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JS018菌有机磷农药降解酶的纯化 被引量:4
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作者 江玉姬 邓优锦 +4 位作者 刘新锐 胡方平 谢宝贵 刘福阳 黎志银 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期462-466,共5页
实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAG... 实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS—PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa.N末端16个氨基酸残基测序的结果为:GAPFQNDVPPACYRFR。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 电泳 层析 纯化 测序
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聚丙烯二氧化钛负载膜固定化农药降解酶的研究 被引量:6
2
作者 张庆庆 汤斌 +1 位作者 方磊 张春乐 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期19-21,共3页
利用聚丙烯负载二氧化钛膜固定农药降解酶(EC3.1.8.2),研究了酶固定化的条件,选择农药甲基对硫磷进行了降解试验。结果表明,酶固定化最佳时间为1.5h,最适固定温度为20℃,最佳固定化酶液浓度为1.6mg/mL。吸附农药降解酶的聚丙烯负载二氧... 利用聚丙烯负载二氧化钛膜固定农药降解酶(EC3.1.8.2),研究了酶固定化的条件,选择农药甲基对硫磷进行了降解试验。结果表明,酶固定化最佳时间为1.5h,最适固定温度为20℃,最佳固定化酶液浓度为1.6mg/mL。吸附农药降解酶的聚丙烯负载二氧化钛酶膜,通过与游离酶的比较,固定化酶最适反应温度有所偏移,提高了5℃,酶降解农药的最适pH值为8.5,对农药甲基对硫磷的降解率30min内达到70%以上,并且固定后的二氧化钛酶膜具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 农药降解酶 二氧化钛 聚丙烯膜 固定化
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Roseomonas JS018有机磷农药降解酶的纯化 被引量:5
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作者 江玉姬 邓优锦 +4 位作者 刘新锐 胡方平 谢宝贵 刘福阳 黎志银 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第4期421-425,共5页
本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电... 本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电泳测定该酶相对分子质量约为37 ku,N末端16个氨基酸残基测序结果为:GAPFQNDVPPACYRFR. 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 电泳 层析 纯化 测序
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真菌的有机磷农药降解酶产酶条件和一般性质 被引量:26
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作者 刘玉焕 钟英长 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期162-165,共4页
从受有机磷农药长期污染的土壤中通过富集培养,分离筛选到一株降解乐果活性较高的曲霉Z_58菌株,研究了该菌株的最适产酶条件。培养温度30℃,培养起始pH7.0,培养时间96h;酶反应的最适温度和pH分别为45℃和7.2... 从受有机磷农药长期污染的土壤中通过富集培养,分离筛选到一株降解乐果活性较高的曲霉Z_58菌株,研究了该菌株的最适产酶条件。培养温度30℃,培养起始pH7.0,培养时间96h;酶反应的最适温度和pH分别为45℃和7.2,在40℃以下及60~9.0范围内稳定,主要作用底物为有机磷农药。 展开更多
关键词 曲霉 有机磷农药降解酶 条件 学性质
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黑曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质 被引量:3
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作者 王继雯 甄静 +4 位作者 谢宝恩 刘莹莹 李冠杰 周伏忠 陈国参 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期549-554,共6页
