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Molecular Cloning,Expression,and Characterization of an Adenylyl Cyclase-associated Protein from Gossypium arboreum Fuzzless Mutant
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作者 WANG Sheng,ZHAO Guo-hong,JIA Yin-hua,DU Xiong-ming(Cotton Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences Key Laboratory of Cotton Genetic Improvement,Ministry of Agriculture,Anyang,Henan 455000,China) 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2008年第S1期69-,共1页
CAP,an adenylyl cyclase-associated protein,is predicted to be involved in cytoskeletal organization and signal transduction.Recently,we found that CAP may play an important role in fuzz-like fiber cell initiation in c... CAP,an adenylyl cyclase-associated protein,is predicted to be involved in cytoskeletal organization and signal transduction.Recently,we found that CAP may play an important role in fuzz-like fiber cell initiation in cotton.For the further research,we isolated two CAP homologues from wild 展开更多
关键词 molecular cloning expression and characterization of an Adenylyl Cyclase-associated Protein from Gossypium arboreum Fuzzless Mutant CAP
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Molecular Characterization, Expression Patterns and Binding Properties of Two Pheromone-Binding Proteins from the Oriental Fruit Moth, Grapholita molesta(Busck) 被引量:11
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作者 SONG Yue-qin DONG Jun-feng +1 位作者 QIAO Hui-li WU Jun-xiang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第12期2709-2720,共12页
Insect pheromone-binding proteins (PBPs) play important roles in transporting hydrophobic pheromone components across the sensillum lymph to the surface of olfactory receptors (ORs). However, the PBPs of the orien... Insect pheromone-binding proteins (PBPs) play important roles in transporting hydrophobic pheromone components across the sensillum lymph to the surface of olfactory receptors (ORs). However, the PBPs of the oriental fruit moth, Grapholita molesta, an important destructive pest of stone fruits worldwide, are not well characterized. In this study, two new putative PBP genes, GmolPBP2 and GmolPBP3, were identiifed from G. molesta antennae. The deduced amino-acid sequences of these two putative PBP genes are characteristic of the odorant binding protein family, containing six conserved cysteine residues. The genomic DNA sequence of each gene contained two introns. However, the lengths and positions of the introns differed. RT-PCR analyses revealed that the two GmolPBP genes are only expressed in the antennae of female and male moths. Quantitative real-time PCR indicated that the transcription levels of GmolPBP2 are far greater than those of GmolPBP3 in both female and male antennae. GmolPBP3 showed higher transcription levels in female antennae than in male antennae, while GmolPBP2 showed similar transcription levels in both female and male antennae. The transcript levels of both genes were signiifcantly different in premating and post-coitum individuals, implying that mating affects the process of sex pheromone reception. To better understand the functions, two GmolPBPs were expressed in Escherichia coli, and