期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到432篇文章
< 1 2 … 22 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
双链RNA依赖的蛋白激酶与阿尔茨海默病相关性研究进展 被引量：1
1
作者 龚奕 肖星洋 +2 位作者 胡有生 谢义炜 伍知辉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期425-434,共10页
阿尔茨海默病(AD)是一种严重威胁人类健康的疾病,也是引起人类死亡的三大因素之一。双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)又称为前炎症细胞因子,是人类先天免疫干扰素刺激因子之一。在AD发生和发展中,PKR表达上调并持续激活,一方面引发脑组织细... 阿尔茨海默病(AD)是一种严重威胁人类健康的疾病,也是引起人类死亡的三大因素之一。双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)又称为前炎症细胞因子,是人类先天免疫干扰素刺激因子之一。在AD发生和发展中,PKR表达上调并持续激活,一方面引发脑组织细胞发生整合应激反应,另一方面间接上调β位淀粉样前体蛋白裂解酶1的表达,促进β淀粉样蛋白(Aβ)的积累,而Aβ的积累又可以激活PKR,进一步促进Aβ的积累,形成一个Aβ持续积累的循环。PKR还可以促进Tau蛋白磷酸化,降低神经细胞微管稳定性。脑组织炎症反应、Aβ的积累所引起神经毒性和微管稳定性的破坏会导致AD发生发展,引起患者记忆和认知的下降,因此PKR是AD发生发展中的关键分子。有效进行PKR检测可以预测AD进展,为临床治疗AD提供先机。目前PKR已成为研发治疗AD药物的靶点,因此靶向PKR的抑制剂有望控制PKR的活性,从而有效控制AD发生发展。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 双链rna依赖的蛋白激酶 Β淀粉样蛋白 TAU蛋白
在线阅读 下载PDF
双链RNA通过激活PKR/eIF2α通路抑制恶性胶质瘤生长和迁移
2
作者 燕群 卞莎莎 束敏峰 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期295-305,共11页
目的研究放疗模拟剂博来霉素(Zeocin)诱导的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)对PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)通路激活和RNA m6A相关酶的影响,从而探索其抑制恶性胶质瘤生长和迁移的分子机制。方法通过划痕实... 目的研究放疗模拟剂博来霉素(Zeocin)诱导的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)对PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)通路激活和RNA m6A相关酶的影响,从而探索其抑制恶性胶质瘤生长和迁移的分子机制。方法通过划痕实验、平板克隆形成实验、CCK8实验检测Zeocin处理后的恶性胶质瘤细胞生长和迁移情况;通过Western blot和RT-qPCR实验检测甲基修饰酶的mRNA表达水平;使用J2抗体检测Zeocin处理胶质瘤细胞后细胞内dsRNA的产生水平;利用Western blot实验检测相关甲基修饰酶的表达水平、双链RNA依赖的蛋白激酶R(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)及真核生物起始因子2α(eukaryotic initiating factor 2α,eIF2α)的磷酸化水平。结果放疗模拟剂Zeocin显著抑制恶性胶质瘤细胞的生长和迁移;Zeocin处理恶性胶质瘤细胞可产生内源的双链RNA增多;随着Zeocin浓度的增加,磷酸化的PKR与eIF2α水平均显著上升;Zeocin可以剂量依赖性下调胶质瘤细胞内总m6A水平;Zeocin可以选择性下调甲基化酶METTL14的蛋白水平;Zeocin对m6A相关酶的mRNA水平无影响。结论Zeocin可能通过下调恶性胶质瘤细胞中RNA的m6A水平,产生较多的dsRNA,进而激活PKR/eIF2α免疫调节通路,最终导致肿瘤生长抑制。 展开更多
关键词 胶质瘤 m6A甲基化 rna修饰 双链rna PKR
在线阅读 下载PDF
双链RNA对薇甘菊根基因 MmEXPA4 的靶向抑制
3
作者 欧正慧 王抗抗 +3 位作者 武强 钱万强 刘博 万方浩 《生物安全学报（中英文）》 CSCD 北大核心 2024年第2期139-147,共9页
