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γ-谷氨酰转肽酶在枯草芽孢杆菌中高效表达及发酵培养基优化
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作者 张祖政 毛泽敬 +4 位作者 余华顺 张彦 杨潇 龚大春 郑贤良 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期76-83,共8页
γ-谷氨酰转肽酶是一种能催化底物谷胺酰胺形成γ-谷氨酰-酶复合体,再被受体底物(如氨基酸、短肽)亲核取代,发生转肽反应形成γ-谷氨酰肽的酶,在食品、医药等领域有重要应用价值。该研究选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SCK6作为表... γ-谷氨酰转肽酶是一种能催化底物谷胺酰胺形成γ-谷氨酰-酶复合体,再被受体底物(如氨基酸、短肽)亲核取代,发生转肽反应形成γ-谷氨酰肽的酶,在食品、医药等领域有重要应用价值。该研究选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SCK6作为表达宿主,以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建γ-谷氨酰转酶信号肽筛选文库,筛选出最优信号肽SP_(cotC),在此基础上进行启动子筛选,得到最优启动子P_(aprE),最终构建了一株高效分泌表达γ-谷氨酰肽酶的重组菌株BS-gts3,摇瓶发酵胞外酶活力最高为5.04 U/mL。通过单因素试验和响应面试验筛选出最优培养基:乳糖31.73 g/L、FM80250.26 g/L、硫酸镁1.24 g/L、KH_(2)PO_(4)1.25 g/L、K_(2)HPO_(4)0.75 g/L,胞外酶活提高了12%,为5.623 U/mL。并进行5 L发酵罐放大培养,在38 h,胞外酶活力达到最高28.18 U/mL,是已报道的最高水平。该研究对γ-谷氨酰转肽酶的产品开发及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 Γ-谷氨酰转肽酶 启动子 信号肽 重组表达
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近平滑假丝酵母ATCC 7330的生长条件优化 被引量:3
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作者 罗华军 刘云 +5 位作者 王亚宁 邱勇 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2019年第2期12-16,共5页
通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1... 通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1)、酵母浸粉12g·L^(-1),最适发酵初始pH值为5.0,最适通风量为3.0L·min^(-1),在此条件下,菌体量比优化前提高110%。该研究为近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化应用奠定了基础。 展开更多
关键词 近平滑假丝酵母ATCC7330 生长特性 培养基 发酵条件 优化
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近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶双水相萃取工艺研究 被引量:2
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作者 王伟 刘云 +3 位作者 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2020年第1期8-12,共5页
研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定... 研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定最优的双水相萃取条件为:(NH4)2SO4质量分数15%、PEG1000质量分数19%、萃取温度16℃、萃取时间15 min,在此条件下,羰基还原酶的纯化倍数可达6倍。为近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶在手性化合物的绿色合成中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 近平滑假丝酵母ATCC 7330 羰基还原酶 PEG/(NH4)2SO4 双水相萃取
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近平滑假丝酵母ATCC7330均质破碎工艺研究 被引量:4
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作者 王伟 杨锟 +4 位作者 梅子龙 余华顺 戴秋红 任立伟 龚大春 《农产品加工》 2019年第18期33-35,共3页
研究了近平滑假丝酵母ATCC7330的高压均质破碎工艺,利用正交试验考查了均质温度、酵母质量分数、均质压力和均质次数对酵母细胞破碎得到的酮基还原酶的酶活影响。结果表明,4个因素的影响大小依次为均质压力>酵母质量分数>均质温度... 研究了近平滑假丝酵母ATCC7330的高压均质破碎工艺,利用正交试验考查了均质温度、酵母质量分数、均质压力和均质次数对酵母细胞破碎得到的酮基还原酶的酶活影响。结果表明,4个因素的影响大小依次为均质压力>酵母质量分数>均质温度>均质次数,其中均质压力为近平滑假丝酵母破碎的显著性因素,最佳破碎工艺为均质温度6℃,酵母质量分数20%,均质压力180MPa,均质次数为3次。经过验证试验,采用高压均质破碎酵母细胞的方法可得到粗酶液酶活1.572U/mL,比优化前提高150%以上。 展开更多
关键词 近平滑假丝酵母 均质 破碎工艺
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近平滑假丝酵母ATCC 7330对不同取代基乙酮类底物的催化效果
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作者 刘云 王伟 +6 位作者 郭金玲 任立伟 罗华军 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2020年第2期17-21,共5页
通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最... 通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最高,与模拟对接预测的结合能大小一致;从催化剂周转数来看,近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞对10种不同取代基乙酮类底物的催化能力大小依次为对氯苯乙酮=邻氯苯乙酮>1-萘乙酮>对氨基苯乙酮>环戊基乙酮>环己基乙酮>邻氨基苯乙酮>1-(1H-茚-4-基)乙酮>苯乙酮>环丙基乙酮,与对接模拟预测有一定差距。说明近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞的催化能力除了与结合能有关外,还与细胞的渗透性、反应溶剂等因素有关。 展开更多
关键词 近平滑假丝酵母ATCC 7330 乙酮类底物 底物适应性 催化效果
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LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化 被引量:14
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作者 胡悦 李汉文 +3 位作者 喻晨 余华顺 姚鹃 龚大春 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第2期59-65,共7页