the ligand binding assays were conducted. Results showed that GmolPBP2 has strong binding afifnities to two sex pheromone components, E8-12:Ac and Z8-12:Ac, as well as weaker binding afifnities to Z8-12:OH and 12:OH. GmolPBP2 also bound some ordinary odor molecules. However, the afifnity of GmolPBP3 to both sex pheromones and ordinary odor molecules was very weak. These results show that GmolPBP2 plays the main role in pheromone discrimination and recognition in the oriental fruit moth. 展开更多
关键词 Grapholita molesta pheromone-binding proteins molecular cloning mrna expression prokaryotic expression lfuorescence competitive binding assays
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The Pig Lhx8 Gene:cDNA Cloning,Bioinformatic Analysis and Expression Level in Tissues and Preimplantation Embryos 被引量:2
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作者 FANG Wei,LI Gui-qiang,LI Mei-li,WANG Wei and XU Yin-xue College of Animal Science & Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,P.R.China 《Agricultural Sciences in China》 CSCD 2009年第12期1503-1510,共8页
Evidence has shown in mouse that Lhx8 is a critical factor for maintenance and differentiation of the oocyte during early oogenesis. In the current paper, attempts were made to clone and characterize a gene encoding L... Evidence has shown in mouse that Lhx8 is a critical factor for maintenance and differentiation of the oocyte during early oogenesis. In the current paper, attempts were made to clone and characterize a gene encoding Lhx8 from pig. Rapid amplification of cDNA ends (RACE) gave rise to a full-length of Lhx8 which contained 1 681 bp nucleotides, with a complete open reading frame of 885 bp, encoding a 295 amino acid polypeptide. Homology search and sequence multialignment demonstrated that the deduced pig Lhx8 protein sequence shared a high identity with Lhx8 from other mammals, including several highly conservative motifs and amino acids. The phylogenetic tree of the LIM superfamily proteins has been constructed to reveal the evolutionary relationship of various species. RT-PCR analysis showed that the Lhx8 gene was expressed in gonad and immunity tissues. In preimplantation embryos, Lhx8 mRNA expression profiling using realtime PCR revealed that its mRNA levels were highest in 4-cell stage embryos and gradually decreased until the blastocyst stage. 展开更多
关键词 PIG LhxS molecular cloning mrna expression QRT-PCR preimplantation embryos
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黄颡鱼硒蛋白基因的克隆与分析
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作者 刘光辉 余岸艮 +3 位作者 何杨 郭雨诗 柯江 罗智 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期185-193,共9页
为探讨黄颡鱼硒蛋白selenow2a、selenop2和selenot2基因之间的关系,采用3′/5′RACE PCR克隆得到3个基因的cDNA全长,分别为891、1998和1432bp,其中ORF长度分别为288、828和600bp,编码95、275和219个氨基酸。在线工具SECISerach3对3个基... 为探讨黄颡鱼硒蛋白selenow2a、selenop2和selenot2基因之间的关系,采用3′/5′RACE PCR克隆得到3个基因的cDNA全长,分别为891、1998和1432bp,其中ORF长度分别为288、828和600bp,编码95、275和219个氨基酸。在线工具SECISerach3对3个基因的cDNA序列分析结果显示,它们都含有可以编码硒代半胱氨酸的终止密码子,以及在3′非编码区存在SECIS元件。通过氨基酸序列比对和系统发育树分析,发现sele-now2a、selenop2和selenot2基因预测得到的氨基酸序列与斑马鱼(Danio rerio)氨基酸相似性分别为82.24%、66.19%和79.45%,而与斑点叉尾鮰(Ictalurus punetaus)的氨基酸相似性分别为94.74%、68.50%和90.95%,在发育树上则显示为树杈相接近。采用实时荧光定量PCR检测3个硒蛋白基因的mRNA在黄颡鱼心脏、肝脏、肌肉、脑、肠、脾脏、精巢和卵巢组织中的表达,结果显示其mRNA表达水平呈现组织特异性。表明3个基因拥有硒蛋白家族的特征,但在组织表达上具有特异性。 展开更多
