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牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备 被引量：3
1
作者 杨立新 朱远茂 +4 位作者 周跃辉 任建乐 马磊 杨婷 薛飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第7期1-4,273,共5页
为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE... 为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光（IFA）和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明：重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDVp80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×10^5-1×10^7;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR p80蛋白 免疫印迹试验 单克隆抗体 IGM 间接免疫荧光试验
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牛BVDV C_(24)V株P80蛋白在大肠杆菌中的高效表达
2
作者 李正高 王维志 +2 位作者 姜焱 张常印 吴晓丰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期248-250,共3页
根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)P80基因序列,自行设计并合成引物,经过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从BVDV C_(24)V株细胞培养液中扩增出P80基因,大小为560bp。利用酶切方法把目的基因克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载... 根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)P80基因序列,自行设计并合成引物,经过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从BVDV C_(24)V株细胞培养液中扩增出P80基因,大小为560bp。利用酶切方法把目的基因克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载体PET32a(+)中,在大肠杆菌中得到了高效表达,这为建立ELISA方法检测BVDV抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 p80蛋白 高效表达
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牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白的间接ELISA方法的建立 被引量：8
3
作者 陈瑞红 林俊 +3 位作者 杨立新 杨木娇 朱远茂 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期252-257,共6页
为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白... 为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立了检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示,该方法与BVDV阳性血清反应呈阳性,而与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒等常见病原的阳性血清无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示本实验建立的间接ELISA方法在阳性血清11280倍稀释时检测结果仍呈阳性,而病毒中和试验结果显示该阳性血清稀释度在1512时检测结果就已为阴性,表明该方法的敏感性较高。重复性试验结果显示批内批间变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。采用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测90份牛血清,结果显示二者的符合率为95%。利用本研究建立的间接ELISA方法对188份采自国内两个不同地区的牛血清样品进行了检测,检出BVDV阳性血清162份,阳性血清检出率为86.2%。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法可用于国内BVDV的血清流行病学调查,为相关疫病的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 重组p80蛋白 间接ELISA
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p80蛋白在间变性大细胞淋巴瘤中的表达意义 被引量：1
4
作者 钟森 朱润庆 +2 位作者 柯尊富 杜兴贵 张丽 《郧阳医学院学报》 2004年第6期343-345,共3页
目的探讨p80蛋白在间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中的表达及与预后的关系。方法用SP法检测CD30、CD20、CD45RO和p80在28例ALCL中的表达情况。结果CD30全部呈强阳性表达,p80蛋白有13例呈强阳性,p80蛋白阳性病例的免疫学表型为T细胞性11例和N... 目的探讨p80蛋白在间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中的表达及与预后的关系。方法用SP法检测CD30、CD20、CD45RO和p80在28例ALCL中的表达情况。结果CD30全部呈强阳性表达,p80蛋白有13例呈强阳性,p80蛋白阳性病例的免疫学表型为T细胞性11例和Null细胞性2例,无B细胞性和T、B细胞标记均表达的病例(P<0.05)。p80蛋白与ALCL的发病年龄、AnnArbor分期均无关,而与5年生存率密切相关(P<0.01)。结论CD30和p80蛋白的检测可用于ALCL的诊断、鉴别诊断及预后的判断。 展开更多
关键词 淋巴瘤 p80蛋白 预后 免疫组织化学
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抗Y-box结合蛋白冷休克域单克隆抗体的制备及其初步应用
5
作者 颜山 孔维华 +1 位作者 顾正 左嘉客 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期120-124,共5页
固相法合成Y -box结合蛋白冷休克域部分片段“14肽”(H2 N NGYGFINRNDTKED COOH ,简称ND) ,用不同载体蛋白经戊二醛一步法偶联得到免疫抗原 (BSA ND)和检测抗原 (OVA ND) .用免疫抗原免疫BLAB c小鼠 ,经间接法ELISA检测 ,得到对ND有足... 固相法合成Y -box结合蛋白冷休克域部分片段“14肽”(H2 N NGYGFINRNDTKED COOH ,简称ND) ,用不同载体蛋白经戊二醛一步法偶联得到免疫抗原 (BSA ND)和检测抗原 (OVA ND) .用免疫抗原免疫BLAB c小鼠 ,经间接法ELISA检测 ,得到对ND有足够免疫应答的小鼠 .采用常规单克隆抗体制备的方法 ,得到 3株能稳定产生和分泌抗ND单抗的克隆细胞株 ,单抗的亚型均为IgM .WesternBlotting结果显示 :该单抗能识别中华大蟾蜍 (Bufobufogar garizans)Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的热稳定Y box结合蛋白p5 4 ,并能识别中华大蟾蜍高、低温卵中一种分子量约为 80kD的蛋白 (简称p80 ) .由于p80在低温卵中含量高于高温卵中 ,推测可能是高温卵和低温卵中差异表达的Y box结合蛋白之一 . 展开更多
关键词 Y-box结合蛋白 单克隆抗体 p54 p80 生殖细胞 成熟
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基于两个重组蛋白的牛支原体免疫胶体金抗体检测试纸条的研究 被引量：8
6
作者 周华倩 储岳峰 +4 位作者 耿尚景超 郝华芳 陈胜利 刘永生 颜新敏 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2021年第8期939-946,共8页
本研究以牛支原体(Mycoplasma bovis)重组膜蛋白P48、P80和鸡IgY抗体标记胶体金溶液,以蛋白A和蛋白G包被T线,山羊抗鸡IgY包被C线,制备检测牛支原体抗体的胶体金免疫层析试纸条。用本实验室保存的39份牛支原体感染来源血清、56份免疫来... 本研究以牛支原体(Mycoplasma bovis)重组膜蛋白P48、P80和鸡IgY抗体标记胶体金溶液,以蛋白A和蛋白G包被T线,山羊抗鸡IgY包被C线,制备检测牛支原体抗体的胶体金免疫层析试纸条。用本实验室保存的39份牛支原体感染来源血清、56份免疫来源血清以及142份临床血清对研制的试纸条进行质量评估。结果显示,该试纸条能检测出感染和免疫14 d后的牛血清中的牛支原体抗体,对感染来源血清敏感性为95.83%、特异性为93.75%,对免疫来源血清的敏感性为92.31%、特异性为93.75%,对临床血清的敏感性为90.12%、特异性为98.36%。上述结果表明,该试纸条能用于牛支原体抗体现场快速检测、群体监测和辅助诊断。 展开更多
关键词 牛支原体 P48重组蛋白 p80重组蛋白 免疫胶体金试纸条
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