以地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)E-417为出发菌株,采用氯化锂(LiCl)-常压室温等离子体(ARTP)复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对... 以地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)E-417为出发菌株,采用氯化锂(LiCl)-常压室温等离子体(ARTP)复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,在氯化锂添加量为1.5%、ARTP照射时间为45 s的最适复合诱变条件下筛选得到1株高产碱性蛋白酶的优良菌株F-3,酶活达到12147 U/mL,且该菌株传代8次后仍具有良好的遗传稳定性,其最适发酵培养基成分为玉米粉41 g/L、豆饼粉40 g/L、碳酸钠2.1 g/L、磷酸氢二钠2.0 g/L;最适发酵条件为发酵温度37℃、初始pH值7.0、接种量8%。在此优化条件下,碱性蛋白酶酶活达到16156 U/mL,较原始菌株提高75%。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 碱性蛋白酶 常压室温等离子体 复合诱变 响应面法
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桔青霉产核酸酶P1酶分离纯化及其酶学性质 被引量:4
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作者 李明 余华顺 +2 位作者 喻晨 吴尧 龚大春 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第7期89-94,共6页
桔青霉(Penicillium citrinum)产核酸酶P1浓缩液采用活性炭脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等分离技术,得到核酸酶P1纯组分,并研究了该酶的酶学性质。该酶纯化后比酶活达到33967 U/mg,纯化倍数为8.48倍;该酶的米氏常数Km、最大反... 桔青霉(Penicillium citrinum)产核酸酶P1浓缩液采用活性炭脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等分离技术,得到核酸酶P1纯组分,并研究了该酶的酶学性质。该酶纯化后比酶活达到33967 U/mg,纯化倍数为8.48倍;该酶的米氏常数Km、最大反应速度Vm和催化常数Kcat分别为2.50 mmol/L、0.0864 mmol/(mL·min)和252.43 s-1。该酶最适温度为75℃,热稳定范围60~75℃;最适pH为5.5,pH稳定范围为4.0~6.0;Zn2+在1 mmol/L条件下对核酸酶P1有很好的激活作用,Cu2+和Co2+对该酶的抑制作用明显,而Ni2+、Fe2+、Mn2+等离子具有不同程度的抑制作用。本研究对于该酶的广泛应用奠定了科学基础。 展开更多
关键词 核酸酶P1 纯化 动力学参数 酶学性质
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乳酸克鲁维酵母常温常压等离子体诱变选育及其突变株整细胞催化特性 被引量:3
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作者 曹纲 刘云 +3 位作者 郭金玲 吕育财 余华顺 龚大春 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第5期42-47,共6页
采用常温常压等离子体(ARTP)诱变方法,以耐20 g/L的苯乙酮毒性和酮基还原酶酶活作为筛选标记,对乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)进行选育,得到酮基还原酶酶活2.72 U/m L的突变菌株KL5,并研究了该菌株在不同碳源、氮源中的生长特... 采用常温常压等离子体(ARTP)诱变方法,以耐20 g/L的苯乙酮毒性和酮基还原酶酶活作为筛选标记,对乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)进行选育,得到酮基还原酶酶活2.72 U/m L的突变菌株KL5,并研究了该菌株在不同碳源、氮源中的生长特性及对底物苯乙酮转化能力。结果表明,蔗糖、酵母浸粉分别是突变株的最佳碳源和氮源;在一次添加苯乙酮20 g/L底物,蔗糖22.0 g/L,酵母浸粉10.0 g/L,磷酸二氢钾3.0 g/L,七水合硫酸镁1 g/L的催化条件下,28℃、200 r/min转化48 h,诱变菌株KL5对苯乙酮转化率可达到91.8%,比出发菌株提高2.5倍。该菌株具有广阔的生物催化应用前景。 展开更多
关键词 乳酸克鲁维酵母 常温常压等离子体诱变 酮基还原酶 苯乙酮
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Effects of composite scale on high temperature oxidation resistance of Fe-Cr-Ni heat resistant alloy 被引量:7
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作者 Wang Haitao Wang yuqing +2 位作者 yu huashun Min Guanghui Wang Zhifu 《China Foundry》 SCIE CAS 2009年第2期109-114,共6页
Fe-Cr-Ni heat resistant alloys with aluminum and silicon addition, alone and in combination, were melted using an intermediate frequency induction furnace with a non-oxidation method. By the oxidation weight gain meth... Fe-Cr-Ni heat resistant alloys with aluminum and silicon addition, alone and in combination, were melted using an intermediate frequency induction furnace with a non-oxidation method. By the oxidation weight gain method, the oxidation resistances of the test alloys were determined at 1,200 ℃ for 500 hours. According to the oxidation weight gains, the oxidation kinetic curves were plotted and the functions were regressed by the least squares method. The results show that the oxidation kinetic curves follow the power function of y = ax^b (a〉0, 0〈b〈1). The effects of scale compositions on oxidation resistance were studied further by analyses using X-ray diffraction (XRD) and scanning electron microscope (SEM). It is found that the composite scale compounds of Cr203, a-Al2O3, SiO2 and FeCr2O4, with compact structure and tiny grains, shows complete oxidation resistance at 1,200℃. When the composite scale lacks a-Al2O3 or SiO2, it becomes weak in oxidation resistance with a loose structure. By the criterion of standard Gibbs formation free energy, the model of the nucleation and growth of the composite scale is established. The forming of the composite scale is the result of the competition of being oxidized and reduced between aluminum, silicon and the matrix metal elements of iron, chromium and nickel. The protection of the composite scale is analyzed essentially by electrical conductivity and strength properties. 展开更多
