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犬细小病毒新乡株的分离鉴定及其VP2基因的序列分析
1
作者 徐彦召 申月华 +5 位作者 董亚楠 钟秋月 宋会帅 谈晓梅 安志兴 王青 《广东农业科学》 CAS 2023年第10期174-180,共7页
【目的】探究河南省新乡地区犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)的流行和遗传变异进化情况,为有效防控区域性CPV流行提供参考。【方法】对从新乡地区宠物医院收集的23份疑似患犬细小病毒病的病犬粪便样品和眼、鼻、口、肛拭子预处理后进... 【目的】探究河南省新乡地区犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)的流行和遗传变异进化情况,为有效防控区域性CPV流行提供参考。【方法】对从新乡地区宠物医院收集的23份疑似患犬细小病毒病的病犬粪便样品和眼、鼻、口、肛拭子预处理后进行PCR检测。将PCR检测结果为阳性的样品采用浸泡、过滤除菌处理后接种于单层猫肾细胞CRFK进行病毒增殖培养,将分离的病毒置于透射电子显微镜下观察。参考GenBank中已收录的国内外CPV不同亚型的毒株序列,经PCR分段扩增、测序后拼接获得病毒全长基因,利用分子生物学软件对病毒基因进行序列分析和氨基酸序列同源性分析。【结果】从送检的样品中成功分离出1株CPV,命名为XX-2022株。该病毒株能使CRFK细胞产生明显病变,导致细胞出现变圆、拉网和脱落。通过透射电镜可观察到典型的病毒粒子,呈圆形或六边形,直径约25 nm,无囊膜。通过PCR分段扩增拼接后获得的病毒全基因组序列全为长4588 bp,CPV系统进化分析结果显示,XX-2022株与Canine/SH/1/2019(MN840830.1)株的亲缘关系较近。利用MegAlign软件对XX-2022株VP2基因推导的氨基酸序列进行分析,该毒株与YANJI-5(MW715601)的VP2氨基酸序列在同一小分支,氨基酸同源性为99.7%。根据CPV的基因分型原则,最终确定XX-2022株CPV属于CPV-2a型。【结论】从临床病料中成功分离出1株CPV,经分析确定为CPV-2a型,研究结果可为新乡地区CPV的流行病学、致病性及生物学特性研究提供依据,为CPV的区域流行及有效防控提供参考,为新疫苗的研发提供地方种毒。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离鉴定 透射电镜 全基因序列扩增 遗传进化分析
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线粒体DNA高变区hν1快速测序方法及应用 被引量：1
2
作者 童大跃 伍新尧 +2 位作者 蔡贵庆 李建金 刘秋玲 《生物技术通讯》 CAS 2003年第4期300-301,共2页
本研究目的是使线粒体DNAhv1区的测序更加简单、快速和准确,以利于法医学检案。将线粒体DNAhv1高变区分别用三对重叠的引物进行全序列扩增,对这三对引物的扩增产物进行测序分析。用经过大量实验反复摸索得到的稳定的实验条件,对已确定... 本研究目的是使线粒体DNAhv1区的测序更加简单、快速和准确,以利于法医学检案。将线粒体DNAhv1高变区分别用三对重叠的引物进行全序列扩增,对这三对引物的扩增产物进行测序分析。用经过大量实验反复摸索得到的稳定的实验条件,对已确定为同一母亲所生的兄弟二人的样品进行分析,结果完全一样;对待确定姐弟关系的样品进行分析,结果是认定的;操作时间较原方法缩短一半。结果表明该方法是可替代原法的快速测序法。 展开更多
关键词 线粒体DNA 高变区 测序方法 全序列扩增
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