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Expression of P30 gene of Toxoplasma gondii in Spodoptera frugiperda cell and Argyrogramma agnata larva
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作者 陈晓光 刘国章 +1 位作者 沈树满 王珣章 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1995年第2期83-86,92,共5页
The gene encoding the major surface antigen(P30) of Toxoplasrna gondii was cloned into a transfer plasmid vector pSXIVVI ̄+X3,then the recombinant plasmid pSXIVVI ̄+X3-P30 DNA and the parent virus TnNPV DNA were used ... The gene encoding the major surface antigen(P30) of Toxoplasrna gondii was cloned into a transfer plasmid vector pSXIVVI ̄+X3,then the recombinant plasmid pSXIVVI ̄+X3-P30 DNA and the parent virus TnNPV DNA were used to cotransfect the cultured Spodoptera f 展开更多
关键词 TOXOPLASMA GONDII p30 gene TnNPV gene EXPRESSION
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弓形虫主要表面抗原p30单价及复合基因疫苗的构建 被引量:10
2
作者 杨婷婷 何深一 +6 位作者 蒋华 古钦民 丛华 周怀瑜 张加勤 李瑛 赵群力 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期14-17,共4页
目的 构建弓形虫单价基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0及复合基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0 ROP2 ,并比较两种疫苗对小鼠的免疫保护性。 方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增编码弓形虫主要表面抗原 p3 0和弓形虫棒状体蛋... 目的 构建弓形虫单价基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0及复合基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0 ROP2 ,并比较两种疫苗对小鼠的免疫保护性。 方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增编码弓形虫主要表面抗原 p3 0和弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )的基因片段 ,经T A克隆 ,将p3 0单价基因及 p3 0 ROP2复合基因片段分别插入真核细胞表达载体pcDNA3 1,构建重组真核表达质粒 pcDNA3 1 p3 0及pcDNA3 1 p3 0 ROP2。分别免疫BALB/c小鼠 ,设磷酸缓冲盐溶液 (PBS)组、pcDNA3 1空质粒组为对照 ;酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测血清特异性IgG抗体 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。  结果 获得 pcDNA3 1 p3 0、pcDNA3 1 p3 0 ROP2重组表达质粒 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,其IgG抗体吸光度 (A490 =2 0 5 1± 0 3 3 7)高于用 pcDNA3 1 p3 0的吸光度 (A490 =1 892± 0 3 69) (P <0 0 5 )。攻击感染弓形虫后小鼠生存时间 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,较用 pcDNA3 1 p3 0的明显延长 (P <0 0 1)。  结论 弓形虫不同生活阶段的抗原复合基因疫苗较单价基因疫苗具有更好的免疫保护性。 展开更多
关键词 PCDNA3 弓形虫 小鼠 表面抗原 基因疫苗 ROP 生存时间 真核细胞表达载体 重组表达质粒 基因组DNA
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弓形虫表面抗原P22、P30复合基因在原核细胞中表达的研究 被引量:7
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作者 古钦民 王伟 +4 位作者 卞继峰 丛华 胡海燕 何深一 李瑛 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2002年第2期123-124,127,共3页
目的 :对含有P2 2、P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达 ,进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法 :用IPTG对工程菌进行诱导表达 ,表达产物行SDS PAGE蛋白凝胶电泳及Western Blot免疫印记检测。结果 :蛋白电泳结果显示 ,阳... 目的 :对含有P2 2、P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达 ,进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法 :用IPTG对工程菌进行诱导表达 ,表达产物行SDS PAGE蛋白凝胶电泳及Western Blot免疫印记检测。结果 :蛋白电泳结果显示 ,阳性重组菌比阴性菌在 6 6 .5KDa位置上明显多一条带 ,此条带可与P30抗体结合并使免疫印记显示阳性结果。结论 :含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体经诱导表达出融合蛋白 ,其内的组分蛋白P30具有与其相应抗体结合的能力。 展开更多
关键词 弓形虫 基因 p30 基因 P22 基因表达
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弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达 被引量:12
4
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 闵太善 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期27-29,共3页
