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可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备 被引量：11
1
作者 杨兵 何金生 +7 位作者 石长信 张梅 虞结梅 谢灿 陆燕燕 付远辉 彭向雷 洪涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期682-685,共4页
构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV... 构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,PmeⅠ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法。 展开更多
关键词 辅助病毒依赖型腺病毒载体 人呼吸道合胞病毒融合蛋白 逆转录聚合酶链式反应 免疫印迹
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人呼吸道合胞病毒融合蛋白(F)片段原核表达、纯化和鉴定 被引量：1
2
作者 朱传凤 陈汉泉 +1 位作者 余黎 周旭 《微生物学免疫学进展》 2012年第1期15-19,共5页
目的克隆并表达人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株的融合蛋白(F)基因片段。方法利用PCR技术扩增HRSV兰州株的融合蛋白基因片段,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌(Rosetta),经IPTG诱导表达,镍... 目的克隆并表达人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株的融合蛋白(F)基因片段。方法利用PCR技术扩增HRSV兰州株的融合蛋白基因片段,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌(Rosetta),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达及其反应原性。结果 PCR扩增得到951 bp的DNA片段,重组质粒pET42b-F经酶切鉴定和测序分析,表明质粒构建正确。表达的重组蛋白的相对分子质量为68 710,表达的重组蛋白占总菌体蛋白的7%,纯化后蛋白纯度达80%。经Western-blot分析,重组蛋白与抗RSV的单抗呈专一性强阳性反应。结论成功构建了HRSV兰州株F基因片段原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta中获得了表达,表达的重组蛋白具有反应原性和特异性,为HRSV感染引起的疾病血清学诊断以及试剂盒的研发提供了材料。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 兰州株 融合蛋白(F) 表达
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呼吸道合胞病毒F蛋白不同表位中和抗体联合使用初探
3
作者 范文超 高崧钛 +2 位作者 龚睿 曾驰 刘春兰 《武汉轻工大学学报》 2025年第2期43-46,I0002,I0003,47-49,共9页
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和儿童急性下呼吸道感染的主要病原体之一,严重时会造成死亡,对人类和社会危害极大。本研究旨在探讨针对RSV融合蛋白(F蛋白)的不同表位中和抗体联合使用对RSV的抑制效果,... 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和儿童急性下呼吸道感染的主要病原体之一,严重时会造成死亡,对人类和社会危害极大。本研究旨在探讨针对RSV融合蛋白(F蛋白)的不同表位中和抗体联合使用对RSV的抑制效果,并采用棋盘法进行联合用药实验,分析各抗体组合对病毒的抑制作用。实验结果表明,所有抗体组合的抑制效果均可通过MacSynergy graphs和ZIP分析方法进行评估。不同表位的抗体联合使用时,增强了抗体的抗病毒效果,经数据分析为叠加效应,未发现明显的拮抗或协同效应。本研究为抗体联合使用治疗RSV感染的策略提供了初步数据支持,为优化RSV的治疗方案提供了参考。未来的研究应进一步深入探讨这些抗体及其联合在RSV实际感染模型中的表现,以期获得最佳的临床效果。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 中和抗体 联合使用
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血清CysLTs、KL-6、S100A2水平与呼吸道合胞病毒感染患儿病情严重程度的相关性分析
4
作者 刘晶 杨英 《国际检验医学杂志》 2025年第4期506-509,共4页
目的探讨血清半胱氨酰白三烯(CysLTs)、涎液化糖链抗原6(KL-6)、S100钙结合蛋白A2(S100A2)水平与呼吸道合胞病毒(RSV)感染患儿病情严重程度的相关性。方法选取2020年11月至2023年11月该院收治的RSV感染患儿124例作为RSV组,另选择该院同... 目的探讨血清半胱氨酰白三烯(CysLTs)、涎液化糖链抗原6(KL-6)、S100钙结合蛋白A2(S100A2)水平与呼吸道合胞病毒(RSV)感染患儿病情严重程度的相关性。方法选取2020年11月至2023年11月该院收治的RSV感染患儿124例作为RSV组,另选择该院同期体检健康儿童124例为对照组。血清CysLTs、KL-6、S100A2表达水平采用酶联免疫吸附试验测定;血清CysLTs、KL-6、S100A2水平与RSV感染患儿严重程度的相关性采用Spearman相关性分析;采用多因素Logistic回归分析影响RSV感染患儿病情严重程度的因素。结果与对照组比较,RSV组血清CysLTs、KL-6、S100A2水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组比较,中度组、重度组血清CysLTs、KL-6、S100A2水平依次显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。RSV感染患儿血清CysLTs、KL-6、S100A2与病情严重程度呈正相关(r s=0.529、0.657、0.684,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清CysLTs、KL-6、S100A2是影响RSV感染患儿病情严重程度的危险因素(P<0.05)。结论RSV感染患儿血清CysLTs、KL-6、S100A2水平显著升高,与病情严重程度密切相关。 展开更多