关键词 硒蛋白 基因克隆 分子特征 黄颡鱼 组织表达
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斜纹夜蛾水通道蛋白1(AQP1)基因的克隆、分子特性和表达分析 被引量:8
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作者 刘海远 舒本水 +2 位作者 姜春来 李良德 钟国华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期339-349,共11页
水通道蛋白(aquaporin,AQP)是生物体中一种重要的跨膜通道蛋白,它通过一些中性小分子化合物的运输,从而参与了昆虫对食物中水分再吸收、抗寒和抗干燥等重要生理机制。为研究斜纹夜蛾中水通道蛋白的基因特征和时空表达特征,本研究利用同... 水通道蛋白(aquaporin,AQP)是生物体中一种重要的跨膜通道蛋白,它通过一些中性小分子化合物的运输,从而参与了昆虫对食物中水分再吸收、抗寒和抗干燥等重要生理机制。为研究斜纹夜蛾中水通道蛋白的基因特征和时空表达特征,本研究利用同源克隆和RACE技术获得了斜纹夜蛾水通道蛋白1(AQP1)基因的两个转录异构体,并将其分别命名为SL-AQP1A(GenBank登录号:KC999953)和SL-AQP1B(GenBank登录号:KC999954),其中SL-AQP1B比SL-AQP1A在推导的编码区5'端连续性缺失81个碱基,而其他序列完全一致;同源分析显示推导的SL-AQP1与家蚕为代表的水通道蛋白1具有较高的同源性。拓扑学和三级结构模拟显示其有经典的6个全跨膜结构域、2个半跨膜结构域、2个保守的NPA(asparagine-proline-alanine,天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸)结构基序及选择性水孔构件ar/R(aromatic arginine,芳香族精氨酸)。qRT-PCR结果显示,SL-AQP1整体时空表达差异性十分明显,并且SL-AQP1B的表达量显著高于SL-AQP1A;SL-AQP1在卵期和预蛹期有较高的表达量,在中肠、马氏管、血淋巴、消化腺中有相对较高的表达量,暗示其在斜纹夜蛾中存在重要的渗透压调节作用。本文结果为进一步研究水通道蛋白在斜纹夜蛾中的作用提供了一定的分子基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 水通道蛋白 基因克隆 转录异构体 分子特性 表达分析
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赤眼鳟Toll样受体3基因cDNA全长克隆及表达分析 被引量:7
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作者 肖调义 李伟 +3 位作者 王荣华 刘巧林 彭慧珍 苏建明 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期894-901,共8页
为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)Toll样受体3(Toll-like receptor 3,Sc TLR3)基因是否参与抗病毒免疫反应,实验运用RACE技术,克隆得到Sc TLR3基因c DNA全长序列,并进行了生物信息学分析;通过RealTime q PCR技术,检测了Sc TLR3 m... 为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)Toll样受体3(Toll-like receptor 3,Sc TLR3)基因是否参与抗病毒免疫反应,实验运用RACE技术,克隆得到Sc TLR3基因c DNA全长序列,并进行了生物信息学分析;通过RealTime q PCR技术,检测了Sc TLR3 m RNA在健康赤眼鳟10个组织中的分布以及感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)后肝脏、脾脏、体肾和头肾中的表达特征。结果表明:Sc TLR3基因c DNA序列全长4043 bp,包括5?-非编码区(UTR)216 bp,开放阅读框(ORF)2715 bp和3?-UTR 1112 bp;Sc TLR3共编码904个氨基酸残基,推导的蛋白分子量102.67 k D,理论等电点8.76;SMART结构域预测显示,Sc TLR3由N端的信号肽(SP)、富亮氨酸结构域(LRRs)、跨膜结构域(TM)和C端的Toll/白介素-1受体结构域(TIR)组成。实时荧光定量结果显示,Sc TLR3m RNA在检测的各组织中均有表达,肝脏中的相对表达量极显著高于其他组织(P<0.01);感染GCRV后,肝脏、脾脏、体肾和头肾组织中Sc TLR3 m RNA均上调表达,肝脏、脾脏和体肾组织中的相对表达量在24h达到峰值,分别为对照组的5倍、7倍和6倍。研究表明,Sc TLR3具有TLRs家族基因的典型结构特征,并能被GCRV诱导表达,推测其在赤眼鳟抗GCRV入侵免疫反应中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 赤眼鳟 TOLL样受体3 分子克隆 表达特征
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青石斑鱼细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因的克隆鉴定及表达分析 被引量:6
7
作者 施大卫 王利 +3 位作者 娄绘芳 黄艳青 朱保建 吴信忠 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期467-476,共10页
细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase,COX)是线粒体内呼吸链电子传递的终末复合物,是线粒体氧化能力的关键调节物质。细胞色素C氧化酶亚基I(COXⅠ)是细胞色素C氧化酶具有酶催化活性的3个亚基之一。本研究以本实验室构建的青石斑鱼消减杂... 细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase,COX)是线粒体内呼吸链电子传递的终末复合物,是线粒体氧化能力的关键调节物质。细胞色素C氧化酶亚基I(COXⅠ)是细胞色素C氧化酶具有酶催化活性的3个亚基之一。本研究以本实验室构建的青石斑鱼消减杂交cDNA文库中长587bp的EST序列为基础,采用RACE-PCR方法克隆鉴定出青石斑鱼(Epinephelus awoara)细胞色素C氧化酶亚基I基因。研究结果表明:青石斑鱼COXⅠ全长1659bp,5'端非编码区3bp,3'端非编码区105bp,开放阅读框1551bp,编码516个氨基酸。序列分析表明,青石斑鱼COXⅠ与线纹刺尾鲷COXⅠ同源性最高,达96.9%。采用半定量RT-PCR方法研究COXⅠ基因在青石斑鱼各组织中的表达特征,结果表明COXⅠ基因在正常的青石斑鱼和注射了副溶血弧菌灭活疫苗的青石斑鱼的脾、肝、心、头肾、肾、肌肉和鳃中都有转录表达。注射副溶血弧菌灭活疫苗后,除了鳃组织,其他组织中COXⅠ基因表达量较对照组都有显著提高(P<0.05),而鳃组织中的COXⅠ基因表达量没有显著变化。 展开更多