目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ... 目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并以SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果  1、在我们比较的 783个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间只有两个碱基不同 ;2、得到一分子量为 5 4kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 38%。结论  1、弓形虫昆山分离株与RH株的P30基因没有大的差异 ;2、在大肠杆菌中得到了P30融合蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 p30 PCR 基因表达 克隆
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含弓形虫P30基因插入昆虫杆状病毒的研究 被引量:6
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作者 陈晓光 刘国章 江静波 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期270-273,共4页
目的:将弓形虫ZS1株主要表膜抗原(P30)基因插入到昆虫杆状病毒基因组中,为在昆虫细胞或昆虫体内表达及生产P30作准备。方法:先将P30基因亚克隆到转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,然后用此重组载体质粒DNA与... 目的:将弓形虫ZS1株主要表膜抗原(P30)基因插入到昆虫杆状病毒基因组中,为在昆虫细胞或昆虫体内表达及生产P30作准备。方法:先将P30基因亚克隆到转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,然后用此重组载体质粒DNA与亲本株病毒DNA共转染培养的草地夜蛾细胞,经空斑纯化筛选出重组病毒株。结果:已得到含P30基因的重组杆状病毒TnNPV-P30。结论:本文已将弓形虫ZS1株P30基因亚克隆到昆虫杆状病毒TnNPV中。 展开更多
关键词 弓形虫 p30基因 昆虫杆状病毒
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非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:30
6
作者 吴竞 王西西 +2 位作者 吴映彤 任肖 郭晓宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3555-3562,共8页
为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经... 为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种血清中ASFV抗体的检测方法。结果显示,ASFVp30基因成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得pET-32a-p30重组质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,得到P30重组蛋白,重组蛋白大小约为42ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,纯化后的蛋白具有良好的免疫原性;以纯化的P30重组蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了抗原最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4 000,以此建立的ASFV间接ELISA方法临界值为0.322。本方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法检测ASFV阳性血清灵敏度可达到1∶1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均<10%。本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASFV) p30基因 原核表达 重组蛋白 间接ELISA
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弓形虫P30基因在昆虫杆状病毒载体体系中的初步表达 被引量:15
7
作者 陈晓光 刘国章 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1996年第1期19-23,共5页
将弓形虫主要表面抗原(P30)基因插入转移载体质粒pSXIVVI+X3中,然后将重组质粒pSXIVVI+X3-P30DNA与粉纹夜蛾核形多角体病毒TnNPVDNA共转染培养的草地夜蛾细胞(Sf),通过同源重组和空斑纯... 将弓形虫主要表面抗原(P30)基因插入转移载体质粒pSXIVVI+X3中,然后将重组质粒pSXIVVI+X3-P30DNA与粉纹夜蛾核形多角体病毒TnNPVDNA共转染培养的草地夜蛾细胞(Sf),通过同源重组和空斑纯化,得到重组病毒TnNPV-P30.对重组病毒感染的Sf细胞及银纹夜蛾幼虫进行SDS-PAGE和Westernblot分析。结果显示:P30基因在Sf细胞及虫体中得到了表达,表达产物具有特异的免疫反应性。 展开更多
关键词 弓形体 昆虫病毒 昆虫杆状病毒 载体 基因表达
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刚地弓形虫ROP2-P30复合基因在E.coliBL21中的表达和鉴定(英文) 被引量:9
8
作者 张佃波 魏庆宽 +7 位作者 宰德富 崔勇 李瑾 高红刚 柏雪莲 赵立江 韩广东 刘克义 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期538-543,共6页
目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PC... 目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR.,双酶切和测序鉴定,将pMD ROP2中的ROP2基因片段经EcoRⅠ和HindⅢ酶切,连接等反应,亚克隆入pET30a(+)原核表达载体构建pET ROP2载体,然后再将pMD P30中的P30基因片段与经BglⅡandEcoRⅠ酶切的pET ROP2载体连接,构建pET ROP2P30载体,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Westernblot分析。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功构建成pET ROP2和pET ROP2P30载体,成功表达了弓形虫棒状体蛋白2和弓形虫棒状体蛋白与主要表面抗原1的融合复合蛋白,表达出的蛋白经纯化复性后具有免疫反应性。结论ROP2和P30基因重组后,在原核表达载体中表达出的蛋白经纯化复性后具有活性,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和ROP2P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 p30和ROP2基因 融合蛋白 WESTERN blot.