关键词 半胱氨酰白三烯 涎液化糖链抗原6 S100钙结合蛋白A2 呼吸道合胞病毒
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呼吸道合胞病毒及其疫苗研究进展
5
作者 张泰然 王汀 《中国药剂学杂志(网络版)》 2025年第1期36-43,共8页
目的介绍呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)及其疫苗的最新研究现状。方法通过查阅相关文献,总结并阐述呼吸道合胞病毒的感染性及其各类疫苗的研究状况。结果目前已经发展了减毒活疫苗、病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗、核... 目的介绍呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)及其疫苗的最新研究现状。方法通过查阅相关文献,总结并阐述呼吸道合胞病毒的感染性及其各类疫苗的研究状况。结果目前已经发展了减毒活疫苗、病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗、核酸疫苗等不同类型,其中Arexvy和Abrysvo亚单位疫苗已经在美国批准上市。结论呼吸道合胞病毒疫苗研究已经取得了突破性的进展,已经有产品进入市场,为应对RSV对人类健康造成的威胁提供了有力手段。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 减毒活疫苗 病毒载体疫苗 重组蛋白疫苗 核酸疫苗
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牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的生物学功能 被引量：1
6
作者 郭雪莲 李永琴 +5 位作者 李瑞乾 李昊 靳双媛 王雪妍 杜家伟 许立华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1478-1487,共10页
牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F蛋白)是BRSV... 牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F蛋白)是BRSV表面主要的包膜糖蛋白,参与病毒吸附、融合宿主细胞的过程。G和F蛋白含多种识别表位,能够刺激机体产生中和抗体反应,常常是牛呼吸道合胞体病(bovine respiratory syncytial disease, BRSD)疫苗开发所关注的重点。探究G和F蛋白在BRSV侵染中的作用机理对于病毒致病机理分析、疫苗开发具有重要意义。本文旨在对牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的结构功能及有关疫苗的开发加以综述,以期为BRSV疫苗的研制和BRSD的防控提供参考。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) 牛呼吸道合胞体病(BRSD) 附着蛋白(G蛋白) 融合蛋白(F蛋白) 疫苗
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呼吸道合胞病毒融合蛋白F在重组杆状病毒表达系统中的表达及抗原性研究 被引量：2
7
作者 王善辉 余兵兵 +1 位作者 王希良 李培锋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期267-270,274,共5页
目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,... 目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含F基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫Balb/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT试验检测T淋巴细胞增殖。结果目的蛋白F在昆虫细胞中有特异性表达,能被F蛋白单克隆抗体所识别,该蛋白诱导了高滴度的RSV特异性抗体。结论成功克隆RSVF基因,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究开发RSV重组亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 重组杆状病毒 融合蛋白F
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穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒G蛋白片段G1及CTL表位融合蛋白的表达及纯化
8
作者 张竞 龚伟 +1 位作者 梅兴国 阎浩林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第11期951-953,共3页
