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人羊水来源干细胞的体外培养及其生物学性状分析 被引量：1
1
作者 李保伟 刘慧 +5 位作者 刘大庆 吕洋 陈琳 岳文 李艳华 裴雪涛 《生物技术通讯》 CAS 2010年第5期655-659,665,共6页
目的:体外分离培养人羊水来源干细胞(hAFSC),观察分析其基本的生物学性状。方法:取孕中期产前诊断所抽取的羊水,离心收集细胞,然后贴壁培养获得hAFSC。在细胞培养的基础上,观察hAFSC的形态;研究其增殖能力;用流式细胞术测定细胞周期及... 目的:体外分离培养人羊水来源干细胞(hAFSC),观察分析其基本的生物学性状。方法:取孕中期产前诊断所抽取的羊水,离心收集细胞,然后贴壁培养获得hAFSC。在细胞培养的基础上,观察hAFSC的形态;研究其增殖能力;用流式细胞术测定细胞周期及不同代次细胞表面阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)表达率的变化;利用RT-PCR方法检测细胞干性基因的表达;利用诱导培养基诱导,检测其向肝样细胞与成骨细胞分化的潜能。结果:在体外培养条件下,hAFSC表现为成纤维细胞形态;具有良好的增殖能力,群体倍增时间约为36 h;细胞周期检测G0/G1期细胞约占86.7%,S+G2/M期细胞约占13.3%;流式细胞术检测结果表明,hAFSC表达SSEA-4,且SSEA-4阳性率随传代次数呈现先上升后下降的趋势;hAFSC在mRNA水平上表达Nanog、Oct4和Rex1等胚胎干细胞标志性基因;经诱导培养基诱导后,hAFSC可以向肝样细胞与成骨细胞分化。结论:hAFSC是一群呈成纤维细胞样,有良好增殖能力,且具有多向分化潜能的细胞,加之其来源方便,伦理学限制较少,因此在细胞治疗及组织工程等方面有着广泛的应用前景。 展开更多
关键词 人羊水来源干细胞 细胞培养 多潜能性
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人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究
2
作者 马晓荣 张胜利 +4 位作者 尚亚峰 高同斌 王雪 陈方 周君梅 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期842-847,共6页
目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第... 目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因。取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组。细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察。结果原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞。RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因。细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin。术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达。结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程。 展开更多
关键词 人羊水来源干细胞 细胞治疗 骨骼肌损伤 小鼠
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人羊水来源干细胞与骨髓间充质干细胞的对比研究 被引量：1
3
作者 王泽莹 张成龙 +3 位作者 沈洪洲 司家文 史俊 沈国芳 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第6期1184-1192,共9页
该研究对比人羊水来源干细胞(human amniotic fluid derived stem cells,hAFSCs)和人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)的细胞表型及成骨分化能力。分离培养hAFSCs和hBMSCs,通过光镜观察,CCK-8检测,... 该研究对比人羊水来源干细胞(human amniotic fluid derived stem cells,hAFSCs)和人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)的细胞表型及成骨分化能力。分离培养hAFSCs和hBMSCs,通过光镜观察,CCK-8检测,流式细胞术,基因芯片等方法对比两组细胞表型,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,茜素红(alizarin red S,ARS)染色,Real-time PCR,细胞免疫荧光等方法对比两组细胞体外成骨分化过程,再进一步通过裸鼠异位成骨来初步检测两种细胞体内成骨能力。结果显示,hAFSCs与hBMSCs在镜下均表现为梭形,且具有相似的增殖能力,都表达CD90和CD105,成骨诱导下两种细胞ALP活性及矿化结节均随着时间增加,同时成骨标志物RUNX2、OSX、COL I、ALP、OPN的mRNA水平也增高。基因芯片分析表明,两者在细胞黏附以及炎症反应方面的基因表达存在差异。类似地,体内裸鼠异位成骨结果也表明,hAFSCs与hBMSCs具有相近的成骨分化潜能。总之,人羊水来源干细胞与人骨髓间充质干细胞具有相似的细胞形态及增殖能力,均能在体内外成骨诱导分化环境下展现出良好的成骨功能。 展开更多
关键词 人羊水来源干细胞 人骨髓间充质干细胞 细胞表型 成骨分化
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Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的研究 被引量：6
4
作者 张胜利 范应中 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1323-1328,共6页
