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TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达 被引量：6
1
作者 孔庆然 朱江 +6 位作者 黄波 郇延军 王峰 石永乾 刘仲凤 武美玲 刘忠华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期749-756,共8页
不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙... 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。 展开更多
关键词 TSA 体细胞核移植 胚胎发育 外源基因表达 猪
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丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建 被引量：8
2
作者 汪天虹 吴志红 +1 位作者 刘世利 曲音波 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期736-742,共7页
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,... 采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 . 展开更多
关键词 瑞氏木霉 外源基因表达系统 cbhI启动子 构建 表达
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乙酸对重组大肠杆菌生长及外源基因表达的影响 被引量：7
3
作者 沈林南 魏东芝 +2 位作者 周宇荀 王二力 俞俊棠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期254-256,共3页
在重组基因工程菌ＤＨ５α（ＰＧ－ＦＧＦ）的高密度培养过程中，发现培养液中有大量代谢副产物－乙酸的产生和积累，乙酸的存在抑制了工程菌的生长及外源基因的表达。研究了乙酸在Ｍｇ培养基中对工程菌ＤＨ５α（ＰＧ－ＦＧＦ）生长及... 在重组基因工程菌ＤＨ５α（ＰＧ－ＦＧＦ）的高密度培养过程中，发现培养液中有大量代谢副产物－乙酸的产生和积累，乙酸的存在抑制了工程菌的生长及外源基因的表达。研究了乙酸在Ｍｇ培养基中对工程菌ＤＨ５α（ＰＧ－ＦＧＦ）生长及外源基因表达的影响。结果表明，乙酸的存在不仅导致重组菌生长速率的降低及延迟期的增长，而且对外源基因产物的表达具有强烈的抑制作用，这为该工程菌的高密度培养及外源基因产物的高表达打下了基础。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 乙酸 生长 外源基因表达
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植物病毒—新型的外源基因表达载体 被引量：6
4
作者 彭燕 崔晓峰 周雪平 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期465-472,共8页
与利用转基因植物表达外源基因相比 ,植物病毒载体具有表达水平高、速度快、宿主广等优点 ,是一类新型的外源基因表达载体。本文就植物病毒表达载体的构建策略、应用状况和存在的问题进行了综述。
关键词 植物病毒 外源基因表达 表达载体 植物基因工程
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多形汉逊酵母外源基因表达系统 被引量：11
5
作者 陈凤菊 卢善发 胡敦孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-249,共4页
多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一... 多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一系统中得到成功表达 ,有的已投入市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特性、基因工程操作技术。 展开更多
关键词 多形汉逊酵母 甲醇酵母 外源基因表达系统
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莱茵衣藻线粒体遗传系统及其外源基因表达 被引量：4
6
作者 胡章立 李建成 程雪薇 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2013年第6期603-610,共8页
外源基因表达是目前光合生物线粒体遗传系统研究的瓶颈.作者在成功进行光合生物线粒体外源基因稳定表达的基础上,评述光合生物———莱茵衣藻的线粒体遗传表达系统,指出该系统是目前唯一能够有效表达外源功能基因的光合生物.介绍莱茵衣... 外源基因表达是目前光合生物线粒体遗传系统研究的瓶颈.作者在成功进行光合生物线粒体外源基因稳定表达的基础上,评述光合生物———莱茵衣藻的线粒体遗传表达系统,指出该系统是目前唯一能够有效表达外源功能基因的光合生物.介绍莱茵衣藻线粒体基因组结构、mtDNA复制、转录及翻译特性,论述莱茵衣藻线粒体遗传转化方法、转化株筛选标记基因及外源基因表达的研究进展,分析外源基因在线粒体基因组中的同质化过程、表达效率及存在问题,为莱茵衣藻线粒体基因表达调控及反向遗传学研究辟出新径. 展开更多
关键词 基因工程 遗传转化 莱茵衣藻 线粒体基因组 外源基因表达 线粒体遗传 基因调控
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犬2型腺病毒E3区缺失性表达载体的构建及外源基因表达 被引量：3
7
作者 邱薇 扈荣良 +3 位作者 夏咸柱 范泉水 黄耕 张守峰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期11-14,共4页