目的在大肠杆菌中表达含穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段G1及CTL表位的融合蛋白,并进行纯化。方法以质粒pET-G1F/M2为模板,扩增含TAT、RSVG蛋白片段G1和CTL表位F/M2的融合基因片段,与原核表达质粒pET-His连接,构建融合表... 目的在大肠杆菌中表达含穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段G1及CTL表位的融合蛋白,并进行纯化。方法以质粒pET-G1F/M2为模板,扩增含TAT、RSVG蛋白片段G1和CTL表位F/M2的融合基因片段,与原核表达质粒pET-His连接,构建融合表达质粒pET-TAT-G1F/M2,转化E.coli BL21(DE3)plysS进行诱导表达,采用Ni2+螯合亲和层析法纯化经尿素变性的包涵体,梯度透析复性纯化的目的蛋白,并进行Westernblot鉴定。结果在E.coli中可高效表达重组蛋白TAT-G1F/M2,表达量占菌体总蛋白的30%以上,目的蛋白主要存在于包涵体中。经变性、纯化、复性可获得高纯度(>95%)特异性的TAT-G1F/M2蛋白。结论已在大肠杆菌中成功表达了融合蛋白TAT-G1F/M2,为进一步进行RSV体内体外免疫学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 G蛋白 CTL表位 穿膜肽 融合蛋白 表达 纯化
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血清C反应蛋白、淀粉样蛋白A及免疫球蛋白M联合检测对呼吸道合胞病毒感染严重程度的诊断效果
9
作者 石明娟 《医学理论与实践》 2024年第8期1381-1383,共3页
目的:探究血清C反应蛋白(CRP)、淀粉样蛋白A(SAA)及免疫球蛋白M(IgM)联合检测对呼吸道合胞病毒(RSV)感染严重程度的应用效果。方法:选取我院于2020年1月—2023年4月收治的110例呼吸道合胞病毒感染患儿作为观察组,并选取同时期110例健康... 目的:探究血清C反应蛋白(CRP)、淀粉样蛋白A(SAA)及免疫球蛋白M(IgM)联合检测对呼吸道合胞病毒(RSV)感染严重程度的应用效果。方法:选取我院于2020年1月—2023年4月收治的110例呼吸道合胞病毒感染患儿作为观察组,并选取同时期110例健康体检者作为对照组。根据《毛细支气管炎诊断、治疗与预防专家共识》判断病情严重程度,将观察组分为轻型(n=38)、中型(n=30)、重型(n=42),比较各组之间CRP、SAA及IgM水平,并将病情程度与CRP、SAA及IgM水平作Pearson相关性分析。绘制曲线下面积分析单独检测和联合检测的应用价值。结果:观察组CRP、SAA及IgM水平显著高于对照组(P<0.05);重型组CRP、SAA及IgM水平显著高于中型组,中型组CRP、SAA及IgM水平显著高于轻型组(P<0.05);CRP、SAA及IgM水平与呼吸道合胞病毒感染病情程度呈正相关性(r=0.652、0.489、0.258,P<0.05),IgM、SAA、CRP联合检测曲线下面积显著大于单独检测,敏感度和特异度分别为94.0%和82.0%。结论:针对呼吸道合胞病毒感染患儿,给予CRP、SAA及IgM联合检测可提高诊断效能,CRP、SAA及IgM水平越高表示患儿病情越严重。 展开更多
关键词 C反应蛋白 淀粉样蛋白A 免疫球蛋白 呼吸道合胞病毒 感染
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呼吸道合胞病毒融合蛋白(F蛋白)结构及中和表位的研究进展 被引量：7
10
作者 曹健力 张伟 +1 位作者 夏宁邵 郑子峥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1569-1574,共6页
呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）,是造成全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一,2岁前的幼儿几乎全部感染过RSV[1],造成肺炎及毛细支气管炎等呼吸道疾病[2]。0~2个月的婴儿在感染RSV后易出现严重的病症[3]... 呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）,是造成全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一,2岁前的幼儿几乎全部感染过RSV[1],造成肺炎及毛细支气管炎等呼吸道疾病[2]。0~2个月的婴儿在感染RSV后易出现严重的病症[3]。而在最新的全球疾病死亡率分析中,1月到1周岁的儿童死亡中约有6.7%是由RSV感染造成的[4]。青壮年人群感染后病症较轻,但在老年人群中会出现严重病症及死亡病例[5]。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 病毒融合蛋白 中和表位 F蛋白 下呼吸道感染 呼吸道疾病 RSV感染 结构
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基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用 被引量：6
11
作者 王磊 常继涛 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1126-1130,1158,共6页
为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗... 为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗牛Ig G-HRP的稀释度为1:8000,抗体阴阳性临界值为0.204。特异性试验结果显示,该ELISA方法与阿卡斑病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、蓝舌病病毒(BTV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,当BRSV阳性血清稀释倍数达1∶6400时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA组内、组间最大变异系数分别为6.80%和8.80%,表明该方法的重复性良好。对195份临床牛血清样品检测结果显示,BRSV抗体阳性率为61.0%;对其中的143份血清同时进行病毒中和试验检测,结果显示二者符合率为89.5%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于牛群中BRSV抗体的检测,为BRSV的血清流行病学调查提供可靠的技术手段。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 融合前的F蛋白 间接ELISA 抗体检测
