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Testis-specific Fankl gene in knockdown mice produces oligospermia via apoptosis 被引量:5
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作者 Wan-Wei Dong Hua-Liang Huang +9 位作者 Wei Yang Jia Liu Yang Yu Sheng-Lai Zhou Wei Wang Xiang-Chuan Lv Zhao-Yang LP Mei-Ying Zhang Zhi-Hong Zheng Wei Yan 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2014年第1期124-130,共7页
Fankl is exclusively expressed in the testis from the meiosis phase to the haploid phase of spermatogenesis. In this study, we examined the function of Fankl by establishing a Fankl-knockdown transgenic mouse model. T... Fankl is exclusively expressed in the testis from the meiosis phase to the haploid phase of spermatogenesis. In this study, we examined the function of Fankl by establishing a Fankl-knockdown transgenic mouse model. The apoptotic statuses of the testes of the transgenic mice were tested using the terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) method. The FANK1 consensus DNA-binding sequence was identified using cyclic amplification of sequence target (CAST) analysis. Differentially expressed genes were examined using microarray analysis. A reduction in sperm number and an increase in apoptotic spermatocytes were observed in Fankl-knockdown mice, and the apoptotic cells were found to be primarily spermatogonia and spermatocytes. The CAST results demonstrated that the consensus DNA-binding sequence was AAAAAG, in which the percentage occurrence of each base at each position ranged from 55 to 86%. This sequence was present in the promoter regions of 10 differentially expressed genes that were examined using microarray analysis. In total, 17 genes were differentially expressed with changes in their expression levels greater than twofold. The abnormal expression of Fankl target genes that were regulated directly or indirectly by Fankl reduced the number of sperm in the knockdown mice. Thus, FANK1 may Dlav a pivotal role in sDermato^enesis as a transcription factor.Fankl is exclusively expressed in the testis from the meiosis phase to the haploid phase of spermatogenesis. In this study, we examined the function of Fankl by establishing a Fankl-knockdown transgenic mouse model. The apoptotic statuses of the testes of the transgenic mice were tested using the terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) method. The FANK1 consensus DNA-binding sequence was identified using cyclic amplification of sequence target (CAST) analysis. Differentially expressed genes were examined using microarray analysis, A reduction in sperm number and an increase in apoptotic spermatocytes were observed in Fankl-knockdown mice, and the apoptotic cells were found to be primarily spermatogonia and spermatocytes. The CAST results demonstrated that the consensus DNA-binding sequence was AAAAAG, in which the percentage occurrence of each base at each position ranged from 55 to 86%. This sequence was present in the promoter regions of 10 differentially expressed genes that were examined using microarray analysis. In total, 17 genes were differentially expressed with changes in their expression levels greater than twofold. The abnormal expression of Fankl target genes that were regulated directly or indirectly by Fankl reduced the number of sperm in the knockdown mice. Thus, FANK1 may play a pivotal role in spermatogenesis as a transcription factor. 展开更多
关键词 Fankl knockdown mice SPERMATOGENESIS
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胸腺基质淋巴细胞生成素对小鼠巨噬细胞抗原提呈功能及炎性分泌功能的影响 被引量:7
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作者 林静 王磊 +2 位作者 苏又苏 方红成 李大主 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1063-1067,共5页