关键词 青石斑鱼 细胞色素C氧化酶 克隆 表达分析 副溶血弧菌灭活疫苗
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大黄鱼(Pseudosciaena crocea)细胞色素P450 CYP4F7基因的克隆及表达分析 被引量:3
8
作者 娄绘芳 黄艳青 吴信忠 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期131-138,共8页
CYP4F7是细胞色素P450超基因家族中CYP4F亚家族中的同工酶之一,而细胞色素P450在通过电子传递参与生物体代谢和转化内源和外源化合物方面起着重要的作用。以本实验室构建的大黄鱼消减杂交cDNA文库中623bp的CYP4F7片段设计引物,以大黄鱼... CYP4F7是细胞色素P450超基因家族中CYP4F亚家族中的同工酶之一,而细胞色素P450在通过电子传递参与生物体代谢和转化内源和外源化合物方面起着重要的作用。以本实验室构建的大黄鱼消减杂交cDNA文库中623bp的CYP4F7片段设计引物,以大黄鱼的总RNA为模板,利用RACE-PCR的方法,克隆鉴定出了大黄鱼细胞色素P450 CYP4F7基因。结果表明:基因全长1934bp,5′端非编码区59bp,3′端非编码区264bp,开放阅读框1611bp,编码536个氨基酸。序列分析表明大黄鱼的CYP4F7氨基酸序列与舌齿鲈的相似性为91%。利用RT-PCR方法研究CYP4F7在大黄鱼各组织中的表达特征,结果表明CYP4F7在肝脏、脾脏中表达量最高,在心脏、肾脏、头肾、鳃丝中表达量次之。另外,CYP4F7在注射了细菌脂多糖的大黄鱼各组织中的表达量均低于正常的大黄鱼,认为细菌脂多糖可能是CYP4F7表达的抑制剂,说明CYP4F7可能与鱼类免疫反应有一定相关性。 展开更多
关键词 大黄鱼 细胞色素P450 CYP4F7 克隆 表达分析
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鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶研究进展 被引量:11
9
作者 杜翠红 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期336-339,共4页
本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是... 本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是造成鱼糜凝胶劣化的主要原因。同时,由于鱼类MBSP具有良好的热稳定性及对精氨酸或赖氨酸残基羧基端特异分解的底物特异性,因此,该蛋白酶有望开发成为一种新颖的工具酶应用于蛋白质质谱鉴定等研究领域。 展开更多
关键词 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 分离纯化 酶学特性 分子克隆 重组表达
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绵羊肌球蛋白轻链2基因的分子克隆与表达分析 被引量:2
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作者 张春兰 王建民 王桂芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1347-1353,共7页
肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序... 肌球蛋白轻链2蛋白是哺乳动物肌球蛋白的重要成员之一。获得其基因序列,并对其特征和表达进行分析,可为进一步研究功能奠定基础。本研究以小尾寒羊背最长肌为试验材料,采用RACE等方法对绵羊肌球蛋白轻链2基因的c DNA序列进行克隆和测序、利用相关生物学软件对所得c DNA序列进行生物信息学预测、并利用qRT-PCR和Western印迹法对其在绵羊各种组织中的表达进行分析。结果获得该基因c DNA序列全长为776 bp,提交至Gen Bank中获得相应的登录号为KJ710702;该序列中的498 bp的开放读码框编码含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测发现该蛋白质无信号肽和二硫键,但存在N-糖基化和磷酸化位点;二级结构中以α-螺旋为主;蛋白质序列比较发现绵羊MYL2与小鼠、人、大鼠、猪、牛等哺乳动物的同源性均在95%以上。mRNA和蛋白质表达谱均显示该基因在绵羊心肌中表达量最高,其次为背最长肌。 展开更多
关键词 绵羊 肌球蛋白轻链2 克隆 特征 表达谱
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沙葱萤叶甲热激蛋白基因GdHsp10a的克隆、分子特征与表达分析 被引量:6
11
作者 陈龙 谭瑶 +3 位作者 周晓榕 庞保平 单艳敏 张卓然 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期417-424,共8页
为明确热激蛋白HSP10在沙葱萤叶甲Galeruca daurica生长发育过程中的作用,采用RTPCR及RACE技术克隆沙葱萤叶甲Hsp10基因cDNA的全长序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,并利用qPCR技术对该基因在沙葱萤叶甲不同发育阶段、成虫羽化后... 为明确热激蛋白HSP10在沙葱萤叶甲Galeruca daurica生长发育过程中的作用,采用RTPCR及RACE技术克隆沙葱萤叶甲Hsp10基因cDNA的全长序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,并利用qPCR技术对该基因在沙葱萤叶甲不同发育阶段、成虫羽化后不同时期以及不同温度下的表达谱进行分析。结果表明,克隆获得1条新的沙葱萤叶甲Hsp10基因,命名为GdHsp10a,GenBank登录号为MG460308,cDNA序列全长为526 bp,开放阅读框为333 bp,编码蛋白含110个氨基酸,预测分子量为11.97 kD,等电点为9.74;无信号肽及跨膜结构。同源比对及系统进化分析表明,GdHSP10a与光肩星天牛Anoplophora glabripennis HSP10亲缘关系最近,氨基酸序列一致性为53.15%。qPCR结果表明,GdHsp10a在沙葱萤叶甲各发育阶段均有表达,其中在卵期和成虫期的表达量显著高于幼虫期、预蛹期及蛹期;成虫羽化后不同时期表达量差异显著,25 d时表达量最高,其次为100、10和7 d时的表达量;温度对GdHsp10a表达量有显著影响,30℃下表达量最高,35℃下表达量次之,15、20、25及40℃下表达量最低且无显著差异。表明GdHsp10a可能在沙葱萤叶甲生长发育及成虫越夏中起着多重作用。 展开更多
关键词 沙葱萤叶甲 热激蛋白HSP10 基因克隆 分子特性 基因表达 温度胁迫
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