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刚地弓形虫P30(SAG1)基因的克隆与表达 被引量:9
9
作者 张佃波 公茂庆 +3 位作者 魏庆宽 李谨 黄炳成 刘克义 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第2期92-95,共4页
目的构建弓形虫P30基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法将弓形虫P30基因的开读框用PCR扩增,NcoⅠ和HindⅢ酶切后,与同样酶切的表达质粒pET30a(+)经T4连接酶连接,然后转化到DH5α中。菌液经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,将阳性... 目的构建弓形虫P30基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法将弓形虫P30基因的开读框用PCR扩增,NcoⅠ和HindⅢ酶切后,与同样酶切的表达质粒pET30a(+)经T4连接酶连接,然后转化到DH5α中。菌液经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行鉴定。结果扩增的P30基因片段为750bp,重组质粒诱导表达产物分子质量单位为30ku,与理论值相符。Westernblot确认重组质粒表达蛋白与小鼠抗弓形虫单克隆抗体(P30McAb)发生特异性反应。结论成功构建重组体并获得弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 p30基因 蛋白表达
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刚地弓形虫NT株P30基因的克隆与表达 被引量:2
10
作者 张理航 刘茂军 +4 位作者 吕芳 李贺侠 吴叙苏 冯志新 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期147-150,共4页
参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×10... 参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×104的融合蛋白,经W estern-b lotting鉴定目的蛋白具有良好的免疫学活性,为刚地弓形虫疫苗的制备及猪弓形虫抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 p30基因 克隆 表达
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弓形虫p30基因在真核系统中的表达 被引量:3
11
作者 曾方银 刘国章 +2 位作者 陈晓光 李文盛 王珣章 《第一军医大学学报》 CSCD 1998年第2期91-95,共5页
采用聚乙二醇(PEG)沉淀法纯化克隆刚地弓形虫(Toxplasmagondii)p30基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3-p30DNA;将pSXIVVI+X3-p30DNA与粉纹夜蛾核型多角体缺陷型病毒TnNPV-SVI-GDNA共转染草地夜蛾(Sfg)细胞,构建出既能形成多角... 采用聚乙二醇(PEG)沉淀法纯化克隆刚地弓形虫(Toxplasmagondii)p30基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3-p30DNA;将pSXIVVI+X3-p30DNA与粉纹夜蛾核型多角体缺陷型病毒TnNPV-SVI-GDNA共转染草地夜蛾(Sfg)细胞,构建出既能形成多角体又能表达外源基因的重组病毒TnNPV-p30。经空斑纯化挑选出6株单克隆重组病毒,感染细胞裂解液在相对分子质量约为34000~35000位置出现一条表达带;其含量占细胞总蛋白的5.13%~5.62%,株间差异不明显;用抗弓形虫多克隆抗血清进行Western-Blot呈一特异反应条带。感染后72h蛋白表达量最高,可达7.18%;96小时次之,为5.91%。 展开更多
关键词 p30基因 弓形体 真核系统 基因表达
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禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达 被引量:6
12
作者 葛兆宏 陆广富 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期441-445,共5页
根据MONAM.ALY发表的一对引物,5'-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAAGGGCAGA-3'(上游引物),5'-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3'(下游引物),上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237bp到267bp,下游引物在499bp到517bp之间,扩增产物总长为28... 根据MONAM.ALY发表的一对引物,5'-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAAGGGCAGA-3'(上游引物),5'-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3'(下游引物),上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237bp到267bp,下游引物在499bp到517bp之间,扩增产物总长为281bp。以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板,进行PCR扩增,提取病毒RNA进行RT-PCR,这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中,经测序,证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REVp30的主要抗原域,用构建成功的表达禽网状内皮增生症p30主要抗原域的原核表达载体pET-p30,转化大肠杆菌BL21,挑取阳性克隆培养,IPTG诱导后裂解菌体作SDS-PAGE分析,出现大小约25Ku的表达产物即融合蛋白TrxA-p30主要抗原域,经Westernblot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件:LB培养基,37℃培养,待菌生长至OD600为0.4h~0.6h,用终浓度为0.2mmol/L~0.8mmol/L的IPTG进行诱导,于37℃振荡培养4h~5h,均能高效表达。本研究为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮增生症病毒 p30蛋白主要抗原域 原核表达系统 Western BLOT
