粒pET-28a-Omp22,转化入E.coli BL21(DE3)。IPTG诱导表达,Western blot鉴定诱导融合蛋白。结果表明,成功克隆Omp22基因,构建pET-28a-Omp22原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达Omp22基因。DNA Man和BIOEDIT软件生物性息学分析Omp22融合蛋白二级结构中α-螺旋占22.17%;伸展链占19.81%;β-折叠占2.83%;无规卷曲占55.19%。说明该蛋白具有较高亲水性。 展开更多
关键词 布鲁菌 外膜蛋白22基因 克隆 原核表达 生物信息学分析
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幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22克隆、表达和鉴定 被引量:1
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作者 黄学勇 李永红 +2 位作者 段广才 范清堂 郗园林 《广西医科大学学报》 CAS 2010年第5期678-680,共3页
目的:克隆幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22,构建幽门螺杆菌omp22基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据。方法:利用PCR技术从Helicobacter pylori郑州分离株MEL-Hp27染... 目的:克隆幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22,构建幽门螺杆菌omp22基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据。方法:利用PCR技术从Helicobacter pylori郑州分离株MEL-Hp27染色体DNA上扩增omp22基因,并将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western blot鉴定其免疫原性。结果:PCR方法扩增的omp22基因长度约为540 bp。经酶切鉴定,插入到表达载体的基因片段与预期目的DNA片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为22 ku,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的26%。结论:成功克隆并构建了omp22基因高效原核表达系统,为幽门螺杆菌基因工程组分疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白基因 克隆 融合表达载体 酶切鉴定 HELICOBACTER PYLORI MEMBRANE PROTEIN omp22基因 麦芽糖结合蛋白基因 融合蛋白 蛋白免疫原性 表达产物 SDS-PAGE 转化大肠杆菌 原核表达系统 方法 组分疫苗 诱导表达 疫苗研究 扩增
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羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定 被引量:6
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作者 张亮 张蕾 +5 位作者 张芳琳 李璞媛 李凯 吴兴安 徐志凯 白文涛 《科学技术与工程》 2009年第14期3969-3973,共5页
布鲁菌外膜蛋白Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应。为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定。根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白Omp22引物。以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核... 布鲁菌外膜蛋白Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应。为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定。根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白Omp22引物。以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中。酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性。结果PCR扩增出约660bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-Omp22原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。说明成功构建了Omp22蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 羊布鲁菌 外膜蛋白omp22 原核表达 鉴定
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布鲁氏菌外膜蛋白22基因克隆与原核表达
5
作者 杜志强 林涛 +2 位作者 刘晓燕 吴亚坤 王建英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期252-254,共3页
本试验以布鲁氏菌外膜蛋白22(omp22)基因作为研究对象,通过基因序列克隆、表达载体构建、大肠杆菌原核表达与亲和纯化,对蛋白的表达与纯化进行了研究。结果显示,omp22基因的核苷酸序列含有639bp,编码212个氨基酸残基,预测分子质量为22ku... 本试验以布鲁氏菌外膜蛋白22(omp22)基因作为研究对象,通过基因序列克隆、表达载体构建、大肠杆菌原核表达与亲和纯化,对蛋白的表达与纯化进行了研究。结果显示,omp22基因的核苷酸序列含有639bp,编码212个氨基酸残基,预测分子质量为22ku,电泳结果显示重组omp22蛋白的分子质量为47ku,与理论值相符。本试验结果为进一步研究重组omp22蛋白的免疫刺激与免疫保护作用奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白22基因 基因克隆 原核表达 纯化
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牛布鲁氏杆菌外膜蛋白Omp22的原核表达及反应原性鉴定 被引量:1
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作者 连凯琪 周玲玲 +4 位作者 张明亮 张慢 林正丹 宋玉伟 王双山 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1-3,共3页