为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒 (canim e adenovirus,CAV) E3区缺失性表达载体 ,在克隆的 E3区两末端设计并合成了 2对突变引物 ,在引物中分别引入 1个 Bgl 酶切位点 ,以 p BE3质粒为模板 ,经 2次点突变后 ,得到含有 2个 B... 为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒 (canim e adenovirus,CAV) E3区缺失性表达载体 ,在克隆的 E3区两末端设计并合成了 2对突变引物 ,在引物中分别引入 1个 Bgl 酶切位点 ,以 p BE3质粒为模板 ,经 2次点突变后 ,得到含有 2个 Bgl 位点的重组质粒 p BE3M。该质粒经 Bgl 酶切后自连得到 E3区缺失的质粒 p BE3Δ。在 p BE3Δ质粒的 Bgl 位点加入接头后 ,产生含多个酶切位点的质粒 p BE3L,经相应的酶切鉴定 ,证明突变、缺失和接头连接正确后 ,利用 p BE3L 分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒 ,并分别进行转染以检测其表达。结果显示 ,p BE3L CGFP质粒在转染 DK细胞后 ,于 36 h即可观察到荧光 ,72～ 96 h无明显差别 ,传 3代后仍可见表达荧光的细胞 ;而 p BE3L GFP质粒转染 DK细胞后经检测无表达。结果表明 ,构建的 E3区缺失性载体不能利用 E3区自身的启动子进行目的基因的表达 ,外源性启动子的加入是必要的。 展开更多
关键词 犬2型腺病毒 E3区缺失性表达载体 构建 外源基因表达
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植物生长调节剂对转基因鱼腥藻7120生长与外源基因表达的影响 被引量：3
8
作者 刘志伟 张晨 +1 位作者 侯雨文 郭勇 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期567-569,共3页
适宜浓度的IBA、6-BA、赤霉酸和氯化胆碱均促进转基因鱼腥藻7120生长,提高其生物量,不影响外源基因表达,但从总体上讲高浓度植物生长调节剂则抑制藻细胞生长,降低外源基因表达水平。这些植物生长调节剂混合施用促进转基因鱼腥藻生长效... 适宜浓度的IBA、6-BA、赤霉酸和氯化胆碱均促进转基因鱼腥藻7120生长,提高其生物量,不影响外源基因表达,但从总体上讲高浓度植物生长调节剂则抑制藻细胞生长,降低外源基因表达水平。这些植物生长调节剂混合施用促进转基因鱼腥藻生长效果不如单一因子好,外源基因表达水平也略有下降。 展开更多
关键词 植物生长调节剂 转基因鱼 生长效果 混合施用 6-BA 赤霉酸 氯化胆碱 外源基因表达 鱼腥藻 藻细胞
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丝状真菌米曲霉外源基因表达系统的构建 被引量：4
9
作者 王斌 潘力 郭勇 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第6期84-90,共7页
以米曲霉(Aspergillus oryzae)R IB40的基因组DNA为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA.将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子... 以米曲霉(Aspergillus oryzae)R IB40的基因组DNA为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA.将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子下,得到表达载体pNMA-RML,通过ApaⅠ酶切线性化转化米曲霉宿主菌A.oryzaeniaD300,得到整合型的阳性转化子A.oryzaeONL1.其培养7天的培养液的上清液在以三丁酸甘油酯为底物的平板上形成清晰的水解透明圈,碱滴定法酶活测定表明培养液酶活可达2.5U/mL,培养液上清液的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱在相对分子质量32 500处有RML的特征条带.这说明RML已经在米曲霉中成功表达,同时证明所构建的米曲霉外源基因表达系统是有效的. 展开更多
关键词 米曲霉 外源基因表达 米赫根毛霉脂肪酶 硝酸盐还原酶 标记基因
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毕赤酵母外源基因表达系统研究进展 被引量：8
10
作者 杜中军 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 翟衡 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第4期7-11,共5页
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、... 巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源基因表达系统 研究进展 甲醇营养型酵母
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甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立 被引量：3
11
作者 杨凯 庞义 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期412-418,共7页