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表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建
12
作者 马亚林 柴鹏弟 +4 位作者 王金冬 毛彤瑶 张鹏 李慧莹 段招军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期515-522,共8页
目的筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus,rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础。方法在真核表... 目的筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus,rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础。方法在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列,利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体;通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增,经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒;应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象。结果通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M)。将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化,病毒滴度分别达到2.016×10^(10),2.52×10^(10)和2.948×10^(11)IU/mL。pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M感染HEK293后均能高效表达HRSV融合前构象的F蛋白并维持三聚体结构,且pAd5-SC-5M感染细胞中F蛋白表达量高于pAd5-SC-3M。结论成功在体外传代细胞中获得可高效表达A型HRSV融合前F蛋白的重组人5型腺病毒,为进一步通过动物试验评价该HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 人5型腺病毒载体 人呼吸道合胞病毒 融合前F蛋白 HEK293细胞
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呼吸道合胞病毒F蛋白表位与Balb／c小鼠血清白蛋白融合表达及其纯化
13
作者 余兵兵 周朋 +2 位作者 王善辉 王希良 于三科 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期36-38,共3页
为了更深入的研究呼吸道合胞病毒F蛋白优势表位的抗原性，采用生物信息学技术，预测呼吸道合胞病毒F蛋白的抗原表位，选取F205-223与F255-278两个小片段表位作为候选研究对象，构建了编码F蛋白两个表住与Balb／c小鼠白蛋白结构域I的融... 为了更深入的研究呼吸道合胞病毒F蛋白优势表位的抗原性，采用生物信息学技术，预测呼吸道合胞病毒F蛋白的抗原表位，选取F205-223与F255-278两个小片段表位作为候选研究对象，构建了编码F蛋白两个表住与Balb／c小鼠白蛋白结构域I的融合基因，并在大肠埃希菌BL21（DE3）中融合表达，表达蛋白采用金属亲和层析法纯化，Western blot检测。结果显示，通过大肠埃希菌原核表达的融合蛋白以包涵体的形式表达，采用尿素变性，亲和层析法纯化后可以获得高纯度的融合蛋白。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 F蛋白表位 Balb/c小鼠血清白蛋白
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呼吸道合胞病毒融合蛋白第168～289氨基酸片段的表达与纯化
14
作者 单志娟 项金忠 宋克征 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第10期2033-2035,共3页
目的：利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达RSV融合蛋白中主要抗原性区域的片段（第168～289氨基酸）并纯化重组蛋白。方法：在人胚肺二倍体细胞2BS株上培养RSV Long株,从培养物中提取病毒总核酸。采用RT-PCR法从RSV基因组RNA中扩增出F基... 目的：利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达RSV融合蛋白中主要抗原性区域的片段（第168～289氨基酸）并纯化重组蛋白。方法：在人胚肺二倍体细胞2BS株上培养RSV Long株,从培养物中提取病毒总核酸。采用RT-PCR法从RSV基因组RNA中扩增出F基因546-881 bp片段（F′）,F′插入到转移载体质粒pBacPAK9中再与线性杆状病毒BacPAK6 DNA（Bsu36I digested）共转染Sf9昆虫细胞。重组蛋白经镍离子柱螯合亲和层析纯化。经SDS-PAGE和West-ern-Blot鉴定重组蛋白。结果：外源基因在昆虫细胞中获得了表达,并通过其所带的信号肽分泌到了无血清培养基中。表达产物的分子量约为15×10^3,与理论值相符。结论：成功地用昆虫细胞表达系统表达了能分泌到培养基中的呼吸道合胞病毒F基因546-881 bp片段编码的融合蛋白第168～289氨基酸片段。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 杆状病毒