采用细胞破碎、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-75凝胶过滤的方法,对黑曲霉(Aspergillus niger)J6产生的有机磷农药降解酶进行分离和纯化,并对其酶学性质进行研究。结果显示:黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在细胞膜上,其分子量为66 000。该... 采用细胞破碎、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-75凝胶过滤的方法,对黑曲霉(Aspergillus niger)J6产生的有机磷农药降解酶进行分离和纯化,并对其酶学性质进行研究。结果显示:黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在细胞膜上,其分子量为66 000。该降解酶最适pH值为7.0,最适反应温度为70℃,Fe3+、Cu2+、Li+、Zn2+、Mg2+、NaN3、EDTA、SDS、PSMF对该降解酶有不同程度的激活作用,而Mn2+对其有轻微的抑制作用,Ca2+和Triton对其有强烈的抑制作用。 展开更多
关键词 黑曲霉 有机磷农药降解酶 学性质
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产有机磷农药降解酶菌株的筛选及酶学性质研究 被引量:5
6
作者 罗永侦 董桂清 +1 位作者 余钧池 谢庆武 《广西轻工业》 2007年第4期25-26,4,共3页
通过用乙酰胆碱酯酶抑制法检测有机磷农药,从土壤中分离筛选出能降解敌敌畏的7个菌株,从其中降解能力较强的菌株OPD7提取胞内酶,并进行酶学性质的研究。结果表明,该酶分解敌敌畏的最适pH为7.0,最适温度为42℃,pH稳定范围为6-8,在低于47... 通过用乙酰胆碱酯酶抑制法检测有机磷农药,从土壤中分离筛选出能降解敌敌畏的7个菌株,从其中降解能力较强的菌株OPD7提取胞内酶,并进行酶学性质的研究。结果表明,该酶分解敌敌畏的最适pH为7.0,最适温度为42℃,pH稳定范围为6-8,在低于47℃时稳定;该酶也能降解乙酰甲胺磷、甲胺磷、乐果和氧化乐果。 展开更多
关键词 敌敌畏 有机磷农药降解酶 学性质
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有机磷农药降解酶基因Oph2的克隆及甲基对硫磷降解效果研究 被引量:1
7
作者 尚立成 水清照 +2 位作者 李玲 寇宗红 刘兰霞 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第17期5688-5694,共7页
目的挖掘可高效表达有机磷农药降解酶的基因,并构建含有该表达基因的工程菌,提供一种高效降解甲基对硫磷的新方法。方法利用基因克隆获得高效表达有机磷农药降解酶基因Oph2,采用基因工程手段将其转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系... 目的挖掘可高效表达有机磷农药降解酶的基因,并构建含有该表达基因的工程菌,提供一种高效降解甲基对硫磷的新方法。方法利用基因克隆获得高效表达有机磷农药降解酶基因Oph2,采用基因工程手段将其转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统,对毕赤酵母的发酵产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)定性和酶活定量研究,通过与目标底物甲基对硫磷反应,分析工程菌表达降解酶对甲基对硫磷的降解效果。结果本研究成功克隆得到了高效表达有机磷农药降解酶基因Oph2,基因全长1000 bp,编码256个氨基酸,酶蛋白分子量为37 kD,并利用表达载体pPIC9K成功将其转化至毕赤酵母GS115。构建的工程菌GS115-pPIC9K-Oph2表达有机磷农药降解酶活性为11.57 U/mL,对6.8 mg/L的甲基对硫磷降解效率为90%以上。结论本研究得到的工程菌GS115-pPIC9K-Oph2可高效表达有机磷农药降解酶,该酶活性高,对甲基对硫磷降解能力强,可有效应用于甲基对硫磷的降解。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 基因克隆 表达载体 降解能力 甲基对硫磷
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菊酯类农药降解酶Est825的降解效果及安全性评价初报 被引量:3
8
作者 梁卫驱 黄皓 +4 位作者 李艳芳 胡珊 罗华建 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期130-133,共4页
通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37℃;测定了菊酯类农药降解酶对SD大鼠急性经口毒性,LD50>6 g/kg体重,属实际无毒;皮... 通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37℃;测定了菊酯类农药降解酶对SD大鼠急性经口毒性,LD50>6 g/kg体重,属实际无毒;皮肤变态试验结果表明该酶制剂不引起皮肤变态反应。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 降解效果 安全性评价
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重组大肠杆菌发酵表达菊酯类农药降解酶培养基优化 被引量:1
9
作者 黄皓 梁卫驱 +4 位作者 罗华建 胡珊 李艳芳 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期134-137,共4页
