目的 研究长链非编码RNA 01004(LncRNA01004)加速乳腺癌细胞恶性进展的作用及潜在调节机制。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和细胞中LncRNA01004表达水平。通过StarBase在线数据库预测LncRNA01004的结合蛋白,通过...目的 研究长链非编码RNA 01004(LncRNA01004)加速乳腺癌细胞恶性进展的作用及潜在调节机制。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和细胞中LncRNA01004表达水平。通过StarBase在线数据库预测LncRNA01004的结合蛋白,通过RNA结合蛋白免疫沉淀反应(RIP)分析进行验证。采用LncRNA01004干扰序列(sh-LncRNA01004)或过表达载体(LncRNA01004)转染MCF-7细胞,或与剪切多聚腺苷酸化特异性因子1(CPSF1)干扰序列(sh-CPSF1)共转染MCF-7细胞。CCK-8法、Transwell和流式细胞术(FCM)分别检测细胞活力、细胞侵袭和凋亡。qRT-PCR检测LncRNA01004和CPSF1过表达和沉默效率;蛋白质印迹(WB)检测CPSF1蛋白、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)],以及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白[上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)]水平;ELISA检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性。结果 与癌旁组织相比,LncRNA01004在乳腺癌组织(5.14±0.33 vs 1.02±0.03)中显著上调,差异具有统计学意义(t=-78.637,P<0.001);乳腺癌细胞中LncRNA01004表达亦明显高于正常人乳腺上皮细胞,组间差异具有统计学意义(F=142.248,P<0.001)。与Control组相比,沉默LncRNA01004显著抑制MCF-7细胞活力(42.15±2.11 vs 100.02±0.65)和侵袭(18.65%±1.44%vs 41.36%±1.57%),诱导细胞凋亡(16.58%±1.52%vs5.24%±1.12%),升高Caspase-3活性(2.93±0.71 vs 1.51±0.43)和Bax蛋白(2.74±0.39 vs 1.01±0.02)表达,抑制BcL-2蛋白(0.32±0.07 vs 1.02±0.03)表达,差异具有统计学意义(t=3.075~19.332,均P<0.05)。与Control组相比,沉默LncRNA01004显著升高E-cadherin(3.06±0.37 vs 1.01±0.02)蛋白水平,降低N-cadherin(0.44±0.11 vs 1.00±0.01),Vimentin(0.39±0.13 vs 1.02±0.03)和Snail(0.30±0.08 vs 1.01±0.03)蛋白水平,差异具有统计学意义(t=9.989~17.164,均P<0.05)。LncRNA01004与CPSF1结合并促进CPSF1蛋白表达。沉默CPSF1抑制MCF-7细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡,抵消LncRNA01004过表达对MCF-7细胞生物学功能的影响。结论 LncRNA01004可能通过上调CPSF1促进EMT,进而促进乳腺癌细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与乳腺癌的恶性进展。展开更多
文摘目的 研究长链非编码RNA 01004(LncRNA01004)加速乳腺癌细胞恶性进展的作用及潜在调节机制。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和细胞中LncRNA01004表达水平。通过StarBase在线数据库预测LncRNA01004的结合蛋白,通过RNA结合蛋白免疫沉淀反应(RIP)分析进行验证。采用LncRNA01004干扰序列(sh-LncRNA01004)或过表达载体(LncRNA01004)转染MCF-7细胞,或与剪切多聚腺苷酸化特异性因子1(CPSF1)干扰序列(sh-CPSF1)共转染MCF-7细胞。CCK-8法、Transwell和流式细胞术(FCM)分别检测细胞活力、细胞侵袭和凋亡。qRT-PCR检测LncRNA01004和CPSF1过表达和沉默效率;蛋白质印迹(WB)检测CPSF1蛋白、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)],以及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白[上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)]水平;ELISA检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性。结果 与癌旁组织相比,LncRNA01004在乳腺癌组织(5.14±0.33 vs 1.02±0.03)中显著上调,差异具有统计学意义(t=-78.637,P<0.001);乳腺癌细胞中LncRNA01004表达亦明显高于正常人乳腺上皮细胞,组间差异具有统计学意义(F=142.248,P<0.001)。与Control组相比,沉默LncRNA01004显著抑制MCF-7细胞活力(42.15±2.11 vs 100.02±0.65)和侵袭(18.65%±1.44%vs 41.36%±1.57%),诱导细胞凋亡(16.58%±1.52%vs5.24%±1.12%),升高Caspase-3活性(2.93±0.71 vs 1.51±0.43)和Bax蛋白(2.74±0.39 vs 1.01±0.02)表达,抑制BcL-2蛋白(0.32±0.07 vs 1.02±0.03)表达,差异具有统计学意义(t=3.075~19.332,均P<0.05)。与Control组相比,沉默LncRNA01004显著升高E-cadherin(3.06±0.37 vs 1.01±0.02)蛋白水平,降低N-cadherin(0.44±0.11 vs 1.00±0.01),Vimentin(0.39±0.13 vs 1.02±0.03)和Snail(0.30±0.08 vs 1.01±0.03)蛋白水平,差异具有统计学意义(t=9.989~17.164,均P<0.05)。LncRNA01004与CPSF1结合并促进CPSF1蛋白表达。沉默CPSF1抑制MCF-7细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡,抵消LncRNA01004过表达对MCF-7细胞生物学功能的影响。结论 LncRNA01004可能通过上调CPSF1促进EMT,进而促进乳腺癌细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与乳腺癌的恶性进展。