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HMGB1对呼吸道合胞病毒毛细支气管炎合并肾脏受累型过敏性紫癜患儿单核细胞免疫功能的影响 被引量：1
15
作者 王银洁 蔡花 +3 位作者 张菂 黄翠影 陈瑞珊 王彩芳 《蚌埠医学院学报》 CAS 2024年第6期758-762,共5页
目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎合并肾脏受累型过敏性紫癜(HSP)患儿单核细胞免疫功能的影响。方法:选择初诊为RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿30例作为观察组,选取同期进行体检的健康足月婴幼... 目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎合并肾脏受累型过敏性紫癜(HSP)患儿单核细胞免疫功能的影响。方法:选择初诊为RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿30例作为观察组,选取同期进行体检的健康足月婴幼儿30名作为对照组,2组婴幼儿入院后采集血浆样本,进行常规血细胞分析和C反应蛋白(CRP)水平检测,并采用ELISA法检测2组婴幼儿血浆中HMGB1的表达水平。采用人重组RSV-A2病毒转染人支气管上皮细胞系16HBE,并收集细胞培养上清检测HMGB1。使用经孔板共培养RSV感染细胞、无感染组的人支气管上皮细胞系16HBE和单核细胞THP1,qRT-PCR法测定细胞总RNA,采用Western blotting检测单核细胞中Toll样受体TLR-4和TLR-7的水平。结果:RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿外周血较健康对照组较健康对照组中HMGB1的表达水平升高(t=5.84,P<0.05),且外周血单核细胞数量、外周淋巴细胞数量及CRP水平与RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿外周血中HMGB1表达水平呈正相关关系(r=0.606、0.301、0.394,P<0.05),其中外周血单核细胞数量与外周血中HMGB1表达水平相关性最显著(P<0.05)。经qRT-PCR检测,经病毒转染后的16HBE细胞培养基中HMGB1的表达相较对照组显著增加(t=5.41,P<0.05)。RSV转染的16HBE细胞、感染对照组、HMGB1抑制组分别与单核细胞THP-1进行共培养后,经Western blotting检测单核细胞中TLR-4和TLR-7蛋白的表达水平,结果显示THP-1细胞中TLR-4的表达水平增加(P<0.05),而TLR-7水平无显著变化(P>0.05)。结论:HMGB1的表达水平与儿童RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP病情的发展有关,HMGB1在单核细胞介导的免疫性炎症中起着重要作用,对掌握儿童RSV毛细支气管炎的发病机制具有重要意义。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒毛细支气管炎 过敏性紫癜 高迁移率族蛋白1 单核细胞 免疫功能
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牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用 被引量：13
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作者 王红 余丽芸 +2 位作者 侯喜林 朴范泽 翟延庆 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期4303-4309,共7页
【目的】以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法。【方法】将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白。利用电洗脱法对表达产物进... 【目的】以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法。【方法】将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白。利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法。【结果】成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应。与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%。采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江、佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病。这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 重组N蛋白 间接ELISA 初步应用
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北京等四地区呼吸道合胞病毒分离株G蛋白基因的比较分析 被引量：9
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作者 耿学辉 王之梁 +7 位作者 钱渊 朱汝南 邓洁 刘成贵 常汝虚 谢建屏 刘长清 朱宗涵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期36-42,共7页