通过单因素及正交试验,研究了碳源、有机氮源、无机氮源对重组大肠杆菌Eschericha.coli BL21(DE3)/pET-28a-est825菌体生长及产酶的影响,进而优化了产酶培养基,确定最佳培养基组成为:甘油20 g/L,酵母粉20g/L,硫酸铵5 g/L,NaCl 5 g/L,Na2... 通过单因素及正交试验,研究了碳源、有机氮源、无机氮源对重组大肠杆菌Eschericha.coli BL21(DE3)/pET-28a-est825菌体生长及产酶的影响,进而优化了产酶培养基,确定最佳培养基组成为:甘油20 g/L,酵母粉20g/L,硫酸铵5 g/L,NaCl 5 g/L,Na2HPO4·12H2O 10.7 g/L,KH2PO42.7 g/L,硫酸卡那霉素50μg/L,pH 7.0。采用此培养基发酵所得发酵液酶活力较优化前提高了86%。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 重组大肠杆菌 培养基 优化
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菊酯类农药降解酶基因原核表达条件的优化 被引量:1
10
作者 黄皓 梁卫驱 +4 位作者 李艳芳 胡珊 罗华建 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS 2015年第10期76-79,共4页
绘制了菊酯类农药降解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825的生长曲线,优化了诱导起始菌液浓度、诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间等条件,得到该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌液OD600值为4时,添加终浓度为6g/L的乳... 绘制了菊酯类农药降解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825的生长曲线,优化了诱导起始菌液浓度、诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间等条件,得到该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌液OD600值为4时,添加终浓度为6g/L的乳糖,37℃诱导8h,酶的表达量最高,酶活为95U/mL,纯化后的重组酶分子量为30.1ku。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 重组大肠杆菌 表达 优化
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“有机磷农药降解酶”,开创环保新天地 被引量:3
11
作者 杜卉 《时代经贸》 2007年第8期84-85,共2页
如今,农药的使用范围和数量越来越大,特别是对生长期短的蔬菜、瓜果类食品来说,由于虫害多,超量施药,造成农药残留超标现象日益突出,严重危害到人们的健康并造成环境的污染。而且,农药残留超标不但使我国农产品出口受到一定的阻碍。
关键词 有机磷农药降解酶 农药残留 严重危害 农产品出口 蔬菜 二次污染 食品 使用范围 相关产品 生长期
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有机磷农药降解酶opdA的提取和酶学性质
12
作者 郑佩华 苏胜艳 《黑龙江粮食》 2022年第3期65-67,共3页
采用硫酸铵进行分级沉淀,使有机磷农药降解酶opdA得到了纯化,提纯倍数为2.29,回收率为55.1%,用SDS-PAGE聚丙烯酰胺进行电泳,确定opdA的分子量为35KDa。该酶在温度为25~40℃区间时稳定性良好,35℃时酶活最佳。在pH6~10区间稳定,最适反应... 采用硫酸铵进行分级沉淀,使有机磷农药降解酶opdA得到了纯化,提纯倍数为2.29,回收率为55.1%,用SDS-PAGE聚丙烯酰胺进行电泳,确定opdA的分子量为35KDa。该酶在温度为25~40℃区间时稳定性良好,35℃时酶活最佳。在pH6~10区间稳定,最适反应pH9。重金属Mg^(2+)、Mn^(2+)对酶活呈现促进作用,而Fe^(2+)、Al^(3+)对酶活抑制作用明显。本文选择5种有机磷农药进行降解试验,降解酶opdA均呈现很好的降解作用。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 opdA 学性质
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有机磷农药降解酶制剂研制成功 农药残留可望去除
13
《农化新世纪》 2008年第4期16-16,共1页
困扰农产品质量安全的有机磷农药残留有望得到解决。中国农业科学院生物技术研究所的科学家们采用生物技术,首次在世界上成功研制出“有机磷农药降解酶制剂”。这一具有自主知识产权的重大成果,能有效降解有机磷农药,去除农产品的农... 困扰农产品质量安全的有机磷农药残留有望得到解决。中国农业科学院生物技术研究所的科学家们采用生物技术,首次在世界上成功研制出“有机磷农药降解酶制剂”。这一具有自主知识产权的重大成果,能有效降解有机磷农药,去除农产品的农药残留。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 有机磷农药残留 制剂研制 农产品质量安全 中国农业科学院 自主知识产权 生物技术 科学家