关键词 Fe-based alloy heat resistant alloy oxide scale oxidation resistance
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Al-Si/Al_2O_3 in situ composite prepared by displacement reaction of CuO/Al system 被引量:3
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作者 Zhang Jing yu huashun +1 位作者 Chen Hongmei Min Guanghui 《China Foundry》 SCIE CAS 2010年第1期19-23,共5页
Al2O3 particle-reinforced ZL109 composite was prepared by in situ reaction between CuO and Al2O3 . The microstructure was observed by means of OM, SEM and TEM. The Al2O3 particles in sub-micron sizes distribute unifo... Al2O3 particle-reinforced ZL109 composite was prepared by in situ reaction between CuO and Al2O3 . The microstructure was observed by means of OM, SEM and TEM. The Al2O3 particles in sub-micron sizes distribute uniformly in the matrix, and the Cu displaced from the in situ reaction forms net-like alloy phases with other alloy elements. The hardness and the tensile strength of the composites at room temperature have a slight increase as compared to that of the matrix. However, the tensile strength at 350℃ has reached 90.23 MPa, or 16.92 MPa higher than that of the matrix. The mechanism of the reaction in the CuO/AI system was studied by using of differential scanning calorimetry(DSC) and thermodynamic calculation. The reaction between CuO and Al involves two steps. First, CuO reacts with Al to form Cu20 and Al2O3 at the melting temperature of the matrix alloy, and second, Cu20 reacts with Al to form Cu and Al2O3 at a higher temperature. At ZL109 casting temperature of 750- 780 ℃, the second step can also take place because of the effect of exothermic reaction of the first step. 展开更多
关键词 aluminium matrix composites in situ reaction Al2O3 particles ZL109 CUO
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Effects of composite oxide scale on oxidation resistance of superalloy K273 被引量:2
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作者 Wang Haitao Tan Jiwen +1 位作者 Chu Zhong yu huashun 《China Foundry》 SCIE CAS 2012年第2期165-170,共6页
A Si-containing K273 superalloy was made using intermediate frequency induction furnace in the study. In the testing of oxidation resistance, the oxidation process of the alloy specimens during the testing at 900℃ fo... A Si-containing K273 superalloy was made using intermediate frequency induction furnace in the study. In the testing of oxidation resistance, the oxidation process of the alloy specimens during the testing at 900℃ for 500 h was examined by oxidation weight gain method. The morphology and composition of the oxide scales were determined using scanning electron microscope (SEM) and X-ray diffraction (XRD), respectively. The effects of the transferring of ions and electrons on the oxidation resistance were further analyzed microscopically by semiconductor oxide models. The results show that the composite oxide scales consist of Cr203, SiO2 and spinel- type oxide MCr204, with flat and compact structure, and fine grains in uniform distribution. All of these endow the superalloy K273 with strong oxidation resistance. The reason for the powerful oxidation resistance of the composite scale is that the formation process of P+N type semiconductor oxide enables to consume most of the surplus negative and positive ions in the oxide scales, which makes the number of the mobile ions and electrons dropped enormously, and the transfer rate of them falls heavily. So the oxidation rate of the metal phase in the alloy matrix is reduced significantly. 展开更多