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RH株弓形虫表面抗原p22基因与p30基因联合表达后的免疫活性 被引量:1
13
作者 王伟 古钦民 +5 位作者 刘师莲 何深一 卞继峰 李瑛 周怀瑜 赵群力 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第3期241-244,248,共5页
目的:研究弓形虫表面抗原p22基因与p30基因的联合表达。方法:用RT-PCR及PCR方法获得p22和p30基因,联合构建在表达载体中,经酶切与测序鉴定后,用IPTG对工程菌进行诱导表达,表达产物行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳及Western-blot免疫印迹检测。结... 目的:研究弓形虫表面抗原p22基因与p30基因的联合表达。方法:用RT-PCR及PCR方法获得p22和p30基因,联合构建在表达载体中,经酶切与测序鉴定后,用IPTG对工程菌进行诱导表达,表达产物行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳及Western-blot免疫印迹检测。结果:经RT-PCR可得到长约438bp的p22外显子基因片段,蛋白电泳结果显示,阳性重组菌在66.5Kda位置上明显多一条带,此条带可与p22抗体结合并使免疫印迹显示阳性结果。结论:弓形虫表面抗原p22基因的有效基因片段与p30基因片段联合表达后,在融合蛋白中仍具有免疫原性。 展开更多
关键词 弓形虫 基因 p30 基因 P22 基因表达 免疫印迹法 聚合酶链反应
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弓形虫重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗构建及鉴定 被引量:10
14
作者 高红刚 张佃波 +1 位作者 卞传秀 刘克义 《中国热带医学》 CAS 2007年第4期489-491,503,共4页
目的构建和鉴定弓形虫P30-ROP2复合基因重组耻垢分枝杆菌M.S载体活疫苗。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入大肠杆菌/分枝杆菌穿梭质粒pSTM3,构建重组质粒pSTM3-P30-ROP2,电穿孔法导入耻垢分枝杆菌中,潮霉素筛选、PCR法鉴定阳... 目的构建和鉴定弓形虫P30-ROP2复合基因重组耻垢分枝杆菌M.S载体活疫苗。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入大肠杆菌/分枝杆菌穿梭质粒pSTM3,构建重组质粒pSTM3-P30-ROP2,电穿孔法导入耻垢分枝杆菌中,潮霉素筛选、PCR法鉴定阳性转化子,温度诱导表达鉴定。结果获得pSTM3-P30-ROP2重组穿梭表达载体,SDS-PAGE结果显示P30-ROP2复合基因表达蛋白产物分子量约为66kDa。结论成功构建弓形虫复合抗原基因P30-ROP2重组耻垢分枝杆菌疫苗,为弓形虫病的防治提供了一种新方法。 展开更多
关键词 弓形虫 p30-ROP2复合基因 耻垢分枝杆菌M.S 穿梭表达载体
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弓形虫表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:1
15
作者 周怀瑜 何深一 +5 位作者 丛华 古钦民 李瑛 赵群力 张加勤 杨婷婷 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第9期781-784,共4页
目的:探讨毕赤酵母能否高效表达具有生物学活性的弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B重组蛋白(P30-CTA2/B)。方法:将目的基因定向亚克隆入pGAPZαA表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-CTX;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入... 目的:探讨毕赤酵母能否高效表达具有生物学活性的弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B重组蛋白(P30-CTA2/B)。方法:将目的基因定向亚克隆入pGAPZαA表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-CTX;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选、PCR法鉴定阳性转化子;酵母工程菌摇瓶表达,取上清液行SDS-PAGE和Westernblotting分析。结果:在毕赤酵母菌中分泌表达P30-CTA2/B重组蛋白,产量高达0.57g/L;SDS-PAGE显示其在49000处有一条明显表达蛋白条带,Westernblotting显示表达蛋白具有P30抗原特异性。结论:大量具有免疫活性的P30-CTA2/B重组蛋白在毕赤酵母中表达,为弓形虫亚单位复合疫苗的研制和大规模动物实验创造了条件。 展开更多
关键词 弓形虫病 蛋白 p30 佐剂 免疫 毕赤酵母 基因表达
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弓形虫复合抗原基因P30-ROP2在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定 被引量:3
16
作者 周怀瑜 何深一 +4 位作者 古钦民 丛华 张加勤 李瑛 赵群力 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第12期1071-1074,共4页