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一种清洗果蔬农药残留的新技术——农药残留“酶”降解技术 被引量:3
14
作者 谢建飞 卢宗云 《中国洗涤用品工业》 2012年第8期77-79,共3页
将农药降解酶与多元醇类保护剂、生物防腐剂和缓冲剂等原料按照一定比例混合,制备成为农药降解酶制剂。气相色谱检测结果表明:用该农药降解酶制剂浸泡果蔬10min,其对两种目标农药对硫磷和毒死蜱的降解率分别达到了99.9%和68.3%。该农药... 将农药降解酶与多元醇类保护剂、生物防腐剂和缓冲剂等原料按照一定比例混合,制备成为农药降解酶制剂。气相色谱检测结果表明:用该农药降解酶制剂浸泡果蔬10min,其对两种目标农药对硫磷和毒死蜱的降解率分别达到了99.9%和68.3%。该农药降解酶制剂在25℃条件下密封放置12个月,酶活性损失率仅为8.91%,表现出良好的酶活稳定性。该农药降解酶制剂可以有效降解果蔬表面农药残留,具有降解效率高、安全、使用方便等特点,可以有效保障食品安全,具有广阔的市场前景。 展开更多
关键词 农药降解酶 农药残留 降解 活性
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克雷伯氏菌ZD112氯氰菊酯降解酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量:11
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作者 王卓娅 刘玉焕 李荷 《广东药学院学报》 CAS 2008年第3期277-281,共5页
目的筛选新的菊酯农药降解酶基因并了解其特性,为解决食品和环境中的菊酯农药残留问题创造条件。方法通过构建基因文库的方式筛选获得新的菊酯农药降解酶(EstP)基因,并对其进行一系列生物信息学分析。结果获得了新的菊酯农药降解酶(EstP... 目的筛选新的菊酯农药降解酶基因并了解其特性,为解决食品和环境中的菊酯农药残留问题创造条件。方法通过构建基因文库的方式筛选获得新的菊酯农药降解酶(EstP)基因,并对其进行一系列生物信息学分析。结果获得了新的菊酯农药降解酶(EstP)基因。EstP属于水解酶类,由638个氨基酸编码,预测分子量为73.4 kDa,pI值为8.34,与其他蛋白相似性极低,不属于任何已知的蛋白超家族,仅与羧肽酶Taq(M32)的保守域具有一定相似性,推测Lys137,Glu116,Glu148为其必需氨基酸。结论新的菊酯农药降解基因得到克隆,生物信息学分析为其定向进化提供了理论指导,为高效基因工程菌的构建打下了基础。 展开更多
关键词 菊酯农药降解酶 基因克隆 菊酯农药 生物信息学分析
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产菊酯降解酶重组菌的高密度发酵工艺优化 被引量:2
16
作者 范新炯 莫忠兴 +3 位作者 张曼曼 裴生斌 刘玉焕 刘孝龙 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期108-119,共12页
为提高菊酯降解酶的产量,利用单因素和正交实验法对重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sys410的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有20.0 g·L-1甘油、20.0 g·L-1酵母粉、8.0 g·L-1硫... 为提高菊酯降解酶的产量,利用单因素和正交实验法对重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sys410的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有20.0 g·L-1甘油、20.0 g·L-1酵母粉、8.0 g·L-1硫酸铵、100.0 mmol·L-1磷酸盐、5.0 mmol·L-1硫酸镁,以及1.5 m L·L-1的微量元素;发酵条件为装液量50 m L/250 m L、初始培养基pH 7.0、接种量2%,接种培养8 h后乳糖诱导6 h。在7.5 L发酵罐上,使用低浓度碳氮源进行培养,前期恒速补料,对数中后期进行乳糖诱导,后期恒溶氧补料,最终菌体密度和酶活力分别为142.6和3 105.1 U·m L-1,较摇瓶发酵分别提高13.7倍和31.9倍。发酵液经破碎和冷冻干燥后酶活力达到119 426.9 U·g-1,且该酶对菊酯的降解率高于95%。 展开更多
关键词 农药降解酶 高密度发酵 拟除虫菊酯 生物降解
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新型拟除虫菊酯降解酶的分子改造及降解特性 被引量:2
17
作者 刘孝龙 刘玉焕 范新炯 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期111-117,共7页
