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1株高滴度噬斑型三型副流感病毒野毒株的分离纯化及鉴定 被引量:3
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作者 火文 关文竹 +7 位作者 王云瑾 韩平 马超 包红 寇桂英 李雄雄 巩晗博 白慕群 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1170-1177,1183,共9页
目的从临床标本中分离1株人三型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)野毒株,并进行鉴定。方法将下呼吸道感染患儿下呼吸道分泌物通过人胚肺二倍体细胞(WI-38)传代培养分离并噬斑克隆纯化病毒。二代基因测序测定病毒全... 目的从临床标本中分离1株人三型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)野毒株,并进行鉴定。方法将下呼吸道感染患儿下呼吸道分泌物通过人胚肺二倍体细胞(WI-38)传代培养分离并噬斑克隆纯化病毒。二代基因测序测定病毒全基因序列;蔗糖密度超速离心纯化病毒,电镜观察病毒大小和形态;SDS-PAGE和Western blot鉴定病毒蛋白;检测病毒在不同宿主细胞上的增殖能力和噬斑形成能力以及在体外传代的遗传稳定性和增殖稳定性。结果通过大量临床标本的传代筛选和克隆纯化,得到1株去除特定外源因子的HPIV-3野毒株HPIV3LZ17-28C19,全基因测序显示此毒株与HPIV-3基因组核苷酸序列的同源性高达99.14%;蔗糖密度超速离心纯化的毒株在电镜下可见长轴径150-300 nm的具有脂质外膜的HPIV-3病毒颗粒,含有HPIV-3的结构蛋白HN和F,在WI-38、Vero和MA104细胞中高滴度增殖,滴度在10^(7)-10^(9)copies/mL,可在Vero和MA104细胞上形成明显均一的噬斑,且在有限传代中具有遗传稳定性和增殖稳定性。结论本研究获得了1株高滴度噬斑型无特定外源因子的HPIV-3野毒株,对HPIV-3疫苗的研发以及HPIV-3感染动物模型和各种检测方法的建立具有重要意义。 展开更多
关键词 人三型副流感病毒 病毒分离 遗传特征分析 蛋白鉴定 细胞培养特性
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