为了制备牛布鲁氏杆菌外膜蛋白Omp22的抗原,试验采用PCR技术扩增Omp22基因;通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET28a(+)-Omp22;应用SDS-PAGE对重组质粒pET28a(+)-Omp22的表达进行鉴定;采用Western-blot方法对表达的重组蛋白Omp22与布鲁... 为了制备牛布鲁氏杆菌外膜蛋白Omp22的抗原,试验采用PCR技术扩增Omp22基因;通过PCR和双酶切技术鉴定重组质粒pET28a(+)-Omp22;应用SDS-PAGE对重组质粒pET28a(+)-Omp22的表达进行鉴定;采用Western-blot方法对表达的重组蛋白Omp22与布鲁氏杆菌阳性血清的反应原性进行分析。结果表明:PCR扩增得到Omp22基因,其大小为639 bp,共编码213个氨基酸,并成功构建重组质粒pET28a(+)-Omp22;该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得表达,表达的重组蛋白Omp22能与布鲁氏杆菌阳性血清发生特异性反应。说明重组蛋白Omp22具有良好的反应原性,为后续开发诊断抗体的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏杆菌 外膜蛋白omp22 基因扩增 原核表达 融合蛋白 反应原性
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新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 滕文军 陈创夫 +4 位作者 任雪艳 王远志 杨丽鹃 包彗芳 刘文进 《经济动物学报》 CAS 2005年第3期161-164,共4页
以表达新疆绵羊种布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和分子疫苗的可能性。采用PCR扩增技术,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组DNA中扩增出OMP2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PE-28a(+),构建成重组质粒,IPT... 以表达新疆绵羊种布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和分子疫苗的可能性。采用PCR扩增技术,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组DNA中扩增出OMP2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PE-28a(+),构建成重组质粒,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测有无蛋白的表达。结果表明,获得长约1 083bp的PCR片段,序列分析结果与已知绵羊种OMP2b同源性达89.72%;SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量39 ku获得了新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。 展开更多
关键词 绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白omp36 omp2b基因 克隆 表达
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新疆绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP2b的克隆与表达 被引量:2
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作者 滕文军 陈创夫 +4 位作者 任雪艳 王远志 杨丽鹃 包彗芳 刘文进 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期80-83,共4页
表达新疆绵羊布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP3b的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和亚单位疫苗的可能性。采用PCR方法,从新疆绵羊布鲁氏菌基因组DNA中扩增出omp2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PET-28a(+),构建成重组质粒,经IPTG诱导,... 表达新疆绵羊布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP3b的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和亚单位疫苗的可能性。采用PCR方法,从新疆绵羊布鲁氏菌基因组DNA中扩增出omp2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PET-28a(+),构建成重组质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测。结果表明,获得长约1083bp的PCR片段,序列分析结果与已知绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP2b同源性达89.72%;SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子质量39ku处有表达带。获得了新疆绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白omp2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。 展开更多
关键词 绵羊布鲁氏菌外膜蛋白omp36 omp2b基因 克隆 表达
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问号赖型钩体重组质粒pDJH_2 DNA 序列测定及其与其它细菌omp基因序列比较分析 被引量:2
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作者 江南 戴保民 +18 位作者 鄢正新 杨文天 李胜富 方之茂 赵慧业 伍卫华 叶丹霓 阎蓉华 刘家福 杨耀 张云 刘富先 宋绍忠 屠云人 杨洪彬 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕愚 《华西医科大学学报》 CSCD 1996年第4期341-347,共7页
对pDJH2片段DNA进行了序列测定,结果:插入片段为1811个核苷酸;可读框2个:ORF1,1-565bp;ORF2(从最后一个密码倒算)1-662bp,计算机序列同源性或类似性匹配(alignment)表明,OR... 对pDJH2片段DNA进行了序列测定,结果:插入片段为1811个核苷酸;可读框2个:ORF1,1-565bp;ORF2(从最后一个密码倒算)1-662bp,计算机序列同源性或类似性匹配(alignment)表明,ORF1与ORF2的核苷酸类似性为49.36%;ORF1与L.kirschneri(L.alstoni)流感伤寒型omp核苷酸序列类似性为49.26%;ORF2与L.alstoni类似性为51.56%;ORF1与其它细菌(包括螺旋体)omp核苷酸序列对准比较,序列类似性均在43%以上。经查阅EMBLDNA序列数据库未见类似序列。作者认为pDJH2的1.9kb插入DNA片段(ORF1与ORF2)可能是具有保护作用的omp基因片段。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 核苷酸序更 外膜蛋白基因 omp基因
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军团菌MOMPS基因的克隆并在原核系统中表达
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作者 张雷 陈建平 +2 位作者 王涛 张莉 田玉 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期379-382,共4页