目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell... 目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell小室联合共培养肝细胞诱导其向肝样细胞分化,观察诱导后细胞形态的变化,利用细胞免疫荧光检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和细胞角蛋白-18（CK-18）在诱导后细胞中的表达,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝细胞相关基因的表达.结果 利用克隆杯分离出的人羊水克隆样细胞来源干细胞CD44和CD90表达阳性,CD10、CD14、CD34、CD45和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）表达阴性.诱导2～4周后,肝样细胞出现,检测证实这些细胞表达AFP、ALB、CK-18、GATA结合蛋白-4（GATA4）、肝细胞核因子（HNF）-1α和细胞色素20A（CYP20A）等肝细胞相关标志和基因.结论 Transwell 3-D联合共培养可以促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化. 展开更多
关键词 人羊水克隆样细胞来源干细胞 TRANSWELL 3-D联合共培养 肝样细胞
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人羊水来源c-kit^+间充质干细胞的生物学特征和心肌诱导分化 被引量：1
5
作者 白静 王一茹 +2 位作者 刘丽凤 陈杰 王禹 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期152-157,共6页
目的探讨人羊水来源c-kit^+间充质干细胞(c-kit^+human amniotic fluid-derived mesenchymal stemcells,c-kit^+HAFMSCs)的生物学特征及心肌诱导分化能力。方法通过产前诊断或自愿引产获取50份孕中期羊水标本,经流式细胞仪分选c-kit^+HA... 目的探讨人羊水来源c-kit^+间充质干细胞(c-kit^+human amniotic fluid-derived mesenchymal stemcells,c-kit^+HAFMSCs)的生物学特征及心肌诱导分化能力。方法通过产前诊断或自愿引产获取50份孕中期羊水标本,经流式细胞仪分选c-kit^+HAFMSCs,MTT法观察细胞增殖情况,并通过流式细胞仪、细胞免疫化学染色观察行细胞表型鉴定。在体外经成骨及成脂诱导分化,于诱导培养后21 d采用yon Kossa染色观察钙沉积颗粒,油红O染色观察脂滴形成情况。实时荧光定量PCR检测细胞经5氮-2'脱氧胞苷心肌诱导前后,NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4种心肌特异性基因表达情况。结果经流式细胞仪分选,人孕中期羊水中c-kit^+HAFMSCs含量约为贴壁细胞的3.07%±1.03%;体外增殖迅速,表达MSCs表面标志CD29、CD44、CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞表面标志CD34、CD45;农达人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-ABC,不表达HLA-DR。细胞免疫化学染色示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、Oct-4染色呈阳性,CD34、CD45染色呈阴性。MTT检测示第5、10、15代c-kit^+HAFMSCs具有相似的生长曲线。成骨和成脂诱导培养后21 d,细胞内有钙盐沉积和脂滴形成。实时荧光定量PCR检测示,心肌诱导后14 d,NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4种心肌特异性基因表达均较诱导前明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过流式细胞仪分选的c-kit^+HAFMSCs在体外可以诱导分化为心肌样细胞,可能成为心肌再生性治疗的种子细胞。 展开更多
关键词 人羊水来源c-kit^+间充质干细胞 心肌细胞分化 心肌再生性治疗 生物学特征
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人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤动物模型细胞治疗的研究 被引量：1
6
作者 张胜利 范应中 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期1336-1338,共3页
目的 探讨人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤大鼠模型细胞治疗的可能性.方法 羊水标本来自怀孕16~22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得.利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培... 目的 探讨人羊水克隆样细胞来源干细胞用于侧脑室损伤大鼠模型细胞治疗的可能性.方法 羊水标本来自怀孕16~22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得.利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增.制作脑室损伤大鼠模型,设立正常对照组、实验对照组、实验组、空白对照组.第3代人羊水克隆样细胞来源干细胞注入脑室损伤模型大鼠脑室内,选取合适的时间点对模型鼠的生长发育指标（体重、脑重、张耳时间、长毛时间）、感觉运动功能（足测试、姿势反射、肢体位置）进行观察测试.并运用SNK法对各组结果均数进行两两比较,判断有无差异.利用Western blot技术检测模型鼠脑组织内人相关Nestin 的表达.结果 各组模型鼠体重、脑重无明显差异,实验组、实验对照组和空白对照组鼠崽之间长毛时间无明显差异,但此3组跟正常对照组差异有统计学意义.实验对照组和空白对照组运动功能测试各项指标与正常对照组和实验组差异均有统计学意义,实验组各项指标与正常对照组接近.Western blot检测表明,hAFCSCs移植5d后,就可以检测出人相关蛋白的表达.结论 人羊水克隆样细胞来源干细胞移植入侧脑室损伤模型鼠体内可以改善模型鼠的生长发育和感觉运动功能. 展开更多
关键词 人羊水克隆样细胞来源干细胞 侧脑室损伤 动物模型 细胞治疗
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