关键词 SUPERALLOY SILICON oxide scale oxidation resistance
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酸性蛋白酶AP-10分离纯化及其酶学性质
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作者 向珍蓉 余华顺 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2023年第12期27-30,43,共5页
采用活性炭吸附脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等技术对酸性蛋白酶AP-10浓缩液进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,分离纯化后得到的酸性蛋白酶AP-10纯组分比酶活为5800 U·mg^(-1),纯化倍数为6倍;最适反应... 采用活性炭吸附脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等技术对酸性蛋白酶AP-10浓缩液进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,分离纯化后得到的酸性蛋白酶AP-10纯组分比酶活为5800 U·mg^(-1),纯化倍数为6倍;最适反应温度为40℃,热稳定范围为30~45℃;最适反应pH值为3.0,pH值稳定范围为3.5~6.5;Mn^(2+)对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的激活作用,Fe 2+对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的抑制作用。为拓展酸性蛋白酶AP-10的应用及开发高品质产品奠定了基础。 展开更多
关键词 酸性蛋白酶AP-10 酶学性质 分离纯化
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Effect of CuO addition on microstructure and properties of aluminum composites produced by quick spontaneous infiltration process
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作者 Zhang Jingjing Lee Jung-Moo +2 位作者 Cho Young-Hee Kim Su-Hyeon yu huashun 《China Foundry》 SCIE CAS 2014年第3期191-196,共6页
Al matrix composites with a high volume fraction of reinforcements were fabricated with a compact of Al-Ti-B4C powder mixtures by quick spontaneous infiltration(QSI) process in an aluminum melt. Given the exothermal n... Al matrix composites with a high volume fraction of reinforcements were fabricated with a compact of Al-Ti-B4C powder mixtures by quick spontaneous infiltration(QSI) process in an aluminum melt. Given the exothermal nature of the reaction between CuO and Al, a certain amount of CuO addition to the Al-Ti-B4C system dramatically increases the adiabatic temperature and thereby enables the complete combustion reaction in an aluminum melt(about 1,173 K). After the QSI process, the compact fabricated with CuO retains its original shape and the obtained composite exhibits sound microstructure containing reaction products of TiB2, Al3BC and B4C. The formation of such reinforcements when adding CuO contributes to enhancing the properties of the composites that show far superior hardness and elastic modulus of 3.03 GPa and 158.9 GPa, respectively, with lower coefficient of thermal expansion(9.44 ppm?K-1) compared to those with no CuO addition. 展开更多
关键词 Al composite CuO addition Al-Ti-B4C microstructure mechanical properties
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基于启动子和信号肽优化提高谷氨酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达 被引量:1
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作者 毛泽敬 张祖政 +5 位作者 陈铭 望松柏 牛硕 余华顺 张彦 郑贤良 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1536-1549,共14页
【背景】谷氨酰胺酶(glutaminase)是一种能够催化L-谷氨酰胺水解生成L-谷氨酸和氨的酶,在食品、医药等领域有重要的应用价值。【目的】研究不同启动子和信号肽对谷氨酰胺酶分泌表达的影响、构建能高效分泌表达谷氨酰胺酶的枯草芽孢杆菌(... 【背景】谷氨酰胺酶(glutaminase)是一种能够催化L-谷氨酰胺水解生成L-谷氨酸和氨的酶,在食品、医药等领域有重要的应用价值。【目的】研究不同启动子和信号肽对谷氨酰胺酶分泌表达的影响、构建能高效分泌表达谷氨酰胺酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌株,提高谷氨酰胺酶的产量。【方法】选用枯草芽孢杆菌SCK6作为表达宿主,构建带有不同启动子和信号肽的谷氨酰胺酶表达载体及重组菌株,分析不同基因元件对谷氨酰胺酶表达及分泌的影响,筛选最优启动子和信号肽,组合优化,构建高效分泌表达谷氨酰胺酶的工程菌株。【结果】实现了谷氨酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,在以P_(HpaII)-P_(aprE)为启动子、YndA为信号肽的条件下,摇瓶发酵胞外最高酶活达到6.7U/mL。【结论】通过对启动子、信号肽关键基因元件进行筛选组合,构建了一株高效分泌表达谷氨酰胺酶的菌株,为酶的高效分泌表达提供了一种有效的方法。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 谷氨酰胺酶 启动子 信号肽 分泌表达
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