【目的】结合薇甘菊较强的节节生根能力的生物学特性,研发利用RNAi技术抑制薇甘菊根系生长基因表达的生物防治技术,为进一步开发薇甘菊靶向防控技术奠定基础。【方法】利用同源比对方法,鉴定出调控薇甘菊根系发育的关键基因(MmEXPA4),... 【目的】结合薇甘菊较强的节节生根能力的生物学特性,研发利用RNAi技术抑制薇甘菊根系生长基因表达的生物防治技术,为进一步开发薇甘菊靶向防控技术奠定基础。【方法】利用同源比对方法,鉴定出调控薇甘菊根系发育的关键基因(MmEXPA4),体外合成该基因的双链RNA(dsMmEXPA4),利用dsMmEXPA4注射薇甘菊根部,研究其对薇甘菊根系生长的作用。【结果】与对照组相比,dsMmEXPA4处理30 d后,所有不定根的数量、鲜重和最长不定根的长度均显著降低。qRT-PCR检测结果表明,在dsMmEXPA4处理后第4和第5天,MmEXPA4基因的表达量显著下调,沉默效率分别为43.96%和52.11%。此外,通过Fluorescent Stereo Microscope Leica M165 FC发现,被荧光标记的dsMmEXPA4能在根系中测检到较强的绿色荧光信号。【结论】MmEXPA4基因可作为抑制薇甘菊根系发育及快速生长的潜在靶点,为利用RNA干扰技术生物防治薇甘菊提供理论基础。 展开更多
关键词 薇甘菊 双链rna 入侵杂草 MmEXPA4 抑制植株生长
在线阅读 下载PDF
hTERT双链RNA对肺癌细胞端粒酶的抑制作用 被引量：13
4
作者 田凤军 王智勇 +2 位作者 马俊义 赵云霞 卢炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期257-261,共5页
背景与目的:RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是基因功能研究新技术,其机制是通过双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)与靶RNA结合并将其降解。本实验探讨dsRNA对肺癌细胞端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)... 背景与目的:RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是基因功能研究新技术,其机制是通过双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)与靶RNA结合并将其降解。本实验探讨dsRNA对肺癌细胞端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)抑制的可能性和特异性,了解其对肺癌细胞增殖的影响,观察其是否对真核细胞有非特异杀伤作用,探讨其在肿瘤研究和治疗方面应用的可能性。方法:RT-PCR和PCR扩增hTERT基因两个外显子和一个内含子部分序列,采用正、反义cDNA链串联形式构建dsRNA真核表达载体,转染肺癌A549细胞。RT-PCR检测hTERTmRNA表达,Westernblot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况。结果:hTERT外显子的两段dsRNA作用肺癌A549细胞后,都表现出hTERT基因表达抑制、端粒酶活性下降、细胞增殖受到抑制,而且,dsRNA未引起细胞非特异死亡。结论:hTERTdsRNA能特异使hTERT基因沉默,对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞生长具有明显的抑制作用,有可能成为肺癌基因治疗的新方法。 展开更多
关键词 双链rna rna干涉 人端粒酶逆转录酶 肺肿瘤
在线阅读 下载PDF
双链RNA干涉技术(RNAi)在不同生物中应用的研究进展 被引量：18
5
作者 韩蓓 王秀敏 顾学范 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期200-202,共3页
双链RNA(double～strandedRNAdsRNA )干涉技术可通过降解靶基因的mRNA进行基因干涉 ,是研究多种生物基因功能的有效手段 ,目前已在拟南芥、秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、斑马鱼和小鼠等生物中应用 。
关键词 双链rna 基因干涉 基因功能 生物 植物 动物 应用 研究进展
在线阅读 下载PDF
短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响 被引量：7
6
作者 孟和 陈学辉 +2 位作者 王起山 崔芳岩 潘玉春 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期302-307,共6页
RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷... RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显著水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显著 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显著。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA) 展开更多
关键词 rna干扰 短双链rna 鸡胚盘细胞 外源绿荧光蛋白基因 表达 rnaI
在线阅读 下载PDF
昆虫RNA干扰中双链RNA的转运方式 被引量：8
7
作者 刘吉升 朱文辉 +2 位作者 廖文丽 卜晓玲 江婉仪 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期682-691,共10页
昆虫RNA干扰主要指外源双链RNA诱发的,通过阻碍特定基因的翻译或转录,引起内源目标信使RNA沉默的机制。由于RNA干扰的特异性,RNA干扰技术主要应用于昆虫功能基因组和害虫防治的研究。本综述主要对双链RNA引起昆虫体内RNA干扰研究中双链... 昆虫RNA干扰主要指外源双链RNA诱发的,通过阻碍特定基因的翻译或转录,引起内源目标信使RNA沉默的机制。由于RNA干扰的特异性,RNA干扰技术主要应用于昆虫功能基因组和害虫防治的研究。本综述主要对双链RNA引起昆虫体内RNA干扰研究中双链RNA转运的3种方法(显微注射法、喂食法及浸泡与转染法)进行介绍和讨论。这3种方法中,显微注射法能将精确数量的双链RNA迅速转运到目标组织,更适合实验室基因功能的研究;喂食法操作简单快速,适合高通量的基因筛选;浸泡与转染法也适合大规模的基因筛选,但更常见于细胞研究中。 展开更多
关键词 昆虫 基因沉默 rna干扰 双链rna传运 害虫防治
在线阅读 下载PDF
水稻双链RNA结合蛋白同源基因OsRBP的克隆及其表达的分析 被引量：17
8
作者 唐向荣 吴昊 +2 位作者 贾明 余旭红 何玉科 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2002年第1期41-45,共5页
在基因数据库中发现两个水稻EST片段与大白菜BcpLH基因的双链RNA结合结构域 (dsRBD)有同源的区域 ,根据同源片段的位置特征设计引物 ,用RT-RCR扩增粳稻 (Oryzasativasubsp .japonica)愈伤组织的cDNA ,得到大小为 1.8kb的DNA片段。该cDN... 在基因数据库中发现两个水稻EST片段与大白菜BcpLH基因的双链RNA结合结构域 (dsRBD)有同源的区域 ,根据同源片段的位置特征设计引物 ,用RT-RCR扩增粳稻 (Oryzasativasubsp .japonica)愈伤组织的cDNA ,得到大小为 1.8kb的DNA片段。该cDNA片段含完整的编码区 ,有两个典型的dsRBD ,分别与BcpLH的dsRBD在氨基酸水平上同源性为 75 %左右 ,故将其命名为OsRBP。RT -PCR表达分析显示该基因在未成熟的种子和愈伤组织中表达 ,在根、茎、叶、穗、成熟种子及胚芽鞘中没有表达信号 ,由此推测该基因的表达可能与种子和胚的早期发育相关。该研究首次从水稻中分离到双链RNA结合蛋白基因 ,并初步研究了其表达方式 。 展开更多
关键词 水稻 双链rna结合蛋白 胚 RT-PCR OsRBP 基因克隆 基因表达
在线阅读 下载PDF
葡萄病毒病的双链RNA(dsRNA)检测技术研究 被引量：22
9
作者 牛建新 李东栋 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期149-152,共4页
将病毒dsRNA分析检测技术应用到果树病毒的诊断检测上熏并对生产中广泛发生的葡萄卷叶病病毒穴GLRV雪、葡萄扇叶病毒穴GFV雪进行了检测并确立检测标准,为今后葡萄病毒病的诊断检测奠定了良好的基础。同时,还对在葡萄上发生的一种黄边花... 将病毒dsRNA分析检测技术应用到果树病毒的诊断检测上熏并对生产中广泛发生的葡萄卷叶病病毒穴GLRV雪、葡萄扇叶病毒穴GFV雪进行了检测并确立检测标准,为今后葡萄病毒病的诊断检测奠定了良好的基础。同时,还对在葡萄上发生的一种黄边花叶病进行了研究,并获得了这种病毒的dsRNA,证实其为病毒侵染所致。 展开更多
关键词 葡萄 病毒诊断 dsrna提取 病毒病 双链rna检测技术 木本指示植物
在线阅读 下载PDF
双链RNA技术与植物病毒研究 被引量：10
10
作者 张晓婷 吴祖建 +1 位作者 林奇英 谢联辉 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期455-458,共4页
