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古核嗜热菌组蛋白基因多点突变的新方法 被引量：1
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作者 翁梁 纪昕 +5 位作者 王智 马吉胜 李娜 曹淑桂 冯雁 刘丹 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期264-266,共3页
嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低,限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术,在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进,参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表,设计了一对含有5个精氨酸突... 嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低,限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术,在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进,参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表,设计了一对含有5个精氨酸突变密码子的单链DNA,全长为115nt,在3’端有20nt互补序列。将单链DNA在94℃变性,45℃复性,使其互补结合,72℃进行延伸反应,得到含有突变位点的组蛋白基因;再以此基因为模板设计相应的一对引物进行PCR扩增反应,得到大量组蛋白突变基因。该研究为一些序列已知,片段较小基因的多点突变提供了一种简单、易行的方法。 展开更多
关键词 古核嗜热菌组蛋白 基因多点突变 聚合链式反应
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