目的构建含弓形虫主要表面抗原P30与致密颗粒蛋白ROP2复合基因重组质粒,并在毕赤酵母中表达、纯化与鉴定。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-ROP2;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入... 目的构建含弓形虫主要表面抗原P30与致密颗粒蛋白ROP2复合基因重组质粒,并在毕赤酵母中表达、纯化与鉴定。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-ROP2;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入毕赤酵母GS115中,抗生素Zeocin筛选、PCR法鉴定阳性转化子;酵母工程菌大量摇瓶表达,纯化产物,免疫活性鉴定。结果获得pGAPZαA-P30-ROP2重组表达载体,SDS-PAGE和Western Blot结果显示P30-ROP2复合基因表达蛋白产物分子量约为66kD,具有一定的免疫活性。结论弓形虫复合抗原基因P30-ROP2在毕赤酵母中成功分泌表达,表达产物具有免疫活性,为弓形虫病诊断抗原及疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 p30 ROP2 毕赤酵母 基因表达
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弓形虫P30基因原核表达载体的构建 被引量:1
17
作者 丛华 古钦民 +3 位作者 赵跃然 游力 黄勇 王伟 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2000年第3期172-174,共3页
为获取具有生物学活性的弓形虫 P30蛋白 ,采用定向克隆的方法 ,自行设计引物通过 PCR扩增得到 P30基因片段 ,用 Eco R 和 Sal 双酶切后 ,连接到同样双酶切的原核表达载体 (p BV2 2 0和 p MAL P2 )上 ,转化大肠杆菌 DH5 α,分别得到含重... 为获取具有生物学活性的弓形虫 P30蛋白 ,采用定向克隆的方法 ,自行设计引物通过 PCR扩增得到 P30基因片段 ,用 Eco R 和 Sal 双酶切后 ,连接到同样双酶切的原核表达载体 (p BV2 2 0和 p MAL P2 )上 ,转化大肠杆菌 DH5 α,分别得到含重组质粒 p BV2 2 0 - P30和 p MAL P2 - P30的工程菌。扩菌提取质粒经过酶切分析和 PCR扩增鉴定后 ,证实 P30基因的两个原核表达载体构建成功 。 展开更多
关键词 弓形体 p30基因 克隆
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含有弓形虫表面抗原P22、P30复合基因的载体构建 被引量:1
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作者 王伟 古钦民 +5 位作者 刘师莲 何深一 胡海燕 李瑛 卢翌 耿昭 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期43-45,共3页
目的 选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法 根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质... 目的 选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法 根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质粒pGEX - 2T -v2 2 ,将两片段定向克隆于克隆载体 pUC19及表达质粒pGEMEXTM- 1上 ,用酶切及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 酶切产物经电泳显示条带清晰 ,P2 2、P30基因片段的泳动位置分别在 4 4 6bp和 86 0bp的位置 ,与预计结果一致 ;测序结果表明插入的复合基因片段方向及序列均正确。结论 成功构建的含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体 ,保证了两基因连接方向、序列及开放读码框的正确 ,为今后两基因的进一步复合表达研究奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 p30基因 P22基因 克隆 疫苗
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弓形虫P30抗原基因的体外扩增、克隆及原核表达 被引量:1
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作者 李永华 陈秀春 +1 位作者 刘锦华 周世昌 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1998年第1期19-22,共4页
根据已知弓形虫主要表面抗原P30的基因序列,用已合成的一对引物,通过聚合酶链反应,从弓形虫RH、ZS1和ZS2株中扩增了P30的编码基因,经纯化及相应酶切后插入质粒pcDNA3中并转化大肠杆菌TG1。经含氨苄青霉素L... 根据已知弓形虫主要表面抗原P30的基因序列,用已合成的一对引物,通过聚合酶链反应,从弓形虫RH、ZS1和ZS2株中扩增了P30的编码基因,经纯化及相应酶切后插入质粒pcDNA3中并转化大肠杆菌TG1。经含氨苄青霉素LB培养基初筛后,挑菌扩增双酶切鉴定,阳性克隆子在TG1中表达,产物经SDS-PAGE分析显示,P30基因在大肠杆菌中高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 p30抗原 基因 聚合酶链反应 克隆 表达
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弓形虫P30蛋白抗原表位的克隆表达及纯化鉴定 被引量:1
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作者 李越希 陶开华 +1 位作者 张锦海 潘明洁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期282-284,287,共4页
目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体。方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,... 目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体。方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDSPAGE分析。用离子交换纯化表达的P30抗原表位,用ELISA鉴定其抗原性。结果表达的P30蛋白抗原表位以包涵体形式存在,纯化的P30蛋白抗原表位片段有较好的抗原性,可用于检测弓形虫抗体。结论已成功构建了高表达P30蛋白的工程菌,为研制弓形虫抗体检测试剂或疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 p30蛋白 抗原表位 基因克隆
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