90%以上的植物病毒基因组是RNA。含RNA基因组的病毒会产生特异的双链RNA(dsRNA)。从受到病毒侵染的植物组织中提取病毒相关的dsRNA,进行病毒的检测和分类,诊断植物病毒病,探索生物防治植物病毒病的新途径,是植物病毒研究的重要内容。本... 90%以上的植物病毒基因组是RNA。含RNA基因组的病毒会产生特异的双链RNA(dsRNA)。从受到病毒侵染的植物组织中提取病毒相关的dsRNA,进行病毒的检测和分类,诊断植物病毒病,探索生物防治植物病毒病的新途径,是植物病毒研究的重要内容。本文就双链RNA技术在植物病毒研究中的应用做一综述。 展开更多
关键词 双链rna 植物病毒
在线阅读 下载PDF
双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的克隆表达及其对丙型肝炎病毒蛋白合成的抑制作用 被引量：3
11
作者 贾因棠 魏来 +2 位作者 蒋栋 丛旭 费然 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期24-30,共7页
α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子———双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于... α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子———双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于PKR是否在IFN-α抗HCV的机理中起抑制作用目前仍有争议.为研究PKR对HCV蛋白合成环节是否有抑制作用,通过构建野生型PKR真核表达载体(pPKRwt)及主要起负性调节作用的缺失突变PKR真核表达载体(pPKRΔ6),并将pPKRwt/pPKRΔ6与HCV复制子RNA同时转染Huh7细胞进行共表达,用Western印迹检测HCV IRES下游的NPTⅡ蛋白表达水平,与转染空载体的对照细胞及单用IFN-α处理的细胞相比较.结果显示:表达PKRwt的细胞中NPTⅡ蛋白水平低于转染空载体的对照细胞,但高于经IFN-α单独处理的细胞;表达PKRΔ6的细胞中NPTⅡ蛋白水平与对照细胞无明显差别,但PKRΔ能部分抵消IFN-α的抑制作用,说明在IFN-α抑制HCV IRES指导的蛋白合成中,PKR有一定的抑制作用,但可能还有其它的PKR非依赖机制参与. 展开更多
关键词 双链rna依赖的蛋白激酶 丙型肝炎病毒 复制子 Α干扰素 内部核糖体进入位点
在线阅读 下载PDF
短双链RNA特异性抑制哺乳动物细胞中绿色荧光蛋白基因表达 被引量：2
12
作者 黄宇琛 李江 +2 位作者 谭琛 李小玲 李桂源 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第7期710-714,共5页
背景与目的:双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。本研究旨在探讨绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的短双链RNA(shortinterferingRNAs,siRNAs)是否能抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。方法:用... 背景与目的:双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。本研究旨在探讨绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的短双链RNA(shortinterferingRNAs,siRNAs)是否能抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。方法:用荧光显微镜和荧光分光光度计观察合成的GFPsiRNAs对绿色荧光蛋白表达基因pEGFPC2在HeLa细胞中表达的影响,同时观察长链GFPdsRNA、Cx26siRNAs和长链Cx26dsRNA对荧光蛋白表达的影响,并通过流式细胞仪观察上述不同种类的dsRNA对细胞凋亡的影响。结果:GFPsiRNAs能特异性抑制GFP基因在HeLa细胞中的表达,而Cx26siRNAs对荧光蛋白的表达没有影响。长链双链RNA可以诱导细胞的凋亡,而siRNAs对细胞的凋亡无影响。结论:siRNAs能在哺乳动物特异性抑制基因的表达,该研究将为利用siRNA作为一种治疗手段提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 基因表达 短双链rna 基因转染 细胞凋亡 绿色荧光蛋白 GFP DSrna
在线阅读 下载PDF
应用分析双链RNA技术诊断苹果潜隐性病毒病 被引量：5
13
作者 叶华智 伍光庆 冷怀琼 《四川农业大学学报》 CSCD 1991年第2期195-199,T001,共6页