为了获得稳定性和酶活性提高的拟除虫菊酯类降解酶,利用易错PCR技术对来源于海底泥宏基因组文库的新型酯酶基因(est825)进行体外定向进化,获得了一个酶活性和热稳定性均提高的突变酶(Est M46)。与野生型相比其酶活力提高1.5倍;最适反应... 为了获得稳定性和酶活性提高的拟除虫菊酯类降解酶,利用易错PCR技术对来源于海底泥宏基因组文库的新型酯酶基因(est825)进行体外定向进化,获得了一个酶活性和热稳定性均提高的突变酶(Est M46)。与野生型相比其酶活力提高1.5倍;最适反应温度提高了5℃,同时热稳定性明显增强。此外,Est M46对氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的降解率分别提升至92.21%、99.75%、93.21%和89.48%。这对降低酶的生产成本、促进工业化发展和环境保护有重要意义。 展开更多
关键词 拟除虫菊酯 农药降解酶 定向进化 生物降解
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黄杆菌(Flavobacteriumsp.)ATCC27551 opd基因在E.coli中的克隆及表达 被引量:7
18
作者 陈亚丽 张先恩 刘虹 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第2期200-204,共5页
研究了黄杆菌 ATCC2 75 5 1的 opd基因在大肠杆菌中的表达 ,并对于表达产物进行了胞内定位和酶活测定 .通过 PCR扩增和 PCR产物直接克隆 ,将黄杆菌质粒上的一段长达 1137bp的 opd基因进行扩增及克隆 ,然后按正确的读码框亚克隆于表达载... 研究了黄杆菌 ATCC2 75 5 1的 opd基因在大肠杆菌中的表达 ,并对于表达产物进行了胞内定位和酶活测定 .通过 PCR扩增和 PCR产物直接克隆 ,将黄杆菌质粒上的一段长达 1137bp的 opd基因进行扩增及克隆 ,然后按正确的读码框亚克隆于表达载体 p ET2 8b(+ )上 ,转化宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3) ,经 IPTG诱导 ,获得了较高量的基因表达产物 .该表达产物以包涵体的形式存在于细胞内 ,通过分离包涵体可以得到电泳较纯的条带 . 展开更多
关键词 黄杆菌 odp基因 克隆 表达 大肠杆菌 胞内定位活性 农药降解酶
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Transient expression of organophosphorus hydrolase to enhance the degrading activity of tomato fruit on coumaphos 被引量:2
19
作者 Jie-hong ZHAO De-gang ZHAO 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2009年第2期142-146,共5页
We constructed an expression cassette of the organophosphorus pesticide degrading (opal) gene under the control of the E8 promoter. Then opd was transformed into tomato fruit using an agroinfiltration transient expr... We constructed an expression cassette of the organophosphorus pesticide degrading (opal) gene under the control of the E8 promoter. Then opd was transformed into tomato fruit using an agroinfiltration transient expression system. β-Glucuronidase (GUS) staining, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), wavelength scanning, and fluorescent reaction were performed to examine the expression of the opd gene and the hydrolysis activity on coumaphos of organo- phosphorus hydrolase (OPH) in tomato fruit. The results show that the agroinfiltrated tomato fruit-expressed OPH had the maximum hydrolysis activity of about 11.59 Uhng total soluble protein. These results will allow us to focus on breeding transgenic plants that could not only enhance the degrading capability of fruit and but also hold no negative effects on pest control when spraying organophosphorus pesticides onto the seedlings in fields. 展开更多
关键词 BIOREMEDIATION E8 promoter Organophosphorus hydrolase (OPH) Transient expression
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