以军团菌DNA为模板,PCR扩增获得军团菌主要外膜蛋白基因(M a jor ou ter m em brane prote in gene,om pS),与原核表达质粒pUC 18定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL 21,并用限制性酶酶切分析、聚合酶链式反应、核酸序列分析、十二... 以军团菌DNA为模板,PCR扩增获得军团菌主要外膜蛋白基因(M a jor ou ter m em brane prote in gene,om pS),与原核表达质粒pUC 18定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL 21,并用限制性酶酶切分析、聚合酶链式反应、核酸序列分析、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、W estern印迹进行鉴定。实验结果表明我们扩增出了军团菌914 bp的om pS基因,成功构建了重组质粒pLPom pS,并在原核系统中得到了表达。 展开更多
关键词 军团菌 主要外膜蛋白基因(ompS) 克隆 表达
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沙门菌外膜蛋白的免疫学研究进展
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作者 张振华 程安春 汪铭书 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第8期16-17,共2页
关键词 免疫学技术 外膜蛋白 沙门菌 机体免疫系统 免疫原性 免疫应答 基因检测 omp
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布鲁氏菌外膜蛋白基因omp19序列克隆与原核表达
12
作者 杜志强 林涛 王建英 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期8-10,共3页
目的:研究猪型布鲁氏菌外膜蛋白基因omp19的序列性质,同时,进行目的基因的原核表达。方法:以猪型布鲁氏菌基因组作为模板进行基因序列的扩增,利用大肠杆菌原核表达系统进行重组表达。结果:猪型布鲁氏菌外膜蛋白基因omp19的开放阅读框序... 目的:研究猪型布鲁氏菌外膜蛋白基因omp19的序列性质,同时,进行目的基因的原核表达。方法:以猪型布鲁氏菌基因组作为模板进行基因序列的扩增,利用大肠杆菌原核表达系统进行重组表达。结果:猪型布鲁氏菌外膜蛋白基因omp19的开放阅读框序列全长为534 bp,演绎177个氨基酸。诱导表达的重组蛋白质的理论分子量为17.6 kD,而且实际大小与理论值一致。结论:成功表达了Omp19分子,为进一步研究Omp19分子的免疫保护作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪型布鲁氏菌 外膜蛋白 omp19基因 序列克隆 原核表达
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基于Omp1基因的泌尿生殖道感染沙眼衣原体多样性及分布特征分析 被引量:3
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作者 常月立 王威 +3 位作者 张存辉 孙克 张彦霞 张玉妥 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期393-397,共5页
目的基于主要外膜蛋白基因(Omp1)研究泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体多态性及分布特征,为该疾病的诊治及疫苗研究奠定基础。方法对泌尿生殖道感染临床标本常规处理后,使用沙眼衣原体核酸检测试剂盒筛选阳性标本,然后以巢式PCR扩增Omp1基... 目的基于主要外膜蛋白基因(Omp1)研究泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体多态性及分布特征,为该疾病的诊治及疫苗研究奠定基础。方法对泌尿生殖道感染临床标本常规处理后,使用沙眼衣原体核酸检测试剂盒筛选阳性标本,然后以巢式PCR扩增Omp1基因,选择4个限制性内切酶进行RFLP分析确定其基因型,选择代表菌株测定Omp1的DNA序列并与参比菌株比较确定其血清型,最后将基因型及血清型与患者的性别、科室及年龄进行对比分析,研究其分布特征。结果 2013-2014年2年间共筛选得到178份阳性标本,61份标本扩增获得Omp1基因,Omp1-PFLP分析将61份标本分为6个基因型,占比分别为24.59%,24.59%,4.92%,9.84%,3.28%和32.79%,血清型分析表明61份标本属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多。结论本地区引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体主要属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多,基因型及血清型与患者性别具有相关性,与科室、年龄无相关性。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 泌尿生殖道 主要外膜蛋白 omp1基因 RFLP 多样性 血清型 分布特征
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基于牛源布氏杆菌重组膜蛋白的胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量:6
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作者 刘亚东 王慧煜 +3 位作者 刘佳佳 梅琳 杨泽晓 韩雪清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期805-810,共6页
为研制一种快速检测牛源布氏杆菌的免疫层析技术,本研究对牛布氏杆菌外膜蛋白omp22进行表达纯化,并用新西兰大白兔制备omp22多克隆抗体,将omp22蛋白作为胶体金标记物,家兔抗牛Ig G用于检测线,多抗用于质控线,制备了胶体金免疫层析检测... 为研制一种快速检测牛源布氏杆菌的免疫层析技术,本研究对牛布氏杆菌外膜蛋白omp22进行表达纯化,并用新西兰大白兔制备omp22多克隆抗体,将omp22蛋白作为胶体金标记物,家兔抗牛Ig G用于检测线,多抗用于质控线,制备了胶体金免疫层析检测抗体试纸条。结果显示,成功诱导表达大小为74 ku的可溶性重组蛋白omp22,且纯化后的重组蛋白omp22的浓度为2 mg/m L,纯度在85%以上;该胶体金试纸条在阳性血清稀释至1∶64时仍可见清晰条带;与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛地方流行性白血病阳性血清均无交叉反应;与国外商品化试剂盒比较,试纸条检测结果与ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为94.2%(49/52),与牛羊布病抗体检测卡(KERNEL)的符合率为96%(49/50)。整个检测过程可在10 min内完成,肉眼即可判断。以上结果表明,该试纸条具有良好的重复性、敏感性和特异性,可适用于牛源血清中布氏杆菌病抗体的现场快速检测和筛选工作。 展开更多
关键词 布氏杆菌 外膜蛋白omp22 多克隆抗体 胶体金 免疫层析试纸条
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