为了解我国不同地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染特征是否与基因变异有关，对北京、广州、长春和河北四个地区不同流行特征中分离的ＲＳＶ毒株（Ａ亚型）的Ｇ蛋白基因进行了序列分析。结果表明，该Ｇ蛋白基因同国外Ａ亚型原型株（Ａ２... 为了解我国不同地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染特征是否与基因变异有关，对北京、广州、长春和河北四个地区不同流行特征中分离的ＲＳＶ毒株（Ａ亚型）的Ｇ蛋白基因进行了序列分析。结果表明，该Ｇ蛋白基因同国外Ａ亚型原型株（Ａ２株）间存在显著差异，Ａ２株同分离株间的核苷酸同源性为９２．７％～９３．６％，氨基酸同源性只有８８．３％～８９．９％。分离株间的核苷酸同源性为９６．０％～９８．９％，氨基酸同源性９２．６％～９７．７％。氨基酸变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端，而胞内区和跨膜区相对保守。同Ａ２株比较，我国ＲＳＶ分离株间氨基酸的变异位点和变异形式很近似。结果提示，由于我国ＲＳＶ分离株Ｇ蛋白基因同国外原型株间存在明显差异，因此在研制我国ＲＳＶ疫苗时可考虑采用我国的ＲＳＶ分离株；我国ＲＳＶ的不同流行特征可能并非由于ＲＳＶＧ蛋白的变异所致。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 G蛋白 核苷酸序列 RSV
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呼吸道合胞病毒北京地区分离株G蛋白的基因分析 被引量：10
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作者 耿学辉 王之梁 +4 位作者 钱渊 朱汝南 邓洁 杜金林 朱宗涵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期317-322,共6页
从经单克隆抗体证实为Ａ亚型的北京地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）分离株Ｂ７９中，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出编码Ｇ蛋白的基因片段，克隆至载体ｐＴＺ１８Ｒ中。经核苷酸序列测定证明，我国北京地区分离的Ａ亚型株Ｂ７９与ＲＳＶＡ亚型原型... 从经单克隆抗体证实为Ａ亚型的北京地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）分离株Ｂ７９中，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出编码Ｇ蛋白的基因片段，克隆至载体ｐＴＺ１８Ｒ中。经核苷酸序列测定证明，我国北京地区分离的Ａ亚型株Ｂ７９与ＲＳＶＡ亚型原型株（Ａ２株）Ｇ蛋白基因的核苷酸同源性为９３．８％，核苷酸的有义突变率达６５％。由核苷酸推导出氨基酸序列的同源性为８９．６％。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端，而胞内区和跨膜区相对保守。本文探讨了我国北京地区ＲＳＶ分离株的Ｇ蛋白基因同原型株之间的变异，在疫苗研制中的意义。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 G蛋白 基因分析
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基于聚合物结构的佐剂配伍呼吸道合胞病毒融合蛋白可诱导巨噬细胞产生多种信号传导途径 被引量：2
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作者 刘宇阳(摘) 陈勇(校) 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期8-8,共1页
呼吸道合胞病毒(RSV)在婴儿、老年人和免疫功能低下的人群中会引起急性呼吸道感染。目前没有针对RSV的许可疫苗上市销售。作者以前曾报道过,用RSV候选疫苗(ΔF/TriAdj)对啮齿动物和羔羊进行鼻内免疫可诱导产生具有良好安全性的保护性免... 呼吸道合胞病毒(RSV)在婴儿、老年人和免疫功能低下的人群中会引起急性呼吸道感染。目前没有针对RSV的许可疫苗上市销售。作者以前曾报道过,用RSV候选疫苗(ΔF/TriAdj)对啮齿动物和羔羊进行鼻内免疫可诱导产生具有良好安全性的保护性免疫应答。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 信号传导途径 巨噬细胞 融合蛋白 聚合物 急性呼吸道感染 保护性免疫应答 配伍
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静注免疫球蛋白治疗呼吸道合胞病毒感染与病毒清除效应 被引量：12
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作者 王晓刚 李永柏 +3 位作者 杨锡强 刘渝 高武红 张远维 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期399-400,共2页
本文使用IVIG0.4～0.5g/kg·d共2天治疗23例RSV毛细支气管炎患儿,与对照组32例比较,发现应用IVIG后3～5天血清IgG水平升高1.91倍,RSV-SIgG升高3.22倍,呼吸道RSV抗原68小时内阴转,临床症状体征较快恢复正常。本批IVIG制品中RSV-SIgG... 本文使用IVIG0.4～0.5g/kg·d共2天治疗23例RSV毛细支气管炎患儿,与对照组32例比较,发现应用IVIG后3～5天血清IgG水平升高1.91倍,RSV-SIgG升高3.22倍,呼吸道RSV抗原68小时内阴转,临床症状体征较快恢复正常。本批IVIG制品中RSV-SIgG水平(1:640)远远高于用药前RSV感染患儿平均水平(1:116)。提示IVIG能迅速提高血清IgG水平,补充大量RSV-SIgG中和抗体,有加速呼吸道中病毒的清除效应。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 静脉注射 免疫球蛋白
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