本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或... 本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或花瓣用酚萃取,经CF-11纤维素层析纯化,再用6％聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴乙锭或银盐染色分析ds RNA电泳图谱。经脱毒的苹果树叶片,未发现有病毒的ds RNA存在。文中还报导了使用这一技术诊断苹果潜隐性病毒的有关技术条件。 展开更多
关键词 苹果 潜隐病毒 病毒 诊断 双链rna
在线阅读 下载PDF
与BT型细胞质雄性不育水稻相关联的双链RNA 被引量：5
14
作者 张学文 王斌 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第4期289-293,共5页
以改进的Kemble′s方法提取BT型水稻细胞质雄性不育系及相应保持系线粒体核酸,在电泳分离后的不育系线粒体核酸中发现一特异双链RNA(dsRNA)分子,进一步实验表明,它是线粒体外的成份。与真菌中普遍发现的dsRNA病毒类颗粒(virus-like part... 以改进的Kemble′s方法提取BT型水稻细胞质雄性不育系及相应保持系线粒体核酸,在电泳分离后的不育系线粒体核酸中发现一特异双链RNA(dsRNA)分子,进一步实验表明,它是线粒体外的成份。与真菌中普遍发现的dsRNA病毒类颗粒(virus-like particles,VLP)相似,这种颗粒也能以细胞质遗传的方式稳定遗传。在表现为杂种优势的F_1代(不育系×恢复系)也发现有这种颗粒,但在F_1代黄化苗相对成熟的基部,此颗粒相对线粒体有减少的趋势,推测是因为F_1核背景不适合此VLP的生存而逐渐被排斥。电镜观察估测dsRNA分子量为6.0×10~6。这种VLP在BT型水稻细胞质雄性不育系中的普遍存在及其遗传行为表明其与不育可能有关。 展开更多
关键词 水稻 胞质雄性不育 双链rna
在线阅读 下载PDF
双链RNA在基因沉默中的作用 被引量：2
15
作者 汤富酬 李成建 薛友纺 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期659-663,共5页
介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是... 介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制 .这些机制具有巨大的应用前景 . 展开更多
关键词 小干涉rna 甲基化 双链rna 基因沉默 作用
在线阅读 下载PDF
双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定 被引量：2
16
作者 关振宏 李影 +1 位作者 张茂林 段铭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第28期13521-13523,共3页
[目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体... [目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒 双链rna依赖的蛋白激酶 真核表达 纯化
在线阅读 下载PDF
双链RNA和植物对病毒的抗性 被引量：1
17
作者 白云凤 王小琦 +2 位作者 白冬梅 郭志华 张维锋 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第S3期44-48,共5页
双链RNA能诱导转录后的基因沉默,是生物抵御病毒入侵、维持自身基因稳定的一种自我保护机制.把源自病毒的基因构建成反向重复结构转入植物体内,其转录出的RNA会通过分子内序列互补形成双链,将入侵病毒的同源序列降解,使转基因植株获得... 双链RNA能诱导转录后的基因沉默,是生物抵御病毒入侵、维持自身基因稳定的一种自我保护机制.把源自病毒的基因构建成反向重复结构转入植物体内,其转录出的RNA会通过分子内序列互补形成双链,将入侵病毒的同源序列降解,使转基因植株获得对病毒的高抗性.RNA干扰型抗病毒转基因植株中,转病毒基因的mRNA不存在或存在量很少,也不会翻译成有功能的病毒蛋白,因此不存在病毒RNA重组、异源包装及协生作用的潜在风险,具有较高的生物安全性.双链RNA抗病毒转基因正在成为一种高效、安全的植物抗病毒策略. 展开更多
关键词 双链rna 基因沉默 抗病毒 基因工程
在线阅读 下载PDF
一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用 被引量：3
18
作者 梁艳 Vanvimon Saksamerprome +1 位作者 Kallaya Sritunyalucksan 黄倢 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1011-1017,共7页