用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能... 用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制 ,称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成 ,每个bacmid携带了一种病毒基因型 ,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对 111个bacmid分析表明 ,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外 ,还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞 ,可产生子代病毒 ,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因 (Seph)被插入失活 ,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se3 0 1后 ,细胞出现典型的病理变化 ,核中出现多角体 ,证明SeMNPVBAC TO 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 BAC-TO-BAC外源基因表达系统 BAC文库 位点特异性重组 多角体蛋白基因
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复制缺陷型人泡沫逆转录病毒载体构建和外源基因表达 被引量：3
12
作者 李治 杨频 +1 位作者 刘辉 李文鑫 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期114-118,共5页
在人泡沫逆转录病毒 (humanfoamyvirus ,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上 ,缺失病毒基因组的env基因和bel基因 ,构建了一个表达标记基因neo和报道基因 gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI GFP。在与辅助质粒 p△GP共转染情况下 ,得... 在人泡沫逆转录病毒 (humanfoamyvirus ,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上 ,缺失病毒基因组的env基因和bel基因 ,构建了一个表达标记基因neo和报道基因 gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI GFP。在与辅助质粒 p△GP共转染情况下 ,得到复制缺陷型的重组病毒颗粒GPSNI GFP。该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞 。 展开更多
关键词 病毒复制 缺陷型人泡沫逆转录病毒 载体 外源基因表达
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绿色木霉外源基因表达系统的构建 被引量：2
13
作者 刘芳 杨佳颖 陈红漫 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第13期3180-3183,共4页
利用PCR方法克隆瑞氏木霉(Trichoderma reesei)外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ基因(cbhⅠ)启动子序列,以pSK载体为骨架,构建了pSK-cbhⅠ-GFP-hph表达载体,并成功转入到绿色木霉(T.viride)Sn-9106中。通过对绿色木霉Sn-9106进行遗传改造,为... 利用PCR方法克隆瑞氏木霉(Trichoderma reesei)外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ基因(cbhⅠ)启动子序列,以pSK载体为骨架,构建了pSK-cbhⅠ-GFP-hph表达载体,并成功转入到绿色木霉(T.viride)Sn-9106中。通过对绿色木霉Sn-9106进行遗传改造,为纤维素酶基因在木霉中同源重组表达提供遗传转化平台。 展开更多
关键词 绿色木霉(Trichoderma viride) cbhⅠ启动子 绿色荧光蛋白 外源基因表达
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大肠杆菌中外源基因表达的研究进展 被引量：16
14
作者 杨喆 李太华 徐维明 《微生物学免疫学进展》 2000年第2期69-72,共4页
基因工程技术已使许多重要的生物活性蛋白基因在大肠杆菌中得到表达。但不同外源基因表达效率差异很大 ,本文综述了影响外源基因表达的一些因素 ,以便采取有效方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率。
关键词 大肠杆菌 外源基因表达 密码子 mRNA结构 载体
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影响大肠杆菌中外源基因表达的因素 被引量：6
15
作者 高慧 孙建义 刘明启 《上海畜牧兽医通讯》 2006年第5期64-65,共2页
关键词 外源基因表达 大肠杆菌 发酵培养 表达效率 克隆与表达 遗传背景 选择利用 目的基因
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牛β-乳球蛋白基因的克隆及其调控外源基因表达的研究
16
作者 陈红星 程萱 +3 位作者 杨晓 邓继先 苏国富 黄培堂 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第2期78-82,共5页
目的　制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法　用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的g... 目的　制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法　用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的gDNA区。扩增出的各片段克隆到T 载体上 ,酶切鉴定及序列分析均证实了所扩增片段的正确性。将五个片段与荧光素酶cDNA拼接成荧光素酶瞬时表达载体并在小鼠乳腺中瞬时表达。结果　注射荧光素酶瞬时表达载体的小鼠乳汁中明显测出了荧光素酶活性。结论　所克隆的牛 β 乳球蛋白基因表达调控序列能够指导外源基因在小鼠乳腺中表达。 展开更多
