目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PD...目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PDs。采用Western blotting检测p21、p27、Catalase、SIRT3和MnSOD的蛋白表达;免疫荧光共染方法检测各组WI-38细胞中SIRT3和MnSOD和衰老相关核异染色质灶(SAHF)的表达和定位;用荧光探针检测活性氧(ROS)的表达。结果 Western blot-ting结果显示,高糖组SIRT3、Catalase和MnSOD的表达与低糖组及正常糖组比较明显降低(P<0.05);高糖组的p21p、27的蛋白表达与正常糖组比较明显增加(P<0.05);与低糖组比较,高糖组的p21表达上调,而p27表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光共染结果显示,高糖组中的SIRT3、Catalase和MnSOD表达较其他两组明显降低(P<0.05);SIRT3和MnSOD主要存在于胞质中。荧光探针显示,高糖组中的ROS水平与低糖组和正常糖组比较明显增加。结论高糖能加速WI-38细胞的衰老过程,SIRT3可能与高糖引起的细胞衰老有着密切联系。展开更多
文摘目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PDs。采用Western blotting检测p21、p27、Catalase、SIRT3和MnSOD的蛋白表达;免疫荧光共染方法检测各组WI-38细胞中SIRT3和MnSOD和衰老相关核异染色质灶(SAHF)的表达和定位;用荧光探针检测活性氧(ROS)的表达。结果 Western blot-ting结果显示,高糖组SIRT3、Catalase和MnSOD的表达与低糖组及正常糖组比较明显降低(P<0.05);高糖组的p21p、27的蛋白表达与正常糖组比较明显增加(P<0.05);与低糖组比较,高糖组的p21表达上调,而p27表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光共染结果显示,高糖组中的SIRT3、Catalase和MnSOD表达较其他两组明显降低(P<0.05);SIRT3和MnSOD主要存在于胞质中。荧光探针显示,高糖组中的ROS水平与低糖组和正常糖组比较明显增加。结论高糖能加速WI-38细胞的衰老过程,SIRT3可能与高糖引起的细胞衰老有着密切联系。