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的... RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆加入。培养30mL的细菌,即可得到1mg纯化的dsRNA,而其成本仅为使用商业化体外转录试剂盒的四分之一。为评估RNAi效果,按照每1克虾体肌肉注射2μg dsRNA的剂量,在dsRNA注射后0,6,12和24h采集血淋巴,RT-PCR检测KPI mRNA的基因转录水平。与对照组GFP-dsRNA和NaCl注射组相比,KPI-dsRNA注射组可以在24h内沉默血淋巴中的KPI基因。结果表明该方法是可大规模制备长的dsRNA的方法。 展开更多
关键词 斑节对虾 rna干扰 双链rna 体内转录 大肠杆菌HT115 kazal型蛋白激酶抑制剂
在线阅读 下载PDF
一种实用的双链RNA病毒基因组克隆方法 被引量：2
19
作者 章松柏 吴祖建 +2 位作者 段永平 谢联辉 林奇英 《长江大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第2期71-73,108,共3页
以克隆水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus.RDV)基因组片段 S11、S12为例.报道一种克隆植物dsRNA 病毒基因组的方法。具体过程为:利用 T4 RNA 连接酶将5′-磷酸、3′-氨基修饰的引物 Primer 1连接到 RDV 病毒基因组第11、12片段 dsRNA 的3′... 以克隆水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus.RDV)基因组片段 S11、S12为例.报道一种克隆植物dsRNA 病毒基因组的方法。具体过程为:利用 T4 RNA 连接酶将5′-磷酸、3′-氨基修饰的引物 Primer 1连接到 RDV 病毒基因组第11、12片段 dsRNA 的3′-OH 端,经逆转录、退火、补齐形成全长双链 cD-NA,使用单一的互补引物 Primer 2进行 PCR 扩增,扩增产物克隆在 pMD 18-T 载体上.对重组子进行两次限制性内切酶分析,结合序列测定分离鉴定 S11、S12。结果表明,这种方法能同时克隆 RDV 基因片段S11、S12,是一种有效实用的 dsRNA 病毒基因组克隆方法。 展开更多
关键词 病毒基因组 克隆方法 双链rna dsrna 种实 水稻矮缩病毒 限制性内切酶 virus 基因组片段 PCR扩增 S12 克隆植物 氨基修饰 cDNA 扩增产物 分离鉴定 序列测定 基因片段 逆转录 T载体 重组子 引物
在线阅读 下载PDF
双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞差减cDNA文库的构建 被引量：2
20
作者 陈玉栋 张义兵 +3 位作者 朱蓉 蒋王君 张奇亚 桂建芳 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期168-172,共5页
以紫外线灭活的dsRNA病毒草鱼出血病病毒(GCHV)诱导和模拟诱导的牙鲆胚胎细胞为材料,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,成功构建了双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞(FEC)差减cDNA文库。以管家基因αtub lin作为差减指标,经检测,该文库差减效率... 以紫外线灭活的dsRNA病毒草鱼出血病病毒(GCHV)诱导和模拟诱导的牙鲆胚胎细胞为材料,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,成功构建了双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞(FEC)差减cDNA文库。以管家基因αtub lin作为差减指标,经检测,该文库差减效率达210倍,表明经病毒诱导后某些差异表达基因也得到了相应倍数的富集。将获得的cDNA片段连接到pGEM T载体,PCR检测显示差减片段在250bp^2 000bp之间。该差减cDNA文库的构建为从分子水平研究牙鲆培养细胞对dsRNA病毒的免疫反应、以及进一步鉴定和克隆差异表达基因打下了坚实基础。 展开更多
关键词 牙鲆 草鱼出血病病毒 双链rna病毒 抑制性差减杂交 cDNA文库
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 22 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部