目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制。方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激。采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ... 目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制。方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激。采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ、CD86的表达;采用实时定量PCR以及ELISA方法检测小鼠巨噬细胞内以及培养上清液炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达。结果:与野生型对照组比较,野生型实验组小鼠巨噬细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达明显升高,炎症因子MCP-1和TNF-α表达及分泌均增高,IL-10表达及分泌无明显变化;与TSLPR基因敲除对照组相比较,TSLPR基因敲除小鼠巨噬细胞经TSLP刺激后细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达及炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达及分泌均无明显变化;与野生型实验组相比较,TSLPR基因敲除可明显抑制TSLP诱导的小鼠巨噬细胞抗原提呈分子增加以及炎症因子表达。结论:TSLP可通过与TSLPR结合促进小鼠巨噬细胞活化,增加巨噬细胞抗原递呈能力,产生炎症因子,促使小鼠巨噬细胞向促炎巨噬细胞表型M1型转化。 展开更多
关键词 TSLP TSLPR基因敲除 小鼠巨噬细胞 抗原提呈能力 炎症因子
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HOXB7基因敲减对裸鼠结肠癌肝转移模型的抑癌机制研究 被引量:3
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作者 王艺 赵雪峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第6期904-907,共4页
目的研究HOXB7基因敲减对裸鼠结肠癌肝转移模型的抑癌机制。方法将转染pcDNA3.1-HOXB7敲减或pcDNA3.1-scramble重组质粒的人结肠癌细胞株HT29经裸鼠脾脏接种建立稳定的肝转移模型。参与模型的实验裸鼠共20只,其中10只HOXB7基因敲减鼠列... 目的研究HOXB7基因敲减对裸鼠结肠癌肝转移模型的抑癌机制。方法将转染pcDNA3.1-HOXB7敲减或pcDNA3.1-scramble重组质粒的人结肠癌细胞株HT29经裸鼠脾脏接种建立稳定的肝转移模型。参与模型的实验裸鼠共20只,其中10只HOXB7基因敲减鼠列为研究组,10只scramble鼠列为对照组。制模4周后解剖观察两组裸鼠模型肝转移瘤的组织形态学和组织病理学变化。结果裸鼠结肠癌肝转移模型的成瘤率为100%(20/20)。组织形态学角度分析:与对照组比较,研究组显著抑制裸鼠模型的肝转移瘤形成;递减或衰减肝转移瘤的大小、肝体质量、病灶间融合、肝表面隆凸及肝转移评分,差异有统计学意义(P<0.05)。组织病理学角度分析:与对照组比较,研究组肿瘤细胞排列稀疏、边缘型分布、浸润深度浅、中央区坏死或凋亡成片,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HOXB7基因敲减可有效抑制裸鼠模型的结肠癌肝转移瘤形成,至于具体的抑癌模式和量化标准的制定需有待于进一步考证。 展开更多
关键词 HOXB7基因敲减 裸鼠模型 结肠癌肝转移 抑癌机制
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胎盘糖皮质激素受体低表达对孕期抑郁模型雌性子代的影响
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作者 潘淑敏 曹雄 王志坚 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期1480-1485,共6页
目的探索糖皮质激素受体(GR)对孕期抑郁小鼠子代抑郁倾向的影响。方法利用普通小鼠进行孕期抑郁(PND)造模,并用Western blot检测不同性别胎盘绒毛中GR表达情况;利用转基因工具鼠获得胎盘GR敲低小鼠,共20只。Western blot检测胎盘GR敲低... 目的探索糖皮质激素受体(GR)对孕期抑郁小鼠子代抑郁倾向的影响。方法利用普通小鼠进行孕期抑郁(PND)造模,并用Western blot检测不同性别胎盘绒毛中GR表达情况;利用转基因工具鼠获得胎盘GR敲低小鼠,共20只。Western blot检测胎盘GR敲低效果并分析胎盘组织学改变;对胎盘GR敲低小鼠进行孕期抑郁造模,比较GR敲低组抑郁孕鼠的仔鼠(KD)与GR非敲低组仔鼠(N-KD)生长发育情况;动物行为实验检测仔鼠运动能力和抑郁倾向。结果PND小鼠雌性仔鼠胎盘绒毛GR表达显著升高(P<0.05);胎盘GR敲低小鼠的胎盘GR表达显著降低(P<0.05);KD组仔鼠胎盘形态未见异常(P>0.05);KD组仔鼠生长发育未见异常(P>0.05);KD组仔鼠成年后运动能力未见异常(P>0.05);KD组雌性仔鼠在成年后更有抑郁倾向(P<0.05)。结论敲低胎盘GR可能增加孕期抑郁小鼠雌性子代抑郁倾向。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 孕期抑郁 条件性敲低 转基因小鼠
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甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用 被引量:8
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作者 王艳 张卫斌 +6 位作者 杨泳慧 陈晨 杨婧文 雷一鸣 张伟 王凡平 王明永 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期57-65,共9页
目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射... 目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4^+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγtmRNA的表达;取小鼠脾脏CD4^+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平。结果成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL^-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内转录因子RORγtmRNA表达升高,转录因子Foxp3mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL^-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少。结论在C.albicans感染中,MBL促进了CD4^+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4^+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素(MBL) MBL基因敲除小鼠(MBL^-/-) 白假丝酵母菌(C. albicans) THL7细胞 Treg细胞
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Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用
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作者 刘申 赵雪峰 《大连医科大学学报》 CAS 2015年第6期556-559,共4页
目的研究Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用。方法采用Claudin-7基因敲减表达质粒和pc DNA6-Scramble空载质粒转染的人胰腺癌细胞Bx PC-3建立裸鼠原位移植胰腺癌模型,裸鼠随机分为两组,即Claudin-7敲减组和阴性... 目的研究Claudin-7基因敲减细胞对裸鼠原位移植胰腺癌模型的致癌作用。方法采用Claudin-7基因敲减表达质粒和pc DNA6-Scramble空载质粒转染的人胰腺癌细胞Bx PC-3建立裸鼠原位移植胰腺癌模型,裸鼠随机分为两组,即Claudin-7敲减组和阴性对照组。制模30 d后比较两组间成瘤情况,并采用病理学方法检测两组肿瘤细胞生长程度。结果 Claudin-7敲减组成瘤率和大体观肿瘤大小测量值明显高于对照组,两组间差异有显著性意义(P<0.05)。胰腺肿瘤组织的病理学检测发现肿瘤细胞生成率和肿瘤最大直径两组间差异有显著性意义(P<0.05)。结论 Claudin-7基因敲减能有效促进裸鼠原位移植胰腺癌模型的形成。 展开更多
关键词 Claudin-7敲减 裸鼠 原位移植 胰腺癌
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