关键词 小鼠 乳腺 克隆 扩增 荧光素酶 瞬时表达 载体 外源基因表达 Β-乳球蛋白基因 表达调控
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究 被引量：2
17
作者 陈金霞 张宽 +9 位作者 张玉娇 杜楠楠 郑海红 李丽薇 周艳君 虞凌雪 童武 郑浩 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期12-19,共8页
利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够... 利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3'非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 3'非翻译区 转录调控序列 外源基因表达
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用海洋蓝细菌启动子构建的启动子探针载体进行外源基因表达
18
作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1997年第2期51-51,共1页
关键词 海洋蓝细菌 启动子探针载体 外源基因表达
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转双抗虫基因欧美杨107杨中外源基因的表达 被引量：8
19
作者 张益文 任亚超 +2 位作者 刘娇娇 梁海永 杨敏生 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第12期45-52,共8页
【目的】鉴定并分析转双抗虫基因(BtCryl Ac和API基因)欧美杨107杨(简称:转基因107杨)中外源基因的表达情况,并且筛选出对鳞翅目害虫美国白蛾和杨扇舟蛾具有高抗虫性的转基因107杨株系【方法】以10个转基因107杨株系2年生田间苗为试验材... 【目的】鉴定并分析转双抗虫基因(BtCryl Ac和API基因)欧美杨107杨(简称:转基因107杨)中外源基因的表达情况,并且筛选出对鳞翅目害虫美国白蛾和杨扇舟蛾具有高抗虫性的转基因107杨株系【方法】以10个转基因107杨株系2年生田间苗为试验材料,未转基因107杨为对照(CK),进行外源基因表达测定,包括PC R检测、绝对荧光定量PC R检测和毒蛋白检测以及鳞翅目害虫抗虫性对比试验【结果】PCR检测结果表明,10个转基因株系均检测到外源基因BtCryl Ac和API而对照未检测到,证明BtCryl Ac和API基因已稳定插入转基因植株基因组中。荧光定量PCR检测表明,8月份PB1,PB2,PB6,PB9和PB10这5个株系BtCryl Ac基因的转录丰度较高为1.72×10~8~7.91×10~9,PB1最高;PB3,PB7和PB8次之为1.03×10~7~2.35×10~7;PB4和PB5与对照一样未检测到BtCrylAc基因的转录表达。ELISA毒蛋白检测表明,CrylAc毒蛋白的表达量与转录丰度大小变化趋势一致,PBl最高,为665.11 ng·g^(-1),PB4和PB5与对照一样未检测到毒蛋白。室内饲虫试验证明转基因107杨对美国白蛾幼虫的杀虫效果高于杨扇舟蛾幼虫。8个表达毒蛋白的转基因株系对1-6龄美国白蛾幼虫的致死率均为100%,但致死时间存在一定差异,PB1和PB2对各龄幼虫的致死时间均较短;PB1,PB2,PB6,PB9和PB10对1~4龄杨扇舟蛾幼虫的致死率均为100%,其中PB1和PB2的致死时间较短,PB3,PB7和PB8对1~2龄杨扇舟蛾幼虫的致死率为100%,对3龄和4龄的致死率最高为22.22%。综合抗虫对比试验结果,可以将8个转基因株系划分为2个抗性水平:PB1,PB2,PB6,YB9和PB10为高抗株系对美国白蛾和杨扇舟蛾均表现高抗性;PB3,PB7和PB8为中抗株系,对杨扇舟蛾表现出中等抗性,但对美国白蛾表现出高抗性。【结论】通过对转基因107杨进行一系列分子检测及室内抗虫对比试验,证明外源基因已成功导入杨树基因组并稳定存在,并且有8个株系高效表达;抗虫试验证明转基因107杨对美国白蛾和杨扇舟蛾具有明显的抗性,筛选出的5个株系对2种害虫都具有高抗性,另外3个株系PB3,PB7和PB8对美国白蛾具有很高的抗性,而对杨扇舟虫我则表现出中低抗性。 展开更多
关键词 双抗虫基因 欧美杨107杨 外源基因表达 BT毒蛋白 抗虫性
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宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达 被引量：4
20
作者 易咏竹 陈寅 +2 位作者 张志芳 何家禄 秦俭 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第4期304-307,共4页
通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体... 通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体 (HyBacPAK6 )。HyBacPAK6DNA经Bsu36Ⅰ酶切后与含植酸酶基因的转移载体pVL1393 phy在家蚕细胞中重组后 ,通过蓝白斑筛选发现重组率可达 90 %以上。然而以杂交病毒为载体的外源基因表达量仅为以BmNPV为载体病毒的表达量的 2 0 %左右。分析认为HyBacPAK6可用于表达一些对蚕体有害的外源基因。 展开更多
关键词 表达载体 宿主域 外源基因表达 家蚕 昆虫杆状病毒表达系统 HyBacPAK6
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